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A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Beckman Research Institute of City of Hope

&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x6807;&#x8BB0;&#x7528;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30; (ES) &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411;&#x80F0;&#x817A;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x627F;&#x8BFA;&#x5E76;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3001; &#x809D;&#x810F;&#x3001; &#x5375;&#x9EC4;&#x56CA;&#x7B49;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B97;&#x65CF;&#x533A;&#x522B;&#x5F00;&#x6765;&#x8FD9;&#x6CBF;&#x88AD;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x540C;&#x4E00;&#x6027;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EA;&#x6709;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x800C;&#x80F0;&#x817A;&#x8868;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4E00;&#x548C;&#x4E8C;&#x3002;&#x5375;&#x9EC4;&#x56CA;&#x548C;&#x80CE;&#x809D;&#x6CA1;&#x6709;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x548C;&#x6211;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x5C11;&#x91CF;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; ES &#x6E90;&#x6027;&#x80DA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; monothio &#x7518;&#x6CB9;&#x548C; 15%&#x80CE;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x65E0;&#x8840;&#x6E05;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x5F15;&#x8D77;&#x8868;&#x793A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5411;&#x6211;&#x3001; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4E8C;&#x3001; pdx-1 &#xFF08;&#x80F0;&#x817A;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF09; &#x548C; Sox17 &#xFF08;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF09;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x67D3;&#x8272;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7C92;&#x5B50;&#x548C;&#x5176;&#x4ECE;&#x5934;&#x751F;&#x4EA7;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x67D3;&#x8272;&#x6CD5; C &#x80BD;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5168;&#x90E8;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20; + &#x6216; C-&#x80BD; + &#x7EC6;&#x80DE; coexpress &#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x3001; &#x5C55;&#x793A;&#x5230;&#x80F0;&#x817A;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5375;&#x9EC4;&#x56CA;&#x6216;&#x80CE;&#x809D;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x89C4;&#x8303;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x56E0;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7D20; &beta; B&#x3001; &#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x3001; &#x548C; exendin-4 &#x5230;&#x7A0D;&#x540E;&#x9636;&#x6BB5;&#x6587;&#x5316;&#x589E;&#x52A0; 2.73%&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x603B;&#x6570;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x63A7;&#x5236;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E0D;&#x5C11;&#x4E8E; 1%&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x9010;&#x6B65;&#x57F9;&#x517B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x6210;&#x4E3A;&#x65E9;&#x671F;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x80F0;&#x817A;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x81F4;&#x529B;&#x4E8E;&#x65E9;&#x671F;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x80F0;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

A panel of genetic markers was used to assess the in vitro commitment of murine embryonic stem (ES) cells toward the endoderm-derived pancreas and to distinguish insulin-expressing cells of this lineage from other lineages such as neuron, liver, and yolk sac. There are two nonallelic insulin genes in mice. Neuronal cells express only insulin II, whereas the pancreas expresses both insulin I and II. Yolk sac and fetal liver express predominately insulin II, small amounts of insulin I, and no glucagon. We found that ES-derived embryoid bodies cultured in the presence of stage-specific concentrations of monothio-glycerol and 15% fetal calf serum, followed by serum-free conditions, give rise to a population that expresses insulin I, insulin II, pdx-1 (a pancreas marker), and Sox17 (an endoderm marker). Immunohistochemical staining shows intracellular insulin particles, and its de novo production was confirmed by staining for C-peptide. Most, but not all, of the insulin+ or C-peptide+ cells coexpress glucagon, demonstrating a differentiation pathway to pancreas rather than yolk sac or fetal liver. Addition of beta-cell specification and differentiation factors activin beta B, nicotinamide, and exendin-4 to later-stage culture increased insulin-positive cells to 2.73% of the total population, compared with the control culture, which gave rise to less than 1% insulin-staining cells. These findings suggest that stepwise culture manipulations can direct ES cells to become early endocrine pancreas.

Committing embryonic stem cells to early endocrine pancreas in vitro.

Un panel de marqueurs g&#xE9;n&#xE9;tiques a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour &#xE9;valuer l&#x26;#39;engagement dans in vitro de souches embryonnaires murines (ES) des cellules du pancr&#xE9;as vers l&#x26;#39;endoderme d&#xE9;riv&#xE9; et de distinguer l&#x26;#39;insuline des cellules exprimant de cette lign&#xE9;e de lign&#xE9;es d&#x26;#39;autres tels que des neurones, le foie, et le sac vitellin. Il ya deux g&#xE8;nes non all&#xE9;liques d&#x26;#39;insuline chez la souris. Cellules neuronales exprimer l&#x26;#39;insuline seule II, alors que le pancr&#xE9;as exprime &#xE0; la fois l&#x26;#39;insuline I et II. Du sac vitellin et du foie du f&#x153;tus expresse d&#x26;#39;insuline essentiellement II, de petites quantit&#xE9;s de l&#x26;#39;insuline, et je ne le glucagon. Nous avons constat&#xE9; que ES d&#xE9;riv&#xE9;es de corps embryo&#xEF;des cultiv&#xE9;es en pr&#xE9;sence de la phase-sp&#xE9;cifiques des concentrations de monothio-glyc&#xE9;rol et 15% de s&#xE9;rum de veau foetal, suivie par un milieu sans s&#xE9;rum, donner lieu &#xE0; une population qui exprime l&#x26;#39;insuline I, l&#x26;#39;insuline II, PDX- 1 (un marqueur du pancr&#xE9;as), et Sox17 (un marqueur endoderme). La coloration immunohistochimique montre des particules d&#x26;#39;insuline intracellulaires, et sa production de novo a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par coloration pour le C-peptide. La plupart, mais pas tous, de l&#x26;#39;insuline + ou C-peptide + cellules coexpress glucagon, la d&#xE9;monstration d&#x26;#39;une voie de diff&#xE9;renciation au pancr&#xE9;as plut&#xF4;t que le sac vitellin ou le foie f&#x153;tal. Ajout de la sp&#xE9;cification des cellules b&#xEA;ta et des facteurs de diff&#xE9;renciation de l&#x26;#39;activine beta B, la nicotinamide, et exendine-4 &#xE0; un stade plus avanc&#xE9; de la culture a augment&#xE9; l&#x26;#39;insuline des cellules positives &#xE0; 2,73% de la population totale, par rapport &#xE0; la culture de contr&#xF4;le, qui a donn&#xE9; lieu &#xE0; moins de 1 % d&#x26;#39;insuline-coloration des cellules. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les manipulations de la culture par &#xE9;tapes peut diriger les cellules ES &#xE0; devenir pancr&#xE9;as endocrine d&#xE9;but.

S&#x26;#39;engager cellules souches embryonnaires pancr&#xE9;as endocrine pr&#xE9;coce in vitro

Begehen embryonalen Stammzellen zu fr&#xFC;h endokrinen Pankreas in vitro.

Un pannello di marcatori genetici &egrave; stato utilizzato per valutare l&#39;impegno in vitro di cellule staminali embrionali murine (ES) verso il pancreas derivato da endoderma e di distinguere le cellule che esprimono insulina di questo lignaggio da altri lignaggi quali il neurone, fegato e sacco vitellino. Ci sono due nonallelic insulina geni nei topi. Cellule neuronali express solo insulina II, mentre il pancreas esprime sia insulina I e II. Sacco vitellino e fegato fetale esprimono prevalentemente insulina II, piccole quantit&agrave; di insulina mi e no glucagone. Abbiamo trovato che ES-derivato embryoid corpi messi in coltura in presenza di fasi specifiche concentrazioni di monothio-glicerolo e 15% di siero fetale di vitello seguita da condizioni serum-free, danno luogo a una popolazione che esprime insulina ho, insulina II, pdx-1 (un marcatore del pancreas) e Sox17 (un marcatore endoderma). Colorazione immunoistochimica Mostra particelle intracellulari insulina e produzione de novo &egrave; stata confermata dalla colorazione per C-peptide. La maggior parte, ma non tutti, di insulina + o C-peptide + cellule coesprimere glucagone, dimostrando un percorso di differenziazione per pancreas, piuttosto che il sacco vitellino o fegato fetale. Aggiunta di beta-cellule specifiche e differenziazione fattori activin beta B, nicotinamide, ed exendin-4 alla fase successiva coltura aumentata cellule insulina-positive al 2,73% della popolazione totale, confrontata con la cultura del controllo, che ha dato luogo a meno di 1% cellule insulina-colorazione. Questi risultati suggeriscono che manipolazioni di cultura graduale possono indirizzare cellule ES per diventare primi pancreas endocrino.

Commettere le cellule staminali embrionali a inizio del pancreas endocrino in vitro.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x81B5;&#x81D3;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;ES&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;in vitro&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x3001;&#x5375;&#x9EC4;&#x56A2;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4ED6;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;2&#x975E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81B5;&#x81D3;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;I&#x304A;&#x3088;&#x3073;II&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;II&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5375;&#x9EC4;&#x56A2;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x809D;&#x81D3;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;II&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;I&#x3001;&#x5C11;&#x91CF;&#x306E;&#x3001;&#x7121;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;ES&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x80DA;&#x69D8;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;II&#x3001;PDX-&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;I&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;monothio-&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x7121;&#x8840;&#x6E05;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3092;15&#xFF05;&#x30A6;&#x30B7;&#x80CE;&#x5150;&#x8840;&#x6E05;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;1&#xFF08;&#x81B5;&#x81D3;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;SOX17&#xFF08;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#xFF09;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;de novo&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;C-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;+&#x307E;&#x305F;&#x306F;C-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;+&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5375;&#x9EC4;&#x56A2;&#x3084;&#x80CE;&#x4ED4;&#x809D;&#x81D3;&#x3088;&#x308A;&#x81B5;&#x81D3;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; &#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D3;&#x30F3;&#x3B2;A&#x3001;B&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x964D;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-4&#x306E;&#x4ED8;&#x52A0;&#x306F;1&#x672A;&#x6E80;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;&#x5BFE;&#x7167;&#x57F9;&#x990A;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x7DCF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;2.73&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#xFF05;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x67D3;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306A;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x81B5;&#x81D3;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

in vitro&#x3067;&#x521D;&#x671F;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x81B5;&#x81D3;&#x306B;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xD328;&#xB110; endoderm &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xC9C0;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD;, &#xAC04;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB178; &#xB978; &#xC790; &#xACE8;&#xBAA9; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC774;&#xC774; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950; &#xB450; nonallelic &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; II, I &#xBC0F; II &#xCDCC; &#xB450; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xB178; &#xB978; &#xC790; sac&#xC640; &#xD0DC;&#xC544; &#xAC04; &#xB098;&#xB294;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC544;&#xBB34; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; II, &#xC18C;&#xB7C9;&#xC758; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9D0;&#xC774; &#xC9C0; &#xD30C;&#xC0DD; embryoid &#xC2DC;&#xCCB4; &#xAD50;&#xC591; monothio-&#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864;&#xACFC; 15% &#xD0DC;&#xC544; &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0; &#xD608; &#xCCAD;, &#xD608; &#xCCAD; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC870;&#xAC74; &#xB4A4;&#xC758; &#xBB34;&#xB300; &#xD2B9;&#xC815; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC874;&#xC7AC; &#xB098;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; II, pdx-1 (&#xCDCC; &#xC7A5; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC790;) &#xBC0F; Sox17 &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAD6C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC904; &#xBC1C;&#xACAC; (endoderm &#xD45C;&#xC2DD;). &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; Immunohistochemical &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0; &#xACE0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC0DD;&#xC0B0; C-&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740;, &#xC804;&#xBD80;&#xB294; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; + &#xB610;&#xB294; C-&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; + &#xC140; coexpress &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4;, &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB178; &#xB978; &#xC790; sac &#xB610;&#xB294; &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xAC04; &#xBD84;&#xD654; &#xACBD;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294;. &#xCD94;&#xAC00; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xC0AC;&#xC591; &#xBC0F; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC694;&#xC778; activin &#xBCA0;&#xD0C0; B, &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC;, &#xBC0F; exendin-4 &#xB098;&#xC911; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; 1% &#xBBF8;&#xB9CC; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; 2.73%&#xB85C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC591;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC5BC;&#xB8E9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; stepwise &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xC791; &#xB420; &#xCD08;&#xAE30; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xCDCC; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC548;&#xB0B4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC77C;&#xCC0D; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC800;&#xC9C0;&#xB974;&#xACE0;.

Un panel de marcadores gen&#xE9;ticos se utiliz&#xF3; para evaluar el compromiso de in vitro de la madre embrionarias murinas (ES) hacia las c&#xE9;lulas del p&#xE1;ncreas derivado del endodermo y distinguir a la insulina, las c&#xE9;lulas que expresan de este linaje de otras estirpes, como las neuronas, el h&#xED;gado y el saco vitelino. Hay dos genes de la insulina nonallelic en ratones. C&#xE9;lulas neuronales expresar s&#xF3;lo insulina II, mientras que el p&#xE1;ncreas expresa tanto la insulina I y II. Del saco vitelino y el h&#xED;gado fetal expresan predominantemente la insulina II, peque&#xF1;as cantidades de insulina y glucag&#xF3;n que no. Hemos encontrado que derivados ES-cuerpos embrioides cultivaron en presencia de determinados etapa-concentraciones de monotio-glicerol y 15% de suero de ternera fetal, seguido por condiciones libres de suero, dan lugar a una poblaci&#xF3;n que expresa insulina I, II, insulina, PDX- 1 (un marcador de p&#xE1;ncreas), y Sox17 (un marcador endodermo). La tinci&#xF3;n inmunohistoqu&#xED;mica muestra part&#xED;culas intracelulares de insulina, y su producci&#xF3;n de novo fue confirmada por la tinci&#xF3;n de p&#xE9;ptido-C. La mayor&#xED;a, pero no todos, de la insulina + o p&#xE9;ptido C + c&#xE9;lulas coexpresan glucag&#xF3;n, demostrando una v&#xED;a de diferenciaci&#xF3;n de p&#xE1;ncreas en lugar de saco vitelino o h&#xED;gado fetal. La adici&#xF3;n de las c&#xE9;lulas beta especificaci&#xF3;n y factores de diferenciaci&#xF3;n activina beta B, nicotinamida, y exendina-4 a las etapas posteriores cultivo aument&#xF3; positivos insulina-c&#xE9;lulas a 2,73% de la poblaci&#xF3;n total, en comparaci&#xF3;n con el cultivo de control, lo que dio lugar a menos de 1 % de tinci&#xF3;n insulina-c&#xE9;lulas. Estos hallazgos sugieren que las manipulaciones paso a paso la cultura pueden dirigir a las c&#xE9;lulas madre embrionarias para convertirse en p&#xE1;ncreas endocrino temprano.

Cometer c&#xE9;lulas madre embrionarias para p&#xE1;ncreas endocrino A principios de Vitro

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;&#x65E9;&#x671F;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC; pancreata &#x5BF9;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x627F;&#x8BFA;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E30;&#x5BCC;&#x4E86;&#x65E9;&#x671F;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x6837; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5236;&#x5B9A;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7D20; 3 &#xFF08;Ngn3&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x80F0;&#x817A;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x662F;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x665A;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;20-30%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F; Ngn3-EGFP(+)&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; PancChip &#x82AF;&#x7247;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; Ngn3-EGFP(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x65B0;&#x578B;&#x534A;&#x56FA;&#x6001;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x4E3A;&#x4E86;&#x652F;&#x6301;&#x4E2A;&#x522B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;/C-&#x80BD;&#x8868;&#x8FBE;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x4ECE;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x7EA6; 0.1-0.6%&#x7684; Ngn3-EGFP(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F15;&#x8D77;&#x5BF9;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#xFF0C;&#x4E09;&#x81F3;&#x4E94;&#x500D;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x793A;&#x83CC;&#x843D;&#x5F62;&#x6210;&#x5355;&#x4F4D; &#xFF08;ICFUs&#xFF09;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4E8C;&#x3001; &#x867D;&#x7136; 69 %coexpressed &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6211;&#x548C; 44 %coexpressed &#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x6211;&#x3001; &#x4E8C;&#xFF0C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x548C; Pdx-1 (&#x80F0;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x80A0;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0;-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#xFF0C;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E; C &#x80BD; II &#x5728;&#x53CC;&#x91CD;&#x514D;&#x75AB;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027; ICFUs &#x548C;&#x5176;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x4E4B;&#x95F4;&#x91CD;&#x53E0;&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F15;&#x8D77;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x5F00;&#x53D1;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Previous studies describe a unique culture method for the commitment of murine embryonic stem cells to early endocrine pancreata. In this report, early pancreatic-like beta-cell progenitors were enriched and a colony assay devised to allow these progenitors to differentiate into insulin-expressing colonies in vitro. An embryonic stem cell line with enhanced green fluorescent protein (EGFP) inserted into one allele of neurogenin 3 (Ngn3), a marker for pancreatic endocrine progenitors, was differentiated. During the late stage of culture, 20-30% of cells were Ngn3-EGFP(+). Gene expression profiling using the PancChip microarray platform demonstrated that Ngn3-EGFP(+) cells differentially express endocrine-related genes. A novel semisolid culture method was developed to support the formation of individual insulin/C-peptide-expressing colonies from dissociated single cells. Approximately 0.1-0.6% of Ngn3-EGFP(+) cells gave rise to insulin-expressing colonies, a three- to fivefold enrichment of beta-cell-like progenitors, or insulin-expressing colony-forming units (ICFUs), compared with nonsorted cells. All of the single colonies expressed insulin II, while 69% coexpressed insulin I and 44% coexpressed glucagon. Some single colonies expressed insulin I, insulin II, and Pdx-1 (pancreatic duodenal homeobox-1), but not glucagon. In other colonies, glucagon expression overlapped with C-peptide II in double immunostaining analysis, suggesting heterogeneity among the ICFUs and their resulting colonies. Together, these results demonstrate that progenitors that have the potential to give rise to insulin-expressing cells can be derived from murine embryonic stem cells.

Insulin-expressing colonies developed from murine embryonic stem cell-derived progenitors.

Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures d&#xE9;crivent une m&#xE9;thode de culture unique pour l&#x26;#39;engagement des cellules souches embryonnaires murines &#xE0; pancr&#xE9;as endocrinien d&#xE9;but. Dans ce rapport, au d&#xE9;but du pancr&#xE9;as en forme de b&#xEA;ta-cellules prog&#xE9;nitrices ont &#xE9;t&#xE9; enrichies et un dosage de la colonie con&#xE7;u pour permettre &#xE0; ces prog&#xE9;niteurs &#xE0; se diff&#xE9;rencier en insuline exprimant colonies in vitro. Une ligne de cellules souches embryonnaires avec la prot&#xE9;ine fluorescente verte am&#xE9;lior&#xE9;e (EGFP) ins&#xE9;r&#xE9; dans un all&#xE8;le de neurog&#xE9;nine 3 (Ngn3), un marqueur de prog&#xE9;niteurs endocrines pancr&#xE9;atiques, a &#xE9;t&#xE9; diff&#xE9;renci&#xE9;e. Au cours de la phase tardive de la culture, 20-30% des cellules &#xE9;taient Ngn3-EGFP (+). Profilage de l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique par la plate-forme puces &#xE0; ADN PancChip d&#xE9;montr&#xE9; que les cellules Ngn3-EGFP (+) diff&#xE9;rentiellement exprimer endocrinien g&#xE8;nes li&#xE9;s. Une m&#xE9;thode de culture semi-solide roman a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour soutenir la formation de l&#x26;#39;insuline individuelle / C-peptide-exprimant colonies de cellules dissoci&#xE9;es simples. Environ 0,1-0,6% des Ngn3-EGFP (+) des cellules &#xE0; l&#x26;#39;insuline a donn&#xE9; lieu exprimant colonies, une p&#xE9;riode de trois &#xE0; cinq fois l&#x26;#39;enrichissement des cellules b&#xEA;ta-comme prog&#xE9;niteurs, ou insulino-exprimant unit&#xE9;s formant colonie (ICFUs), par rapport &#xE0; non tri&#xE9;e cellules. Toutes les colonies isol&#xE9;es ont exprim&#xE9; l&#x26;#39;insuline II, tandis que 69% d&#x26;#39;insuline coexprim&#xE9; I et 44% du glucagon coexprim&#xE9;. Certaines colonies simples ont exprim&#xE9; l&#x26;#39;insuline I, l&#x26;#39;insuline II, et PDX-1 (pancr&#xE9;as duod&#xE9;nal hom&#xE9;obox-1), mais pas de glucagon. Dans d&#x26;#39;autres colonies, l&#x26;#39;expression de glucagon se chevauchent avec le C-peptide II dans l&#x26;#39;analyse immunohistochimique double, sugg&#xE9;rant une h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; parmi les ICFUs et leurs colonies qui en r&#xE9;sultent. Ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que des prog&#xE9;niteurs qui ont le potentiel de donner naissance &#xE0; l&#x26;#39;insuline des cellules exprimant peuvent &#xEA;tre d&#xE9;riv&#xE9;es de cellules souches embryonnaires murines.

L&#x26;#39;insuline exprimant colonies d&#xE9;velopp&#xE9;es &#xE0; partir de cellules souches embryonnaires murines d&#xE9;riv&#xE9;es des prog&#xE9;niteurs

Fr&uuml;here Studien beschreiben eine einzigartige Kultur-Methode f&uuml;r das Engagement von murinen embryonalen Stammzellen f&uuml;r fr&uuml;he endokrine Pancreata. In diesem Bericht fr&uuml;hen Pankreas-wie Beta-Vorl&auml;uferzellen wurden angereichert und ein Kolonie-Assay entwickelt diese Vorl&auml;uferzellen, in Insulin-Ausdr&uuml;cken Kolonien in-vitro unterscheiden k&ouml;nnen. Eine embryonaler Stammzellen-Linie mit verbesserten gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (EGFP) in einem Allel von Neurogenin-3 (Ngn3), ein Marker f&uuml;r pankreatischen endokrinen Vorfahre, eingef&uuml;gt wurde unterschieden. W&auml;hrend der sp&auml;ten Phase der Kultur waren 20-30 % der Zellen Ngn3-EGFP(+). Gene Expression profiling mithilfe der PancChip-Microarray-Plattform gezeigt, dass Ngn3-EGFP(+) differentiell ausdr&uuml;cklich im Zusammenhang mit endokrinen Gene Zellen. Eine neuartige halbfeste Kultur-Methode wurde entwickelt, um die Bildung von einzelnen Insulin/C-Peptid-Ausdr&uuml;cken Kolonien von getrennten Einzelzellen zu unterst&uuml;tzen. Ca. 0.1-0.6 % Ngn3-EGFP(+) Zellen gab Anlass zu Insulin-Ausdr&uuml;cken Kolonien, eine drei-bis F&uuml;nffach Bereicherung der Beta-Zelle-wie Vorl&auml;uferzellen oder Insulin-Ausdr&uuml;cken Kolonienbildende Einheiten (ICFUs), unsortierte Zellen gegen&uuml;ber. Allen einzelnen Kolonien ausgedr&uuml;ckt Insulin II, w&auml;hrend 69 % Insulin coexpressed ich und 44 % coexpressed Glukagon. Einige einzelnen Kolonien ausgedr&uuml;ckt Insulin ich, Insulin II und Pdx-1 (Pankreas duodenal Homeobox-1), aber nicht Glukagon. In anderen Kolonien &uuml;berschnitten Glukagon Ausdruck mit C-Peptid II in doppelte Paraffinschnitten Analyse vorschl&auml;gt Heterogenit&auml;t unter den ICFUs und den daraus resultierenden Kolonien. Zusammen zeigen diese Ergebnisse, dass Vorl&auml;uferzellen, die das Potenzial zu Zellen Insulin-Ausdruck von murinen embryonalen Stammzellen abgeleitet werden k&ouml;nnen.

Insulin-Ausdr&uuml;cken Kolonien von murinen embryonalen Stammzellen Cell-derived Vorl&auml;uferzellen entwickelt.

Studi precedenti descrivono un metodo di coltura unica per l&#39;impegno di cellule staminali embrionali murine pancreata endocrino precoce. In questa relazione, primi progenitori di cellule beta del pancreas-come sono stati arricchiti e un dosaggio di Colonia ideato per consentire questi progenitori a differenziarsi in colonie che esprimono insulina in vitro. Una linea di cellule staminali embrionali con maggiore proteina fluorescente verde (EGFP) inserita in un allele di neurogenina 3 (Ngn3), un marker dei progenitori del pancreas endocrini, &egrave; stata differenziata. Durante la fase tarda della cultura, 20-30% delle cellule sono stati Ngn3-EGFP(+). Gene expression profiling utilizzando la piattaforma microarray PancChip dimostrato che Ngn3-EGFP(+) cellule geni differenzialmente espressi endocrine connesse. Un metodo di coltura semisolidi romanzo &egrave; stato sviluppato per supportare la formazione di colonie singole insulina/C-peptide-esprimendo da cellule singole dissociate. Circa 0,1-0,6% di cellule Ngn3-EGFP(+) ha dato origine a colonie che esprimono insulina, una tre-quintuplo arricchimento della beta-cellula-come progenitori, o insulina-esprimere unit&agrave; formanti colonia (ICFUs), confrontato con restituzione delle cellule. Tutte le singole colonie espresso insulina II, mentre il 69% coespressi insulina e 44% coespressi glucagone. Alcune colonie singole espresso insulina I, II, insulina e Pdx-1 (pancreatico duodenale homeobox-1), ma non glucagone. In altre colonie, espressione di glucagone sovrapposta con C-peptide II in doppia immunostaining analisi, suggerendo eterogeneit&agrave; tra le ICFUs e le loro colonie risultante. Insieme, questi risultati dimostrano che progenitori che hanno la potenzialit&agrave; di dare origine a cellule che esprimono insulina possono essere derivati da cellule staminali embrionali murine.

Colonie che esprimono insulina sviluppato da murini progenitori embrionali staminali cellule derivate.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x57F9;&#x990A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x81B5;&#x81D3;&#x3092;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x3001;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;in vitro&#x3067;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; neurogenin 3&#xFF08;Ngn3&#xFF09;&#x3001;&#x81B5;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;1&#x3064;&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;EGFP&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x5F8C;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;20-30&#xFF05;&#x306F;&#x3001;Ngn3-EGFP&#xFF08;+&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Ngn3-EGFP&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;PancChip&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x534A;&#x56FA;&#x4F53;&#x57F9;&#x990A;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;/ C-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x89E3;&#x96E2;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Ngn3-EGFP&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D04;0.1&#x304B;&#x3089;0.6&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3001;&#x4E09;&#x301C;5&#x500D;&#x306E;&#x3B2;-&#x7D30;&#x80DE;&#x69D8;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3084;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x5358;&#x4F4D;&#xFF08;ICFUs&#xFF09;&#x3001;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002; 69&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;I&#x304A;&#x3088;&#x3073;44&#xFF05;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;II&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;I&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;II&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PDX-1&#xFF08;&#x81B5;&#x81D3;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x8178;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-1&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;ICFUs&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x9593;&#x306E;&#x7570;&#x8CEA;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x5206;&#x6790;&#x3067;C-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;II&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;

&#xC77C;&#xCC0D; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; pancreata murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBB38;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCC98;&#xB7FC; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; progenitors &#xB18D;&#xCD95; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; progenitors &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xACE0;&#xC548;. &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP) neurogenin 3 (Ngn3), &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; progenitors&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xD6C4;&#xBC18; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 20-30 %ngn3-egfp(+) &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C4; &#xC2DD; PancChip microarray &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; Ngn3-EGFP(+) &#xCC28;&#xB3D9; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC124; semisolid &#xBB38;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95; &#xCC9C;&#xC5F0;&#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;/C-&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;-&#xD45C;&#xD604; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC57D; 0.1-0.6 %ngn3-egfp(+) &#xC140;&#xC758; nonsorted &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;, &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xAC19;&#xC740; progenitors &#xB610;&#xB294; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xD615;&#xC131; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; (ICFUs)&#xC758; &#xC624;&#xBD80; &#xB18D;&#xCD95; 3-&#xB294; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD45C;&#xD604; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; II, &#xB098; &#xD558; &#xACE0; 44% &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; coexpressed &#xB3D9;&#xC548; 69 %coexpressed &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;. &#xC77C;&#xBD80; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xB098;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; II, &#xBC0F; Pdx-1 (&#xCDCC; &#xC7A5; &#xC2ED;&#xC774;&#xC9C0; &#xC7A5; homeobox-1), &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xC2DD; C-&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; ii &#xB354;&#xBE14; immunostaining &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; ICFUs &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xB4E4;&#xC774; &#xACB9;&#xCCD0;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC744; &#xC57C;&#xAE30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; progenitors murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; progenitors&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Los estudios anteriores describen un m&#xE9;todo de cultivo &#xFA;nico para el compromiso de las c&#xE9;lulas madre embrionarias murinas de p&#xE1;ncreas endocrino temprano. En este informe, a principios de p&#xE1;ncreas-al igual que c&#xE9;lulas progenitoras de c&#xE9;lulas beta se enriquecieron y un ensayo de colonias dise&#xF1;ado para permitir a estos progenitores a la insulina se diferencian en que expresan las colonias in vitro. Una l&#xED;nea de c&#xE9;lulas troncales embrionarias con aumento de la prote&#xED;na verde fluorescente (EGFP) insertado en un alelo de neurogenina 3 (Ngn3), un marcador de c&#xE9;lulas progenitoras pancre&#xE1;ticas endocrinas, se diferenci&#xF3;. Durante la &#xFA;ltima etapa de la cultura, el 20-30% de las c&#xE9;lulas fueron Ngn3-EGFP (+). Perfil de expresi&#xF3;n gen&#xE9;tica utilizando la plataforma de microarrays PancChip demostrado que las c&#xE9;lulas Ngn3-EGFP (+) expresan diferencialmente relacionados con los genes del sistema endocrino. Un nuevo m&#xE9;todo de cultivo semis&#xF3;lido fue desarrollado para apoyar la formaci&#xF3;n de individual de insulina / p&#xE9;ptido C-que expresan las colonias de c&#xE9;lulas individuales disociados. Aproximadamente el 0,1-0,6% de Ngn3-EGFP (+) dio origen a las c&#xE9;lulas que expresan la insulina-colonias, de tres a cinco veces el enriquecimiento de las c&#xE9;lulas beta-como progenitores, o la insulina que expresan unidades formadoras de colonias (ICFUs), en comparaci&#xF3;n con el no ordenado c&#xE9;lulas. Todas las colonias individuales expresado insulina II, mientras que el 69% de insulina coexpressed I y 44% glucag&#xF3;n coexpressed. Algunas colonias individuales expresa insulina I, la insulina II, y PDX 1-(pancre&#xE1;tico duodenal homeobox-1), pero no glucag&#xF3;n. En otras colonias, la expresi&#xF3;n se superpon&#xED;a con el glucag&#xF3;n p&#xE9;ptido C II en el an&#xE1;lisis de doble inmunotinci&#xF3;n, lo que sugiere heterogeneidad entre los ICFUs y sus colonias resultantes. En conjunto, estos resultados demuestran que los progenitores que tienen el potencial para dar lugar a que expresan la insulina-c&#xE9;lulas se pueden derivar de c&#xE9;lulas madre embrionarias murinas.

Que expresan la insulina colonias desarrolladas a partir de c&#xE9;lulas madre embrionarias murinas derivadas de progenitores

Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures de la biologie des cellules souches pancr&#xE9;atiques se sont essentiellement fond&#xE9;s sur des analyses histologiques. Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes, utilisant le marquage et le tra&#xE7;age g&#xE9;n&#xE9;tique des prog&#xE9;niteurs, directs analyses de cellules uniques, des dosages des colonies, et l&#x26;#39;enrichissement de la population mineure de cellules prog&#xE9;nitrices &#xE0; travers l&#x26;#39;utilisation de marqueurs de surface cellulaire, ont fortement sugg&#xE9;r&#xE9; que les cellules prog&#xE9;nitrices du pancr&#xE9;as avec la fr&#xE9;quence et les diff&#xE9;rents potentiels de lignage, y compris les prog&#xE9;niteurs multipotentes qui donnent lieu &#xE0; endocrinien, exocrines et les cellules de conduits, existent dans le pancr&#xE9;as en d&#xE9;veloppement et les adultes. Dans cette revue, il est donc propos&#xE9; que les cellules prog&#xE9;nitrices pancr&#xE9;atiques peuvent &#xEA;tre organis&#xE9;es dans une hi&#xE9;rarchie, dans lequel les prog&#xE9;niteurs les plus primitifs multipotentes pan-pancr&#xE9;atiques sont au sommet et rare, et les prog&#xE9;niteurs monopotent sont &#xE0; la base et abondante. Ce mod&#xE8;le peut expliquer pourquoi seules les blessures drastiques conduire &#xE0; l&#x26;#39;activation effective du compartiment de cellules prog&#xE9;nitrices de la hi&#xE9;rarchie sup&#xE9;rieure, alors que dans l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre, la grossesse, et plus douces blessures, le recrutement de cellules matures pr&#xE9;existants ou de leurs prog&#xE9;niteurs imm&#xE9;diats monopotent pourrait &#xEA;tre suffisant pour restaurer l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie m&#xE9;tabolique . Il est &#xE9;galement propos&#xE9; que les cellules morphologiquement d&#xE9;finies canalaires sont susceptibles d&#x26;#39;&#xEA;tre fonctionnellement h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;ne et que l&#x26;#39;activit&#xE9; des cellules du syst&#xE8;me endocrinien cellules souches doivent &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9;s sur la base des analyses fonctionnelles plut&#xF4;t que lieux histologiques.

Minisynth&#xE8;se: cellules prog&#xE9;nitrices pancr&#xE9;atiques - Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes

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&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF1A; &#x80F0;&#x817A;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE; &mdash; &mdash; &#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Past studies of pancreatic progenitor cell biology relied mostly on histological analyses. Recent studies, using genetic labeling and tracing of progenitors, direct single cell analyses, colony assays, and enrichment of the minor population of progenitor cells through the use of cell surface markers, have strongly suggested that pancreatic progenitor cells with various frequency and lineage potentials, including the multipotent progenitors that give rise to endocrine, exocrine, and duct cells, exist in the developing and adult pancreas. In this review, it is therefore proposed that pancreatic progenitor cells may be organized in a hierarchy, in which the most primitive pan-pancreatic multipotent progenitors are at the top and rare, and the monopotent progenitors are at the bottom and abundant. This model may explain why only drastic injuries lead to effective activation of the progenitor cell compartment of the higher hierarchy, whereas under steady state, pregnancy, and milder injuries, recruitment of preexisting mature cells or their immediate monopotent progenitors could be sufficient to restore metabolic homeostasis. It is also proposed that the morphologically defined ductal cells are likely to be functionally heterogeneous and that endocrine progenitor cell activity should be determined based on functional analyses rather than histological locations.

Minireview: pancreatic progenitor cells--recent studies.

Fr&uuml;heren Studien des Pankreas Stammvater Zellbiologie st&uuml;tzte sich vor allem auf histologische Analysen. Neuere Studien &uuml;ber genetische Kennzeichnung und R&uuml;ckverfolgbarkeit von Vorl&auml;uferzellen, direkte Einzelzelle Analysen, Kolonie Proben und Bereicherung der Vorl&auml;uferzellen durch den Einsatz von Zelle Oberfl&auml;che Marker, kleinere Bev&ouml;lkerung haben dringend empfohlen, Pankreas Vorl&auml;uferzellen mit verschiedenen Frequenzen und Linie M&ouml;glichkeiten, einschlie&szlig;lich der multipotenten Vorl&auml;uferzellen, die endokrine, exokrine, und Duct Zellen, entstehen in der Entwicklungs- und Erwachsenen Bauchspeicheldr&uuml;se vorhanden sind. In diesem Bericht wird deshalb vorgeschlagen, Pankreas Vorl&auml;uferzellen organisiert in einer Hierarchie, in dem die primitivsten Pfanne-Pankreas multipotenten Vorl&auml;uferzellen sind oben und selten, und die Monopotent Vorl&auml;uferzellen sind unten werden k&ouml;nnen und reichlich vorhanden. Dieses Modell k&ouml;nnte erkl&auml;ren warum nur drastische Verletzungen zu effektive Aktivierung des Fachs Zelle Stammvater der h&ouml;heren Hierarchie f&uuml;hren, w&auml;hrend unter Steady-State, Schwangerschaft und mildere Verletzungen, Rekrutierung von bereits vorhandenen Reifen Zellen oder deren unmittelbaren Monopotent Vorl&auml;uferzellen ausreicht, um metabolische Hom&ouml;ostase wieder sein k&ouml;nnte. Es wird auch vorgeschlagen, die morphologisch definierten duktale Zellen sind wahrscheinlich funktional heterogene und dass endokrine Vorl&auml;uferzellen Zellaktivit&auml;t bestimmt werden sollte Funktionsanalysen anstatt histologische Standorte.

Minireview: Pankreas Vorl&auml;uferzellen--neuere Studien.

Ultimi studi di biologia delle cellule progenitrici del pancreas si basava principalmente sull&#39;analisi istologiche. Studi recenti, utilizzando la genetica etichettatura e rintracciabilit&agrave; dei progenitori, analisi diretta singola cella, dosaggi di Colonia e arricchimento della popolazione minore di cellule progenitrici attraverso l&#39;uso di marcatori di superficie cellulare, fortemente hanno suggerito che le cellule progenitrici del pancreas con vari potenziali di frequenza e lignaggio, compresi i progenitori multipotenti che danno origine al sistema endocrino, esocrino e le cellule del dotto, esistano nel pancreas adulto e in via di sviluppo. In questa recensione, si propone che le cellule progenitrici del pancreas possono essere organizzati in una gerarchia, in cui pi&ugrave; primitivi progenitori multipotenti pan-pancreatici sono al top e rare, e i progenitori monopotent sono in fondo e abbondante. Questo modello pu&ograve; spiegare perch&egrave; lesioni solo drastiche conducono all&#39;attivazione effettiva del vano delle cellule progenitrici della gerarchia superiore, mentre sotto dello stato stazionario, gravidanza e le lesioni pi&ugrave; lievi, reclutamento di cellule mature preesistenti o loro monopotent immediati progenitori potrebbero essere sufficiente a ripristinare l&#39;omeostasi metabolica. Si propone inoltre che le cellule morfologicamente definite duttale sono suscettibili di essere funzionalmente eterogenei e che deve essere determinato in attivit&agrave; delle cellule progenitrici endocrino basato su analisi funzionale piuttosto che percorsi istologiche.

Minireview: le cellule progenitrici del pancreas - studi recenti.

&#x81B5;&#x81D3;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x904E;&#x53BB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#x3001;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x81B5;&#x81D3;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F37;&#x304F;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x958B;&#x767A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x81B5;&#x81D3;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30F3;&#x81B5;&#x81D3;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x90E8;&#x3068;&#x7A00;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;monopotent&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5E95;&#x3068;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x968E;&#x5C64;&#x306B;&#x7DE8;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x629C;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x50B7;&#x5BB3;&#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x968E;&#x5C64;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x7406;&#x7531;&#x3060;&#x3051;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x306E;monopotent&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x3001;&#x598A;&#x5A20;&#x3001;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x50B7;&#x5BB3;&#x4E0B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E73;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x5747;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30DF;&#x30CB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#xFF1A;&#x81B5;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE; - &#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;

&#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xACFC;&#xAC70;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC720;&#xC804; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; progenitors, &#xC9C1;&#xC811; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC11D;, &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C; &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xCD94;&#xC801;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; exocrine, &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xBC0F; &#xB355;&#xD2B8; &#xC140;&#xC744; multipotent progenitors&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xBC0F; &#xD608;&#xD1B5; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; &#xCDCC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xAC74;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xD32C; &#xCDCC; multipotent progenitors &#xC0C1;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xB294; &#xB4DC;&#xBB38; &#xC77C;&#xC774; &#xACE0; monopotent progenitors &#xD558;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xB294; &#xACC4;&#xCE35; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB418; &#xACE0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xAE30;&#xC874; &#xC131;&#xC219; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC;, &#xC784;&#xC2E0;, &#xBC0F; &#xB354; &#xC628;&#xD654;&#xD55C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; monopotent progenitors &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB300;&#xC0AC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xD560; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC65C;&#xB9CC; &#xAE09;&#xACA9; &#xD55C; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC740; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xACC4;&#xCE35;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC815;&#xC758; ductal &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC218; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559; &#xC704;&#xCE58; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD55C;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;.

Minireview: &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;-&#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Estudios anteriores de la biolog&#xED;a de c&#xE9;lulas pancre&#xE1;ticas progenitoras se bas&#xF3; principalmente en los an&#xE1;lisis histol&#xF3;gicos. Estudios recientes, utilizando el etiquetado y el rastreo gen&#xE9;tico de los progenitores, directos de an&#xE1;lisis de c&#xE9;lulas individuales, los ensayos de la colonia, y el enriquecimiento de la poblaci&#xF3;n menor de c&#xE9;lulas progenitoras a trav&#xE9;s del uso de marcadores de superficie celular, han mostrado que las c&#xE9;lulas progenitoras pancre&#xE1;ticas con la frecuencia y el potencial de los diversos linajes, incluyendo las c&#xE9;lulas progenitoras multipotentes que dan lugar a endocrinas, exocrinas, y c&#xE9;lulas de los conductos, existen en el p&#xE1;ncreas en desarrollo y de adultos. En esta revisi&#xF3;n, lo que se propone que las c&#xE9;lulas progenitoras pancre&#xE1;ticas pueden ser organizadas en una jerarqu&#xED;a, en la que los m&#xE1;s primitivos pancre&#xE1;ticas progenitoras multipotentes pan-se encuentran en la parte superior y raros, y los progenitores monopotent est&#xE1;n en el fondo y abundante. Este modelo puede explicar por qu&#xE9; s&#xF3;lo las lesiones dr&#xE1;sticas conducir a la activaci&#xF3;n efectiva del compartimento de c&#xE9;lulas progenitoras de la jerarqu&#xED;a m&#xE1;s alta, mientras que en el estado de equilibrio, el embarazo y lesiones m&#xE1;s leves, el reclutamiento de c&#xE9;lulas preexistentes maduros o de sus progenitores inmediatos monopotent podr&#xED;a ser suficiente para restaurar la homeostasis metab&#xF3;lica . Tambi&#xE9;n se propone que las c&#xE9;lulas ductales morfol&#xF3;gicamente definidos es probable que sean funcionalmente heterog&#xE9;nea y que la actividad de c&#xE9;lulas progenitoras endocrina debe ser determinado en base a los an&#xE1;lisis funcionales, m&#xE1;s que lugares histol&#xF3;gicos.

Minirevisi&#xF3;n: las c&#xE9;lulas pancre&#xE1;ticas progenitoras - Estudios recientes

&#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xB300;&#xC0AC; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xC640; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xC774;&#xBBF8; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;.

&#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC740; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La insulina es un componente cr&#xED;tico de control metab&#xF3;lico, y como tal, la expresi&#xF3;n del gen de insulina ha sido el foco de un amplio estudio. Secuencias de ADN que regulan la transcripci&#xF3;n del gen de la insulina y la mayor&#xED;a de los factores reguladores ya han sido identificados. Sin embargo, s&#xF3;lo recientemente otros componentes de la expresi&#xF3;n de insulina gen ha investigado, y en este estudio se examina el papel de la metilaci&#xF3;n del ADN en la regulaci&#xF3;n del rat&#xF3;n y la expresi&#xF3;n del gen de insulina humana.

La expresi&#xF3;n de insulina gen est&#xE1; regulada por metilaci&#xF3;n del ADN

&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x662F;&#x4EE3;&#x8C22;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x3002;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x8C03;&#x8282;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x8C03;&#x63A7;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4EC5;&#x6700;&#x8FD1;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x67E5;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x53D7; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;

Insulin is a critical component of metabolic control, and as such, insulin gene expression has been the focus of extensive study. DNA sequences that regulate transcription of the insulin gene and the majority of regulatory factors have already been identified. However, only recently have other components of insulin gene expression been investigated, and in this study we examine the role of DNA methylation in the regulation of mouse and human insulin gene expression.

Insulin gene expression is regulated by DNA methylation.

L&#x26;#39;insuline est une composante essentielle du contr&#xF4;le m&#xE9;tabolique, et en tant que telle, l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne d&#x26;#39;insuline a fait l&#x26;#39;objet d&#x26;#39;une &#xE9;tude approfondie. Des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN qui r&#xE9;gulent la transcription du g&#xE8;ne d&#x26;#39;insuline et la majorit&#xE9; des facteurs de r&#xE9;gulation ont d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. Toutefois, c&#x26;#39;est seulement r&#xE9;cemment que les autres composantes de l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne d&#x26;#39;insuline &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s, et dans cette &#xE9;tude, nous examinons le r&#xF4;le de la m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN dans la r&#xE9;gulation de la souris et l&#x26;#39;expression humaine g&#xE8;ne de l&#x26;#39;insuline.

Expression g&#xE8;ne de l&#x26;#39;insuline est r&#xE9;glement&#xE9;e par m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN

Insulin ist eine wichtige Komponente der Stoffwechseleinstellung, und als solches Insulin-Genexpression wurde der Schwerpunkt der umfangreichen Studie. DNA-Sequenzen, die Transkription des Insulin-Gens und die Mehrheit der regulatorischen Faktoren Regeln wurden bereits identifiziert. Jedoch untersuchen nur vor kurzem andere Komponenten der Insulin-Genexpression untersucht werden, und in dieser Studie wir die Rolle der DNA-Methylierung in der Verordnung von Maus und Humaninsulin Genexpression.

Insulin-Gen-Ausdrucks wird durch DNA-Methylierung geregelt.

L&#39;insulina &egrave; un componente critico del controllo metabolico, e come tale, espressione di gene di insulina &egrave; stata al centro del vasto studio. Sequenze di DNA che regolano la trascrizione del gene dell&#39;insulina e la maggior parte dei fattori normativi sono gi&agrave; state identificate. Tuttavia, solo recentemente sono stati indagati altri componenti dell&#39;espressione del gene insulina e in questo studio esamina il ruolo della metilazione del DNA nel regolamento di mouse e di espressione del gene dell&#39;insulina umana.

Espressione del gene insulina &egrave; regolata da metilazione del DNA.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x8840;&#x7CD6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x3046;&#x3044;&#x3046;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;DNA&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

(ES) &#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7B49;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x96BE;&#x4EE5;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x53EF;&#x9760;&#x7684; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x521B;&#x5EFA;&#x5177;&#x6709;&#x6210;&#x672C;&#x6548;&#x76CA;&#x7684;&#x7535;&#x9540;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x80F0;&#x817A; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7ACB;&#x5373;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x6761;&#x4EF6;&#x5DF2;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x53D1;&#x7535;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x672C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x5730;&#x6620;&#x5C04;&#x672A;&#x6765;&#x7B5B;&#x67E5;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x987A;&#x5E8F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x591A;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0; epiblast&#x3001; &#x660E;&#x786E;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x3001; &#x524D;&#x5185;&#x810F;&#x53EB;&#x548C;&#x80F0;&#x817A;&#x5B97;&#x65CF;&#x8DDF;&#x968F;&#x6A21;&#x4EFF;&#x80F0;&#x817A;&#x4E2A;&#x4F53;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x7531;&#x80F0;&#x817A;&#x548C;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x80A0;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2; 1 &#x6216; 1 &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x9A71;&#x52A8;&#x6B63;&#x786E;&#x8868;&#x793A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBF;&#x88AD;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x975E;&#x5E38;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x5206;&#x5316; &#xFF08;&#x7B2C; 2-3 &#x5929;) Sox17&#xFF0C;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x547D;&#x8FD0;&#x51B3;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x5F3A;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;Neurogenin3&#xFF0C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x8868;&#x8FBE;&#x9636;&#x6BB5;&#x65F6;&#x80F0;&#x817A;&#x548C;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x80A0;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0; 1 &#x6D88;&#x606F;&#x662F;&#x76EE;&#x524D; (10-16 &#x5929;)&#x3002;&#x5F3A;&#x8FEB;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE; (&#x5929; 16 &#x548C; 25&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x9A6C;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x80F0;&#x817A;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x5F3A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; 2 &#x548C;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6FC0;&#x9176;&#x53CA;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x53CD;&#x5E94;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;20 &#x5929;&#x7EC6;&#x80DE;&#x690D;&#x5165;&#x4F53;&#x5185;&#x9020;&#x6210;&#x80F0;&#x817A;&#x6837;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x5316;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5F52;&#x7EB3;&#x7684;&#x8BC9;&#x8BBC;&#x548C;&#x80F0;&#x817A;&#x53D1;&#x80B2;&#x884C;&#x4E3A;&#x5E76;&#x5C06;&#x5B9D;&#x8D35;&#x4ECA;&#x540E;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7684; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x80F0;&#x817A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8868;&#x5F81;&#xFF1A; &#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Embryonic stem (ES) cell technology may serve as a platform for the discovery of drugs to treat diseases such as diabetes. However, because of difficulties in establishing reliable ES cell differentiation methods and in creating cost-effective plating conditions for the high-throughput format, screening for molecules that regulate pancreatic beta cells and their immediate progenitors has been limited. A relatively simple and inexpensive differentiation protocol that allows efficient generation of insulin-expressing cells from murine ES cells was previously established in our laboratories. In this report, this system is characterized in greater detail to map developmental cell stages for future screening experiments. Our results show that sequential activation of multiple gene markers for undifferentiated ES cells, epiblast, definitive endoderm, foregut, and pancreatic lineages was found to follow the sequence of events that mimics pancreatic ontogeny. Cells that expressed enhanced green fluorescent protein, driven by pancreatic and duodenal homeobox 1 or insulin 1 promoter, correctly expressed known beta cell lineage markers. Overexpression of Sox17, an endoderm fate-determining transcription factor, at a very early stage of differentiation (days 2-3) enhanced pancreatic gene expression. Overexpression of neurogenin3, an endocrine progenitor cell marker, induced glucagon expression at stages when pancreatic and duodenal homeobox 1 message was present (days 10-16). Forced expression (between days 16 and 25) of MafA, a pancreatic maturation factor, resulted in enhanced expression of insulin genes, glucose transporter 2 and glucokinase, and glucose-responsive insulin secretion. Day 20 cells implanted in vivo resulted in pancreatic-like cells. Together, our differentiation assay recapitulates the proceedings and behaviors of pancreatic development and will be valuable for future screening of beta cell effectors.

Characterization of an in vitro differentiation assay for pancreatic-like cell development from murine embryonic stem cells: detailed gene expression analysis.

Souches embryonnaires technologie de la pile (ES) peut servir de plate-forme pour la d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments pour traiter des maladies telles que le diab&#xE8;te. Toutefois, en raison de difficult&#xE9;s &#xE0; &#xE9;tablir des m&#xE9;thodes fiables de la diff&#xE9;renciation des cellules ES et en cr&#xE9;ant les conditions de placage rapport co&#xFB;t-efficacit&#xE9; pour le format &#xE0; haut d&#xE9;bit, le criblage pour des mol&#xE9;cules qui r&#xE9;gulent les cellules b&#xEA;ta pancr&#xE9;atiques et leurs prog&#xE9;niteurs imm&#xE9;diats a &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9;e. Un protocole de diff&#xE9;renciation relativement simple et peu co&#xFB;teuse qui permet la g&#xE9;n&#xE9;ration efficace de l&#x26;#39;insuline des cellules exprimant &#xE0; partir de cellules ES murines a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tabli pr&#xE9;c&#xE9;demment dans nos laboratoires. Dans ce rapport, ce syst&#xE8;me est caract&#xE9;ris&#xE9; plus en d&#xE9;tail &#xE0; la carte stades cellulaires de d&#xE9;veloppement pour les futures exp&#xE9;riences de criblage. Nos r&#xE9;sultats montrent que l&#x26;#39;activation s&#xE9;quentielle de marqueurs de g&#xE8;nes multiples pour les cellules ES indiff&#xE9;renci&#xE9;es, l&#x26;#39;&#xE9;piblaste, l&#x26;#39;endoderme d&#xE9;finitif, l&#x26;#39;intestin ant&#xE9;rieur, et lignages du pancr&#xE9;as a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; &#xE0; suivre la s&#xE9;quence des &#xE9;v&#xE9;nements qui imite pancr&#xE9;atique ontogen&#xE8;se. Les cellules qui expriment la prot&#xE9;ine fluorescente verte am&#xE9;lior&#xE9;e, entra&#xEE;n&#xE9;e par hom&#xE9;obo&#xEE;te pancr&#xE9;atique et duod&#xE9;nal 1 ou insuline 1 promoteur, correctement exprim&#xE9; connus b&#xEA;ta marqueurs lign&#xE9;e de cellules. La surexpression de Sox17, un endoderme destin d&#xE9;terminer le facteur de transcription, &#xE0; un stade tr&#xE8;s pr&#xE9;coce de la diff&#xE9;renciation (2-3 jours) am&#xE9;lior&#xE9; l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes du pancr&#xE9;as. La surexpression de neurogenin3, un marqueur des cellules prog&#xE9;nitrices du syst&#xE8;me endocrinien, induit l&#x26;#39;expression de glucagon &#xE0; des stades o&#xF9; hom&#xE9;obo&#xEE;te pancr&#xE9;atique et duod&#xE9;nal 1 message &#xE9;tait pr&#xE9;sent (jours 10-16). Expression forc&#xE9;e (entre 16 et 25 jours) de MafA, un facteur de maturation du pancr&#xE9;as, conduit &#xE0; une expression accrue de g&#xE8;nes d&#x26;#39;insuline, des transporteurs de glucose 2 et glucokinase, et le glucose-sensible s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;insuline. Jour 20 cellules implant&#xE9;es in vivo conduit &#xE0; pancr&#xE9;atique des cellules de type. Ensemble, nos r&#xE9;capitule les proc&#xE9;dures d&#x26;#39;essai de diff&#xE9;renciation et les comportements du d&#xE9;veloppement du pancr&#xE9;as et sera utile pour le d&#xE9;pistage futur des effecteurs des cellules b&#xEA;ta.

Caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un test de diff&#xE9;renciation in vitro pour le d&#xE9;veloppement de cellules pancr&#xE9;atiques de type de cellules souches embryonnaires murines: Analyse d&#xE9;taill&#xE9;e d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique

Embryonale Stammzellen (ES)-Zelltechnologie dienen als Plattform f&uuml;r die Entdeckung der Medikamente zur Behandlung von Krankheiten wie Diabetes. Jedoch aufgrund von Schwierigkeiten bei der Schaffung verl&auml;sslicher ES Zell-Differenzierung Methoden und kosteng&uuml;nstige Beschichtung zu schaffen wurde die Bedingungen f&uuml;r das Format Hochdurchsatz-screening f&uuml;r Molek&uuml;le, die pankreatischen Betazellen und ihren unmittelbaren Vorfahren Regeln beschr&auml;nkt. Eine relativ einfache und kosteng&uuml;nstige Differenzierung-Protokoll, das erm&ouml;glicht die effiziente Erzeugung von Insulin-Ausdruck Zellen von murinen ES-Zellen wurde zuvor in unseren Labors gegr&uuml;ndet. In diesem Bericht zeichnet sich dieses System genauer zuordnen developmental Cell Stufen f&uuml;r zuk&uuml;nftige Screening-Experimente. Unsere Ergebnisse zeigen, dass sequenzielle Aktivierung mehrerer gen Marker f&uuml;r undifferenzierte ES-Zellen, Epiblast, definitive Endodermis, Vorderdarm und Pankreas-&Uuml;bertragungslinien wurde festgestellt, dass um die Abfolge der Ereignisse zu folgen, die Pankreas Ontogenese nachahmt. Zellen, die verbessertes gr&uuml;nes fluoreszierendes Protein, angetrieben von Bauchspeicheldr&uuml;se und Zw&ouml;lffingerdarm Homeobox 1 oder Insulin 1 Promoter, ausgedr&uuml;ckt ausgedr&uuml;ckt richtig bekannte Beta-Zelle Abstammung Marker. Eine &Uuml;berexpression von Sox17, eine Endodermis Schicksal entscheidet &Uuml;bertragungfaktor, in einem sehr fr&uuml;hen Stadium der Differenzierung (Tage 2-3) verbesserte Pankreas Genexpression. Eine &Uuml;berexpression von neurogenin3, eine endokrine Vorl&auml;uferzellen Zelle Marker, induzierte Glukagon Ausdruck in Phasen beim Pankreas und Zw&ouml;lffingerdarm Homeobox 1 Nachricht war (10-16 Tage) zu pr&auml;sentieren. Erzwungene Ausdruck (zwischen 16-25 Tage) der MafA, Pankreas Reifung Faktor, f&uuml;hrte zu verst&auml;rkten Ausdruck der Insulin-gen, Glucosetransporter 2 und Glucokinase und Glukose-responsive Insulin-Sekretion. Tag 20 Zellen implantiert in-vivo f&uuml;hrte Pankreas-&auml;hnlichen Zellen. Gemeinsam unsere Differenzierung-Assay rekapituliert die Verfahren und Verhaltensweisen der Pankreas Entwicklung und werden wertvoll f&uuml;r zuk&uuml;nftige Screening der Beta-Zelle Effektoren.

Charakterisierung eines in-vitro-Differenzierung-Tests f&uuml;r Pankreas-wie Zell-Entwicklung von murinen embryonalen Stammzellen: detaillierte Genexpressionsanalyse.

Tecnologia delle cellule staminali embrionali (ES) pu&ograve; servire come piattaforma per la scoperta di farmaci per il trattamento di malattie come il diabete. Tuttavia, a causa delle difficolt&agrave; a stabilire affidabili ES cell metodi di differenziazione e nella creazione di placcatura conveniente le condizioni per il formato di high-throughput screening di molecole che regolano le cellule beta del pancreas e i loro immediati progenitori &egrave; stata limitata. Un protocollo di differenziazione relativamente semplice e poco costoso che permette la generazione efficiente di cellule che esprimono insulina dalle cellule ES murine precedentemente stabilito nei nostri laboratori. In questa relazione, questo sistema &egrave; caratterizzato in maggiore dettaglio per mappare le fasi dello sviluppo delle cellule per lo screening futuri esperimenti. I nostri risultati mostrano che attivazione sequenziale dei marcatori multipli del gene per cellule ES indifferenziate, epiblast, endoderma definitivo, apparentemente e lignaggi del pancreas &egrave; stato trovato a seguire la sequenza di eventi che imita ontogenesi del pancreas. Le cellule che esprime una maggiore proteina fluorescente verde, guidata da pancreatico e duodenali homeobox 1 o promotore di insulina 1, espresso correttamente marcatori lignaggio noto delle cellule beta. Sovraespressione di Sox17, un fattore di trascrizione destino-determinazione di endoderma, in una fase molto precoce di differenziazione (2-3 giorni) aumentata espressione del gene del pancreas. Sovraespressione di neurogenin3, un marcatore delle cellule progenitrici endocrino, indotta da espressione di glucagone in fasi quando pancreatico e duodenali homeobox 1 messaggio era presente (giorni 10-16). Espressione forzata (tra i 16 e 25 giorni) di MafA, un fattore di maturazione del pancreas, ha provocato una maggiore espressione di geni insulina, trasportatore di glucosio 2 e glucochinasi e secrezione di insulina glucosio-sensibli a reagire. Giorno 20 celle impiantato le cellule del pancreas-come ha portate in vivo. Insieme, il nostro test di differenziazione ricapitola i procedimenti e i comportamenti dello sviluppo del pancreas e sar&agrave; prezioso per lo screening del futuro di beta cellule effettori.

Caratterizzazione di un saggio di differenziazione in vitro per lo sviluppo delle cellule del pancreas-come da cellule staminali embrionali murine: dettagliate analisi di espressione genica.

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SOX17&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x3054;&#x304F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#xFF08;&#x65E5;2-3&#xFF09;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x3002; neurogenin3&#x3001;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x81B5;&#x81D3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x8178;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;1&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x6BB5;&#x968E;&#xFF08;&#x65E5;10-16&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MAFA&#x306E;&#x5F37;&#x5236;&#x767A;&#x73FE;&#xFF08;&#x65E5;16&#x301C;25&#x306E;&#x9593;&#xFF09;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x6210;&#x719F;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;2&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5897;&#x5F37;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x79FB;&#x690D;20&#x65E5;&#x76EE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x3001;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x624B;&#x7D9A;&#x53CA;&#x3073;&#x884C;&#x52D5;&#x3084;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3002;

&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x81B5;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x69D8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;in vitro&#x5206;&#x5316;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES) &#xC804;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC220; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xB4F1; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; ES &#xC218;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC29;&#xBC95; &#xC140; &#xBC0F; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAE08;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC989;&#xC2DC; progenitors&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Murine ES &#xC138;&#xD3EC; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xD6C4; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; epiblast, &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; endoderm, foregut, &#xBC0F; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xACC4;&#xBCF4; &#xCDCC; ontogeny &#xBAA8;&#xBC29; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC21C;&#xC11C;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; undifferentiated ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBC0F; &#xC2ED;&#xC774;&#xC9C0; &#xC7A5; homeobox 1 &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; 1 &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Overexpression Sox17, &#xD55C; endoderm &#xC6B4;&#xBA85; &#xACB0;&#xC815; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; (&#xC77C; 2-3)&#xC758; &#xC544;&#xC8FC; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xD5A5;&#xC0C1;. Neurogenin3, &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC; &#xC870; &#xC140; &#xD45C;&#xC2DD; overexpression &#xC720;&#xB3C4; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xC2DD; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB54C; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBC0F; &#xC2ED;&#xC774;&#xC9C0; &#xC7A5; homeobox 1 &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0; (10 &#xC6D4; 16 &#xC77C;)&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. (&#xC77C; 16, 25) &#xC0AC;&#xC774; MafA, &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC131;&#xC219; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAC15;&#xC81C; &#xC2DD; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; 2&#xC640; glucokinase, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xBC18;&#xC751; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC2DD; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xD558;&#xB8E8; 20 &#xC140; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC98;&#xB7FC; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC808;&#xCC28; &#xBC0F; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xCE58;&#xAC00; &#xC788;&#xC744; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xAC19;&#xC740; &#xC804;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;: &#xC0C1;&#xC138; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D;.

Madre embrionarias (ES) la tecnolog&#xED;a de c&#xE9;lulas puede servir como una plataforma para el descubrimiento de medicamentos para tratar enfermedades como la diabetes. Sin embargo, debido a las dificultades en el establecimiento de m&#xE9;todos fiables ES diferenciaci&#xF3;n celular y en la creaci&#xF3;n de condiciones efectivas de costo-planchas para el formato de alto rendimiento, la detecci&#xF3;n de las mol&#xE9;culas que regulan las c&#xE9;lulas beta del p&#xE1;ncreas y sus progenitores inmediatos ha sido limitada. Una diferenciaci&#xF3;n relativamente simple y barato protocolo que permite la generaci&#xF3;n eficiente de la insulina-c&#xE9;lulas que expresan a partir de c&#xE9;lulas embrionarias murinas se estableci&#xF3; previamente en nuestros laboratorios. En este informe, este sistema se caracteriza en mayor detalle para asignar las etapas de desarrollo de c&#xE9;lulas para los experimentos de cribado en el futuro. Nuestros resultados muestran que la activaci&#xF3;n secuencial de m&#xFA;ltiples marcadores gen&#xE9;ticos de las c&#xE9;lulas madre embrionarias no diferenciadas, epiblasto, endodermo definitivo, intestino anterior, y los linajes de p&#xE1;ncreas se encontr&#xF3; a seguir la secuencia de eventos que imita la ontogenia de p&#xE1;ncreas. Las c&#xE9;lulas que expresaban la prote&#xED;na verde fluorescente mejorado, impulsado por el p&#xE1;ncreas y el duodeno homeobox 1 o promotor de la insulina 1, expresado correctamente conocidos marcadores beta linaje de c&#xE9;lulas. La sobreexpresi&#xF3;n de Sox17, un endodermo destino, la determinaci&#xF3;n de factor de transcripci&#xF3;n, en una fase muy temprana de la diferenciaci&#xF3;n (d&#xED;as 2-3) una mayor expresi&#xF3;n de genes de p&#xE1;ncreas. La sobreexpresi&#xF3;n de neurogenin3, un marcador de c&#xE9;lulas progenitoras endocrinas, indujo la expresi&#xF3;n de glucag&#xF3;n en una fase en homeobox de p&#xE1;ncreas y duodeno 1 mensaje estaba presente (d&#xED;as 10-16). La expresi&#xF3;n forzada (entre los d&#xED;as 16 y 25) de AFP, un factor de maduraci&#xF3;n de p&#xE1;ncreas, se tradujo en una mayor expresi&#xF3;n de genes de la insulina, los transportadores de glucosa 2 y glucoquinasa, y la secreci&#xF3;n de glucosa-sensible a la insulina. D&#xED;a 20 c&#xE9;lulas implantadas in vivo como resultado de p&#xE1;ncreas-c&#xE9;lulas. Juntos, nuestros recapitula ensayo de diferenciaci&#xF3;n de los procedimientos y comportamientos del desarrollo del p&#xE1;ncreas y ser&#xE1; de gran valor para la investigaci&#xF3;n futura de los efectores de c&#xE9;lulas beta.

Caracterizaci&#xF3;n de un ensayo de diferenciaci&#xF3;n in vitro para el Desarrollo de la c&#xE9;lula pancre&#xE1;tica tipo de c&#xE9;lulas madre embrionarias murinas: An&#xE1;lisis detallado Expresi&#xF3;n G&#xE9;nica

Hsun Teresa Ku

Department of Diabetes,
Endocrinology and Metabolism,
The Irell & Manella Graduate School of Biological Sciences,
Department of Diabetes, Endocrinology and Metabolism

Beckman Research Institute of City of Hope

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

Hsun Teresa Ku

Department of Diabetes,Endocrinology and Metabolism,The Irell & Manella Graduate School of Biological Sciences,Department of Diabetes, Endocrinology and Metabolism

Beckman Research Institute of City of Hope

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

Department of Diabetes,
Endocrinology and Metabolism,
The Irell & Manella Graduate School of Biological Sciences,
Department of Diabetes, Endocrinology and Metabolism