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Method for the Isolation and Identification of mRNAs, microRNAs and Protein Components of Ribonucleoprotein Complexes from Cell Extracts using RIP-Chip

As a result of the development of high-throughput sequencing and efficient microarray analysis, global gene expression analysis has become an easy and ...

University of Missouri

&#x5373; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;) &#x8C03;&#x8282; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x534F;&#x8C03;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5982;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;-uridylate-&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;&#x963F;&#x745E;&#x65AF;&#xFF09; 3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x533A; &#xFF08;&#x7F16;&#x7801;&#xFF09; &#x7684; mRNA &#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x5546;&#x4E1A;&#x60EF;&#x4F8B;&#x73E5; posttranscriptionally &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86; IL 4&#x3001; IL-13 &#x548C;&#x5176;&#x4ED6; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x9650;&#x5236;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x662F;&#x8F74;&#x627F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;Th2 &#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x662F;&#x73E5;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x5750;&#x6807;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x63A7; Th2 &#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x5728;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x589E;&#x52A0;&#x540E; restimulation Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E2D;&#x3001; &#x5728;&#x4EBA;&#x7684;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x548C; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; Th2 &#x503E;&#x659C;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x73E5;&#x5C06;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x4E2D;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x6C89;&#x6DC0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x7684;&#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#x4E2D;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x73E5;&#x4E13;&#x95E8;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5176; 3&#39;UTR&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x548C;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x73E5;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x523A;&#x6FC0;&#x589E;&#x52A0;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x89E3;&#x548C;&#x5B83;&#x6B63;&#x9762;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 mRNA &#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#xFF0C;&#x4E0E; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5E76;&#x884C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x73E5;&#x9A71;&#x52A8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x63A7;&#x5236;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x73E5;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; Th2 &#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x53EF;&#x80FD;&#x6539;&#x53D8;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x54EE;&#x5598;&#x60A3;&#x8005;&#x6C14;&#x9053;&#x708E;&#x75C7;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x7531; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x73E5;&#x534F;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; 3 &#x548C; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

The posttranscriptional mechanisms whereby RNA-binding proteins (RBPs) regulate T cell differentiation remain unclear. RBPs can coordinately regulate the expression of functionally related genes via binding to shared regulatory sequences, such as the adenylate-uridylate-rich elements (AREs) present in the 3' untranslated region (UTR) of mRNA. The RBP HuR posttranscriptionally regulates IL-4, IL-13, and other Th2 cell-restricted transcripts. We hypothesized that the ARE-bearing GATA-3 gene, a critical regulator of Th2 polarization, is under HuR control as part of its coordinate posttranscriptional regulation of the Th2 program. We report that in parallel with stimulus-induced increase in GATA-3 mRNA and protein levels, GATA-3 mRNA half-life is increased after restimulation in the human T cell line Jurkat, in human memory and Th2 cells, and in murine Th2-skewed cells. We demonstrate by immunoprecipitation of ribonucleoprotein complexes that HuR associates with the GATA-3 endogenous transcript in human T cells and found, using biotin pulldown assay, that HuR specifically interacts with its 3'UTR. Using both loss-of-function and gain-of-function approaches in vitro and in animal models, we show that HuR is a critical mediator of stimulus-induced increase in GATA-3 mRNA and protein expression and that it positively influences GATA-3 mRNA turnover, in parallel with selective promotion of Th2 cytokine overexpression. These results suggest that HuR-driven posttranscriptional control plays a significant role in T cell development and effector function in both murine and human systems. A better understanding of HuR-mediated control of Th2 polarization may have utility in altering allergic airway inflammation in human asthmatic patients.

Coordinate regulation of GATA-3 and Th2 cytokine gene expression by the RNA-binding protein HuR.

Les m&eacute;canismes post-transcriptionnelle par lequel les prot&eacute;ines de liaison &agrave; l&#39;ARN (pratiques commerciales restrictives) r&eacute;glementent la diff&eacute;renciation des cellules T demeurent incertains. Pratiques commerciales restrictives peuvent coordonner r&eacute;gulent l&#39;expression de g&egrave;nes fonctionnellement li&eacute;s par la liaison &agrave; des s&eacute;quences r&eacute;gulatrices partag&eacute;es, telles que les &eacute;l&eacute;ments de l&#39;ad&eacute;nylate-uridylate-rich (AREs) pr&eacute;sents dans la r&eacute;gion 3&#39; non traduite (UTR) de l&#39;ARNm. Le HuR RBP r&eacute;gule posttranscriptionally IL-4, IL-13 et autres les transcriptions restreints aux cellules Th2. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que le g&egrave;ne sont porteuses GATA-3, un r&eacute;gulateur critique de polarisation Th2, est sous contr&ocirc;le de HuR dans le cadre de sa r&eacute;gulation post-transcriptionnelle coordonn&eacute;e du programme Th2. Les auteurs rapportent que parall&egrave;lement &agrave; l&#39;augmentation induite par la stimulation de GATA-3 niveaux d&#39;ARNm et de prot&eacute;ines, Half-Life 3-GATA ARNm est augment&eacute;e apr&egrave;s restimulation dans la lign&eacute;e humaine T Jurkat, dans la m&eacute;moire humaine et les cellules Th2 et dans des cellules Th2-biais&eacute;. Nous d&eacute;montrer par immunopr&eacute;cipitation des complexes ribonucl&eacute;oprot&eacute;iques qui HuR associe la transcription endog&egrave;ne GATA-3 dans les cellules T humaines et constat&eacute;, par dosage de pulldown biotine, qui HuR sp&eacute;cifiquement interagit avec ses 3&#39;UTR. &Agrave; l&#39;aide de tant de perte de fonction et de gain de fonction des approches in vitro et sur des mod&egrave;les animaux, nous montrons que HuR est un m&eacute;diateur critique d&#39;augmentation induite par la stimulation des expression ARNm et de prot&eacute;ines de GATA-3 et qu&#39;il influe positivement sur le chiffre d&#39;affaires-GATA-3 ARNm, en parall&egrave;le avec la promotion s&eacute;lective de la surexpression de cytokines Th2. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;actionnement post-transcriptionnel HuR joue un r&ocirc;le important dans la fonction de d&eacute;veloppement et d&#39;effecteur des cellules T dans les syst&egrave;mes murins et humains. Une meilleure compr&eacute;hension de la m&eacute;diation HuR contr&ocirc;le de polarisation Th2 peut avoir utilit&eacute; dans l&#39;alt&eacute;ration de l&#39;inflammation des voies respiratoires allergiques chez des patients asthmatiques humains.

Coordonn&eacute;e de la r&eacute;gulation de l&#39;expression des g&egrave;nes de cytokines GATA-3 et Th2 par la prot&eacute;ine de liaison &agrave; l&#39;ARN HuR.

Die Posttranscriptionale Mechanismen, die bei dem RNA-bindende Proteine (RBPs) T-Zell-Differenzierung regulieren bleiben unklar. RBPs kann coordinately regulieren die Expression von verwandeten Genen &uuml;ber Bindung an gemeinsame regulatorische Sequenzen, wie z. B. die Adenylat-Uridylate-Reich-Elemente (AREs) in der 3&#39; un&uuml;bersetzte Region (UTR) der mRNA. Die RBP-HuR regelt posttranscriptionally IL-4, IL-13 und andere Th2-Zelle-eingeschr&auml;nkte-Transkripte. Wir die Hypothese, dass das sind tragende GATA-3 gen, ein wichtiger Regulator der Th2-Polarisation, als Teil seiner Koordinaten Posttranscriptionale Regulation des Programms Th2 HuR Kontrolle unterliegt. Wir berichten, dass parallel zu den Reiz-induzierten Anstieg GATA-3 mRNA und Protein, GATA-3 mRNA-Halbwertszeit nach Restimulation in der menschlichen T-Zell-Linie Jurkat, im menschlichen Ged&auml;chtnis und Th2 Zellen und in murinen verzerrt, Th2 Zellen erh&ouml;ht wird. Wir demonstrieren durch Immunopr&auml;zipitation-Gebiets-komplexe, die die GATA-3 endogene Abschrift in den menschlichen T-Zellen HuR zuordnet und gefunden, Biotin-Pulldown-Probe, die HuR, die speziell mit interagiert mit seiner 3&#39;UTR. Anhand der Verlustfunktion und Gain of Function Ans&auml;tze in vitro und in Tiermodellen zeigen wir, dass HuR ein kritischer Vermittler von Reiz-induzierte Zunahme GATA-3-mRNA und Protein-Expression und GATA-3 mRNA Umsatz, parallel zu selektive F&ouml;rderung von Th2 Cytokine &Uuml;berexpression positiv beeinflusst. Diese Ergebnisse legen nahe, dass HuR-gesteuerte Posttranscriptionale Kontrolle eine bedeutende Rolle in T-Zell-Entwicklung und Effektor-Funktion sowohl murinen und menschliche Systeme spielt. Ein besseres Verst&auml;ndnis der HuR-vermittelte Kontrolle der Th2-Polarisierung m&ouml;glicherweise Dienstprogramm allergischen Atemwegsentz&uuml;ndung in menschlichen Asthma-Patienten zu &auml;ndern.

Verordnung der GATA-3 und Th2-Zytokin-Genexpression durch die RNS-bindene Protein HuR zu koordinieren.

I meccanismi di posttranscriptional per cui RNA-binding proteins (RBPs) regolano la differenziazione delle cellule T rimangono poco chiari. RBPs coordinately possono regolare l&#39;espressione di geni funzionalmente correlati tramite associazione di sequenze regolatrici condivise, come ad esempio gli elementi ricchi di adenilato-uridylate (AREs) presenti della regione 3&#39; non tradotte (UTR) del mRNA. Il HuR RBP regola posttranscriptionally IL-4, IL-13 e altre Th2 cellula-restricted trascrizioni. Abbiamo ipotizzato che il gene sono-cuscinetto GATA-3, un critico di regolazione della polarizzazione Th2, &egrave; sotto il controllo di HuR come parte del suo regolamento di posttranscriptional coordinata del programma Th2. Segnaliamo che in parallelo con indotta da stimolo aumento dei livelli di mRNA e proteine GATA-3, Half-Life GATA-3 mRNA &egrave; aumentato dopo restimulation nella linea di cellule T umane Jurkat, nella memoria umana e le cellule Th2 e nelle cellule Th2 distorta murine. Noi dimostrare di immunoprecipitazione dei complessi ribonucleoproteina che HuR associa con trascrizione GATA-3 endogena nelle cellule T umane e trovato, usando analisi di pulldown biotina, che HuR interagisce specificamente con il 3&#39;UTR. Utilizzando approcci sia della funzione di perdita e guadagno di funzione in vitro e in modelli animali, mostriamo che HuR &egrave; un mediatore critico di stimolo indotto aumento di espressione di mRNA e proteine GATA-3 e che esso influenza positivamente fatturato GATA-3 mRNA, in parallelo con la promozione selettiva della sovraespressione di citochine Th2. Questi risultati suggeriscono che controllo posttranscriptional HuR-driven gioca un ruolo significativo nella funzione sviluppo ed effettrici delle cellule T in sistemi murini e umani. Una migliore comprensione del controllo HuR-mediata della polarizzazione Th2 pu&ograve; avere utilit&agrave; nell&#39;alterare infiammazione allergica delle vie aeree nei pazienti asmatici umani.

Coordinare regolamento GATA-3 e Th2 cytokine espressione di gene RNA-binding protein HuR.

Whereby RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (Rbp) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x3002;Rbp &#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB; &#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178; &#xFF0D; &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x8981;&#x7D20; (&#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;)&#x3001;3&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x306E; mRNA &#x306E; (UTR) &#x5B58;&#x5728;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x898F;&#x5236;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RBP &#x30CF;&#x30FC; posttranscriptionally &#x30BB;&#x30EB;&#x5236;&#x9650; IL-4, IL-13, &#x3068;&#x4ED6;&#x306E; Th2 &#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30AC;&#x30BF; 3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; Th2 &#x5206;&#x6975;&#x306E;&#x5EA7;&#x6A19;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x8ABF;&#x7BC0; Th2 &#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x74B0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D9;&#x30F3;&#x30CF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3002;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8A98;&#x8D77;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x4E26;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; Jurkat&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8A18;&#x61B6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Th2 &#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE; Th2 &#x504F;&#x3063;&#x3066;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x518D;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; HuR &#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 &#x5185;&#x751F;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;HuR &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x304C;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x305D;&#x306E; 3&#39;UTR&#x3002;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x5229;&#x5F97;&#x95A2;&#x6570;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;HuR &#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x8A98;&#x8D77;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 mRNA &#x306E;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3001;&#x4E26;&#x5217; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x63A8;&#x9032;&#x306B;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HuR &#x99C6;&#x52D5;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Th2 &#x504F;&#x5149;&#x306E; HuR &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x6DF1;&#x3081;&#x308B;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3072;&#x3068;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x5598;&#x606F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x6027;&#x6C17;&#x9053;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AC;&#x30FC;&#x30BF; 3 &#x3068; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; HuR &#x5EA7;&#x6A19;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Posttranscriptional &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RBPs) T &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RBPs 3&#39; &#xB9DE;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; (UTR) Mrna&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC874;&#xC7AC; adenylate uridylate &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; (AREs) &#xAC19;&#xC740; &#xACF5;&#xC720; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; coordinately &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RBP &#xD5C8; posttranscriptionally IL-4, IL-13, &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; Th2 &#xC138;&#xD3EC; &#xC81C;&#xD55C; &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Th2 &#xD3B8;&#xAD11;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB294; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; GATA-3 &#xC720;&#xC804;&#xC790; Th2 &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC88C;&#xD45C;&#xB294; posttranscriptional &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB85C; &#xD5C8; &#xD1B5;&#xC81C;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; GATA 3 Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xBCD1;&#xB82C;&#xB85C; restimulation &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; Jurkat, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xC5B5;&#xACFC; Th2 &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; murine Th2 &#xBE44;&#xC6B0;&#xB294; &#xC140; &#xD6C4; GATA 3 mRNA &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5C8; GATA 3 &#xC0DD; &#xB300; &#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; ribonucleoprotein &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0; &#xBC1C;&#xACAC;, biotin &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5C8; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; 3&#39;UTR. &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC774;&#xB4DD; &#xD568;&#xC218; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5C8; GATA 3 Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; GATA 3 mRNA &#xD68C;&#xC804;&#xC728; Th2 cytokine overexpression&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC2B9;&#xACA9;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5C8; &#xC81C;&#xC5B4; posttranscriptional &#xC81C;&#xC5B4; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; murine &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD55C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Th2 &#xD3B8;&#xAD11;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD5C8; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCC9C;&#xC2DD; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC54C;&#xB808;&#xB974;&#xAE30; &#xAE30;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC5D0; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD5C8; &#xC5EC; GATA 3 &#xBC0F; Th2 &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC815;.

Los mecanismos postranscripcional por el RNA-proteinas (restrictivas) regulan la diferenciaci&oacute;n de la c&eacute;lula T todav&iacute;a no est&aacute;n claros. Pr&aacute;cticas comerciales restrictivas coordinadamente pueden regular la expresi&oacute;n de genes funcionalmente relacionados mediante la Uni&oacute;n a secuencias reguladoras compartidas, como los elementos ricos en adenilato-uridylate (AREs) presentes en la regi&oacute;n 3&#39; no traducida (UTR) de ARNm. La RBP HuR regula posttranscriptionally IL-4, IL-13 y otras Th2 restringidos celular transcripciones. Presumimos que el gen GATA son-cojinete-3, un regulador cr&iacute;tico de polarizaci&oacute;n Th2, est&aacute; bajo control de HuR como parte de su regulaci&oacute;n postranscripcional coordinar del programa Th2. Se reporta que en paralelo con el aumento inducido por el est&iacute;mulo en los niveles de mRNA y prote&iacute;na de GATA-3, vida media del mRNA de la GATA-3 se incrementa despu&eacute;s de restimulation en la l&iacute;nea de c&eacute;lulas T humanas Jurkat, en la memoria humana y las c&eacute;lulas Th2 y en c&eacute;lulas Th2 asim&eacute;tricos murinas. Nosotros demostrar por inmunoprecipitaci&oacute;n de complejos de Ribonucleoprote&iacute;na que HuR asocia la transcripci&oacute;n end&oacute;gena de la GATA-3 en c&eacute;lulas T humanas y encontramos, usando an&aacute;lisis de telecine de la biotina, que HuR interact&uacute;a espec&iacute;ficamente con sus 3&#39;UTR. Utilizando los enfoques tanto de p&eacute;rdida de funci&oacute;n y de ganar-de-funci&oacute;n in vitro y en modelos animales, mostramos que HuR es un mediador cr&iacute;tico de aumento inducido por el est&iacute;mulo en la expresi&oacute;n de mRNA y prote&iacute;na de GATA-3 y que influye positivamente en facturaci&oacute;n de mRNA de la GATA-3, en paralelo con la promoci&oacute;n selectiva de sobreexpresi&oacute;n de citoquina Th2. Estos resultados sugieren que basadas en HuR postranscripcional control juega un papel importante en funci&oacute;n de desarrollo y efectoras de la c&eacute;lula de T en los sistemas humanos y murinos. Una mejor comprensi&oacute;n de HuR mediada por el control de polarizaci&oacute;n Th2 puede tener utilidad en la alteraci&oacute;n de la inflamaci&oacute;n al&eacute;rgica de las v&iacute;as respiratorias en pacientes asm&aacute;ticos humanos.

Garrett M. Dahm

Molecular Microbiology and Immunology,
Department of Surgery

University of Missouri

Method for the Isolation and Identification of mRNAs, microRNAs and Protein Components of Ribonucleoprotein Complexes from Cell Extracts using RIP-Chip

Garrett M. Dahm

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Molecular Microbiology and Immunology,Department of Surgery

University of Missouri

Method for the Isolation and Identification of mRNAs, microRNAs and Protein Components of Ribonucleoprotein Complexes from Cell Extracts using RIP-Chip

Molecular Microbiology and Immunology,
Department of Surgery