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Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Cold Spring Harbor Laboratory

University of Oslo and Oslo University Hospital

&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; (MMP) 13 (&#x80F6;&#x539F;&#x9176; 3) &#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x9176;&#xFF0C;&#x6700;&#x65E9;&#x521B;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5B83;&#x53C2;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5728;&#x808C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;&#x591A;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x95F4; T &#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D; &#xFF08;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53;-PyMT&#xFF09; &#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x7A0B; Mmp13 mRNA &#x5F3A;&#x70C8;&#x6709;&#x589E;&#x9AD8;&#x4E0E;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x4FB5;&#x88AD;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x764C;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;Mmp13 mRNA &#x662F;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x808C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027; II &#x7EA7;&#x548C; III &#x764C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x826F;&#x6027;&#x5E74;&#x7EA7;&#x6211;&#x548C;&#x4E8C;&#x4E73;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5185;&#x7624;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426; MMP13 &#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7A7F;&#x8FC7;&#x4E86;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53;-PyMT &#x4E0E; Mmp13 &#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;MMP13 &#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3001; &#x8840;&#x7BA1;&#x3001; &#x80BF;&#x7624;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x5C55;&#x6216;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x80BA;&#x90E8;&#xFF0C;&#x548C; MMP13 &#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E0D;&#x901A;&#x8FC7;&#x8865;&#x507F;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x8868;&#x8FBE;&#x6216;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8584;&#x80F6;&#x539F;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53;-PyMT &#xFF1B;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53;-PyMT &#xFF1B; Mmp13(-/-)Mmp13(+/+) &#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x80F6;&#x539F;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E2D;&#x7684; MMP13 &#x6CA1;&#x6709;&#x88AB;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; Mmp13 mRNA &#x5728;&#x808C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x764C;&#x5728;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53; PyMT &#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7EAA;&#x8981;&#x6307;&#x51FA;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MMP13 &#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x764C;&#x76F8;&#x5173;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D78;&#x6DA6;&#x764C;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5B83;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5728;&#x4E1C;&#x65B9;&#x660E;&#x73E0;&#x79FB;&#x52A8;&#x591A;&#x5A92;&#x4F53; PyMT &#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x5BF9;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 13 &#x88AB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x4E2D;&#x95F4; T &#x6297;&#x539F;&#x9A71;&#x52A8;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x800C;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

Matrix metalloproteinase (MMP) 13 (collagenase 3) is an extracellular matrix remodeling enzyme that is induced in myofibroblasts during the earliest invasive stages of human breast carcinoma, suggesting that it is involved in tumor progression. During progression of mammary carcinomas in the polyoma virus middle T oncogene mouse model (MMTV-PyMT), Mmp13 mRNA was strongly upregulated concurrently with the transition to invasive and metastatic carcinomas. As in human tumors, Mmp13 mRNA was found in myofibroblasts of invasive grade II and III carcinomas, but not in benign grade I and II mammary intraepithelial neoplasias. To determine if MMP13 plays a role in tumor progression, we crossed MMTV-PyMT mice with Mmp13 deficient mice. The absence of MMP13 did not influence tumor growth, vascularization, progression to more advanced tumor stages, or metastasis to the lungs, and the absence of MMP13 was not compensated for by expression of other MMPs or tissue inhibitor of metalloproteinases. However, an increased fraction of thin collagen fibrils was identified in MMTV-PyMT;Mmp13(-/-) compared to MMTV-PyMT;Mmp13(+/+) tumors, showing that collagen metabolism was altered in the absence of MMP13. We conclude that the expression pattern of Mmp13 mRNA in myofibroblasts of invasive carcinomas in the MMTV-PyMT breast cancer model recapitulates the expression pattern observed in human breast cancer. Our results suggest that MMP13 is a marker of carcinoma-associated myofibroblasts of invasive carcinoma, even though it does not make a major contribution to tumor progression in the MMTV-PyMT breast cancer model.

Matrix metalloproteinase 13 is induced in fibroblasts in polyomavirus middle T antigen-driven mammary carcinoma without influencing tumor progression.

M&eacute;talloprot&eacute;inase matricielle (MMP) 13 (collag&eacute;nase 3) est une enzyme induite dans les myofibroblastes durant les premiers stades envahissantes du carcinome mammaire humain, ce qui sugg&egrave;re qu&#39;il est impliqu&eacute; dans la progression tumorale de remodelage de la matrice extracellulaire. Au cours de la progression des carcinomes mammaires dans le mod&egrave;le murin de virus du polyome moyen T oncog&egrave;ne (MMTV-dat&eacute;), Mmp13 ARNm a fortement augment&eacute; en m&ecirc;me temps que la transition vers des carcinomes invasifs et m&eacute;tastatiques. Comme dans les tumeurs humaines, Mmp13 ARNm a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; en myofibroblastes d&#39;invasif de grade II et carcinomes III, mais pas en grade b&eacute;nigne j&#39;et II les n&eacute;oplasies intra&eacute;pith&eacute;liales mammaires. Pour d&eacute;terminer si MMP13 joue un r&ocirc;le dans la progression tumorale, nous avons travers&eacute; MMTV-dat&eacute; du souris sur des souris d&eacute;ficientes Mmp13. L&#39;absence de MMP13 n&#39;a pas influenc&eacute; la croissance tumorale, la vascularisation, la progression &agrave; des stades plus avanc&eacute;s de tumeur ou des m&eacute;tastases aux poumons, et l&#39;absence de MMP13 ne &eacute;tait pas compens&eacute;e par l&#39;expression des autres MPM ou inhibiteur tissulaire des m&eacute;talloprot&eacute;inases. Toutefois, une fraction d&#39;une augmentation de fibrilles de collag&egrave;ne mince a &eacute;t&eacute; identifi&eacute;e en MMTV-dat&eacute; ;Mmp13(-/-) par rapport &agrave; MMTV-dat&eacute; ;Tumeurs Mmp13(+/+), montrant que le m&eacute;tabolisme du collag&egrave;ne a &eacute;t&eacute; chang&eacute; en l&#39;absence de MMP13. Nous concluons que le mod&egrave;le d&#39;expression d&#39;ARNm de Mmp13 en myofibroblastes de carcinomes invasifs dans le mod&egrave;le de cancer du sein MMTV-PyMT reprend le mod&egrave;le d&#39;expression observ&eacute; dans le cancer du sein humain. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que MMP13 est un marqueur des myofibroblastes associ&eacute;s &agrave; carcinome de carcinome invasif, m&ecirc;me s&#39;il ne fait pas de fa&ccedil;on majeure &agrave; la progression tumorale dans le mod&egrave;le de cancer du sein MMTV-PyMT.

M&eacute;talloprot&eacute;inase matricielle 13 est induite dans les fibroblastes en polyomavirus moyen T pilot&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne carcinome mammaire sans influencer la progression tumorale.

Matrix metalloproteinase (MMP) 13 (collagenasi 3) &egrave; una matrice extracellulare che ritocca enzima che viene indotta in miofibroblasti durante le prime fasi invasive del carcinoma mammario umano, suggerendo che &egrave; coinvolto nella progressione del tumore. Durante la progressione dei carcinomi mammari in polyoma virus medio T oncogene del mouse modello (MMTV-PyMT), Mmp13 mRNA era fortemente sovraregolati concomitanza con il passaggio al carcinoma invasivo e metastatico. Come in tumori umani, Mmp13 mRNA &egrave; stato trovato in miofibroblasti di invasivo di grado II e III carcinomi, ma non in grado benigno io e mammarie neoplasie intraepiteliali II. Per determinare se MMP13 gioca un ruolo nella progressione del tumore, abbiamo attraversato topi MMTV-PyMT con Mmp13 topi carenti. L&#39;assenza di MMP13 non influenzare la crescita del tumore, vascolarizzazione, progressione verso stadi pi&ugrave; avanzati di tumore o metastasi ai polmoni, e l&#39;assenza di MMP13 non &egrave; stata compensata da espressione di altre MMP o tessuto inibitore della metalloproteinasi. Tuttavia, una maggiore frazione delle fibrille di collagene sottile &egrave; stata identificata in MMTV-PyMT;Mmp13(-/-) rispetto al MMTV-PyMT;Tumori Mmp13(+/+), mostrando che metabolismo del collagene &egrave; stato alterato in assenza di MMP13. Possiamo concludere che il modello di espressione del mRNA di Mmp13 in miofibroblasti di carcinomi invasivi nel modello di cancro al seno MMTV-PyMT ricapitola il pattern di espressione osservato nel cancro al seno umano. I nostri risultati suggeriscono che la MMP13 &egrave; un marcatore di miofibroblasti associato al carcinoma del carcinoma invasivo, anche se non ha un importante contributo alla progressione del tumore nel modello di cancro al seno MMTV-PyMT.

Matrix metalloproteinase 13 &egrave; indotta nei fibroblasti in poliomavirus medio T antigene-driven mammario carcinoma senza influenzare la progressione del tumore.

&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;MMP&#xFF09; 13 (&#x30B3;&#x30E9;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x816B;&#x760D;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x80F8;&#x764C;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;&#x65E9;&#x3044;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x82BD;&#x304C;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Polyoma &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x9593; T &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#xFF08;MMTV-PyMT) &#x306E;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;Mmp13 mRNA &#x767A;&#x73FE;&#x4EA2;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x4FB5;&#x8972;&#x3068;&#x8EE2;&#x79FB;&#x6027;&#x764C;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x4E26;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x5F37;&#x304F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3072;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;Mmp13 mRNA &#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x82BD;&#x306E;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9; II &#x3068; III &#x764C;&#x3067;&#x3082;&#x826F;&#x6027;&#x306E;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;II &#x4E73;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;MMP13 &#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Mmp13 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; MMTV PyMT &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x6E21;&#x3063;&#x305F;&#x3002;MMP13 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;, &#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;, &#x9032;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x80BA;&#x3078;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3068; MMP13 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4ED6;&#x306E; Mmp &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8584;&#x3044;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;&#x5897;&#x52A0; MMTV-PyMT &#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MMTV-PyMT &#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066; Mmp13(-/-)&#x3002;Mmp13(+/+) &#x816B;&#x760D;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x4EE3;&#x8B1D; MMP13 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x793A;&#x3002;MMTV PyMT &#x4E73;&#x623F;&#x764C;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x764C;&#x306E;&#x82BD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Mmp13 mRNA &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3072;&#x3068;&#x4E73;&#x764C;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MMTV PyMT &#x4E73;&#x623F;&#x764C;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3078;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x306A;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A; MMP13 &#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x6D78;&#x6F64;&#x764C;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.

&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; 13 &#x4E2D;&#x9593; T &#x30DD;&#x30EA;&#x30AA;&#x30FC;&#x30DE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6297;&#x539F;&#x99C6;&#x52D5;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; metalloproteinase (MMP) 13 (&#xCF5C;&#xB77C; 3) &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC720; &#xBC29; &#xC554; &#xCD08;&#xAE30; &#xCE68;&#xC785; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; myofibroblasts&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720; &#xBC29; carcinomas polyoma &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; T oncogene &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378; (MMTV PyMT)&#xC758; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Mmp13 mRNA &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; upregulated &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xCE68;&#xB7B5;&#xACFC; &#xC804;&#xC774;&#xC131; carcinomas&#xB85C; &#xC804;&#xD658; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; Mmp13 mRNA &#xBC1C;&#xACAC; &#xC591;&#xC131; &#xD559;&#xB144;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xCE68;&#xB7B5; &#xD559;&#xB144; II&#xC758; myofibroblasts &#xBC0F; III carcinomas, I &#xBC0F; II &#xC720; &#xBC29; intraepithelial &#xD615;&#xC131;. MMP13 &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; MMTV PyMT Mmp13 &#xACB0;&#xD54D; &#xC0DD;&#xC950;&#xC640; &#xC950;&#xB97C; &#xAC74; &#xB11C; &#xB2E4;. MMP13 &#xBD80;&#xC7AC; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;, vascularization, &#xACE0;&#xAE09; &#xC885;&#xC591; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC804;&#xC774; &#xD3D0;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; mmp13&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; Mmps&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB610;&#xB294; metalloproteinases&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC587;&#xC740; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC18C;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84;&#xC218; MMTV PyMT;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C;Mmp13(-/-) MMTV-PyMT;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;Mmp13(+/+) &#xC885;&#xC591;, &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xADF8; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xB300;&#xC0AC; mmp13&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCE68;&#xB7B5; carcinomas MMTV PyMT &#xC720; &#xBC29; &#xC554; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; myofibroblasts&#xC5D0; Mmp13 Mrna&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xD328;&#xD134; &#xD45C;&#xD604;&#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xBC29;&#xC554;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC774; &#xACB0;&#xB860;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; MMP13 &#xCE68; &#xC724; &#xC131; &#xC554;&#xC758; &#xC554;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; myofibroblasts&#xC758; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB294; &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xAC83; MMTV PyMT &#xC720; &#xBC29; &#xC554; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xD070; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;.

&#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; metalloproteinase 13&#xC740; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC5C6;&#xC774; &#xC720; &#xBC29; &#xC554; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC624; &#xC911; T&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;.

Metaloproteinasa de la matriz (MMP) 13 (colagenasa 3) es una matriz extracelular remodelaci&oacute;n enzima que se induce en miofibroblastos durante las etapas m&aacute;s tempranas invasivas del carcinoma de mama humano, sugiriendo que est&aacute; implicada en la progresi&oacute;n tumoral. Durante la progresi&oacute;n de los carcinomas mamarios en el virus polyoma medio T oncogene modelo murino (MMTV-pago), Mmp13 mRNA era fuertemente upregulated simult&aacute;neamente con la transici&oacute;n a carcinomas invasores y metast&aacute;ticos. Como en los tumores humanos, Mmp13 mRNA fue encontrado en miofibroblastos invasivo grado II y III carcinomas, pero no en grado benigno I y neoplasias intraepiteliales mamarias de II. Para determinar si MMP13 juega un papel en la progresi&oacute;n tumoral, cruzamos ratones MMTV-pago con ratones deficientes de Mmp13. La ausencia de MMP13 no influy&oacute; en el crecimiento del tumor, vascularizaci&oacute;n, progresi&oacute;n a etapas m&aacute;s avanzadas de tumor o met&aacute;stasis a los pulmones, y la ausencia de MMP13 no fue compensada por la expresi&oacute;n de otras MMPs o inhibidor de tejido de metaloproteinasas. Sin embargo, una fracci&oacute;n creciente de las fibrillas de col&aacute;geno fino fue identificada en MMTV-pago;Mmp13(-/-) comparado con MMTV-pago;Mmp13(+/+) tumores, mostrando que eso metabolismo del col&aacute;geno fue alterado en la ausencia de MMP13. Concluimos que el patr&oacute;n de expresi&oacute;n de mRNA de Mmp13 en miofibroblastos de carcinomas invasores en el modelo de c&aacute;ncer de mama de MMTV-pago recapitula el patr&oacute;n de expresi&oacute;n observado en el c&aacute;ncer de mama humano. Nuestros resultados sugieren que el MMP13 es un marcador de miofibroblastos asociada a carcinoma de carcinoma invasor, a pesar de que no hace una contribuci&oacute;n importante a la progresi&oacute;n del tumor en el modelo de c&aacute;ncer de mama de MMTV-pago.

Metaloproteinasa de la matriz 13 es inducida en fibroblastos en carcinoma mamario ant&iacute;geno-conducido media T polyomavirus sin influir en la progresi&oacute;n tumoral.

&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7531;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5E76;&#x884C;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x56E0;&#x7D20;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x95F4;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x5E94;&#x7528;&#x591A;&#x8272;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x5206;&#x6790;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4E0D;&#x540C;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x540C;&#x6837;&#x6D3B;&#x8001;&#x9F20;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x76D1;&#x7BA1; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;Tregs&#xFF09; &#x8FC1;&#x79FB;&#x5728;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x63A5;&#x8FD1;&#x3002;Dendritic &#x6837;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x9AD3;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x764C;&#x76F8;&#x5173;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x9AD8;&#x52A8;&#x529B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x5185;&#x6BD4;&#x5468;&#x56F4;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x8D28;&#x91CF;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6C27;&#x6C14;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0D;&#x540C;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E86;&#x5982;&#x679C;&#x6025;&#x6027;&#x7F3A;&#x6C27;&#x53EF;&#x80FD;&#x8003;&#x8651;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x663E;&#x793A; Tregs &#x505C;&#x6B62;&#x4E0B;&#x6025;&#x6027;&#x5168;&#x8EAB;&#x7F3A;&#x6C27;&#xFF0C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x800C;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EE7;&#x7EED;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EC6;&#x5206;&#x7684;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A;&#x90A3;&#x5438;&#x6536;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x5B9A;&#x4E49;&#x8868;&#x793A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x3001; &#x6216;&#x8005;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F4E;&#x52A8;&#x529B;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x9632; Gr1 &#x6297;&#x4F53;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x548C;&#x95F4;&#x8D28;&#x4E2D;&#x5DE1;&#x903B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x5141;&#x8BB8;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001; &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5B8C;&#x597D;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6280;&#x672F;&#x5E76;&#x4E0D;&#x9650;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x4EE5;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5730;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

The tumor microenvironment consists of stromal cells and extracellular factors that evolve in parallel with carcinoma cells. To gain insights into the activities of stromal cell populations, we developed and applied multicolor imaging techniques to analyze the behavior of these cells within different tumor microenvironments in the same live mouse. We found that regulatory T-lymphocytes (Tregs) migrated in proximity to blood vessels. Dendritic-like cells, myeloid cells and carcinoma-associated fibroblasts all exhibited higher motility in the microenvironment at the tumor periphery than within the tumor mass. Since oxygen levels differ between tumor microenvironments, we tested if acute hypoxia could account for the differences in cell migration. Direct visualization revealed that Tregs ceased migration under acute systemic hypoxia, whereas myeloid cells continued migrating. In the same mouse and microenvironment, we experimentally subdivided the myeloid cell population and revealed that uptake of fluorescent dextran defined a low-motility subpopulation expressing markers of tumor-promoting, alternatively activated macrophages. In contrast, fluorescent anti-Gr1 antibodies marked myeloid cells patrolling inside tumor vessels and in the stroma. Our techniques allow real-time combinatorial analysis of cell populations based on spatial location, gene expression, behavior and cell surface molecules within intact tumors. The techniques are not limited to investigations in cancer, but could give new insights into cell behavior more broadly in development and disease.

Visualizing stromal cell dynamics in different tumor microenvironments by spinning disk confocal microscopy.

Le microenvironnement tumoral est constitu&eacute; de cellules stromales et facteurs extracellulaires qui &eacute;voluent en parall&egrave;le avec les cellules de carcinome. Mieux comprendre les activit&eacute;s des populations de cellules stromales, nous avons &eacute;labor&eacute; et appliqu&eacute; des techniques d&#39;imagerie multicolores pour analyser le comportement de ces cellules au sein des micro-environnements tumeur diff&eacute;rentes dans la m&ecirc;me souris vivante. Nous avons constat&eacute; que les lymphocytes T r&eacute;gulateurs (Tregs) &eacute;migr&eacute; &agrave; proximit&eacute; des vaisseaux sanguins. Dendritic cellules, cellules my&eacute;lo&iuml;des et fibroblastes associ&eacute;s &agrave; carcinome toutes expos&eacute;es motilit&eacute; plus &eacute;lev&eacute;e dans le microenvironnement &agrave; la p&eacute;riph&eacute;rie de la tumeur qu&#39;au sein de la tumeur masse. Niveaux d&#39;oxyg&egrave;ne diff&egrave;rent entre les micro-environnements tumeur, nous avons test&eacute; si hypoxie aigu&euml; pourrait expliquer les diff&eacute;rences observ&eacute;es dans la migration cellulaire. Visualisation directe a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que Tregs cess&eacute; de migration dans le cadre de l&#39;hypoxie aigu&euml; syst&eacute;mique, alors que les cellules my&eacute;lo&iuml;des continuaient de migration. Dans la m&ecirc;me souris et le microenvironnement, nous exp&eacute;rimentalement divis&eacute; la population de cellules my&eacute;lo&iuml;des et a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;absorption de la fluorescence dextran d&eacute;fini une sous-population de basse-motilit&eacute; exprimant des marqueurs de tumeur, alternativement activ&eacute;s macrophages. En revanche, les anticorps anti-Gr1 fluorescent marqu&eacute; cellules my&eacute;lo&iuml;des patrouiller &agrave; l&#39;int&eacute;rieur des vaisseaux de la tumeur et dans le stroma. Nos techniques permettent une analyse combinatoire en temps r&eacute;el des populations de cellules bas&eacute;es sur l&#39;emplacement dans l&#39;espace, l&#39;expression des g&egrave;nes, des mol&eacute;cules de surface cellulaire et de comportement au sein de tumeurs intacts. Les techniques ne se limitent pas aux enqu&ecirc;tes dans le cancer, mais pourraient donner de nouvelles connaissances sur le comportement cellulaire plus largement dans le d&eacute;veloppement et la maladie.

Visualisation dynamique de cellules stromales dans microenvironnements diff&eacute;rents tumeur en faisant tourner la microscopie confocale disque.

Il microambiente tumorale &egrave; costituito da cellule stromali e fattori extracellulari che si evolvono in parallelo con cellule di carcinoma. Per acquisire conoscenze in attivit&agrave; di popolazioni di cellule stromali, abbiamo sviluppato e applicato tecniche di imaging multicolor per analizzare il comportamento di queste cellule all&#39;interno di microambienti tumorali differenti nello stesso mouse dal vivo. Abbiamo trovato che la regolamentazione T-linfociti (Tregs) migrarono in prossimit&agrave; di vasi sanguigni. Dendritic-come le cellule, le cellule mieloidi e fibroblasti associato al carcinoma esposta maggiore motilit&agrave; nel microambiente presso la periferia del tumore rispetto all&#39;interno del tumore massa. Poich&eacute; i livelli di ossigeno differiscono tra microambienti tumorali, abbiamo testato se ipossia acuta potrebbe spiegare le differenze nella migrazione cellulare. Visualizzazione diretta ha rivelato che Tregs ha cessato di migrazione sotto ipossia acuta sistemica, considerando che le cellule mieloidi ha continuato la migrazione. Lo stesso mouse e microambiente, abbiamo sperimentalmente suddivisa la popolazione di cellule mieloidi e ha rivelato che assorbimento di fluorescente Destrano definito una sottopopolazione di bassa motilit&agrave; che esprimono marcatori del tumore-promuovere, in alternativa attivati macrofagi. Al contrario, gli anticorpi fluorescenti anti-Gr1 contrassegnato cellule mieloidi pattugliamento all&#39;interno dei vasi tumorali e nello stroma. Le nostre tecniche consentono in tempo reale analisi combinatoria di popolazioni cellulari basati sulla localizzazione spaziale, espressione genica, comportamento e cellule superficiali molecole all&#39;interno di tumori intatti. Le tecniche non sono limitate alle indagini in cancro, ma potrebbero dare nuove intuizioni nel comportamento delle cellule pi&ugrave; largamente in sviluppo e malattia.

Visualizzazione dinamica delle cellule stromali in microambienti diversi tumore filando microscopia confocale su disco.

&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E26;&#x5217;&#x9032;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x540C;&#x3058;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5185;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30AB;&#x30E9;&#x30FC; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x898F;&#x5236; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403; &#xFF08;Treg&#xFF09; &#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x5C55;&#x793A;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x816B;&#x760D;&#x5468;&#x56F2;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x816B;&#x760D;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x904B;&#x52D5;&#x8CEA;&#x91CF;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x9593;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x7D9A;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996; Treg &#x6025;&#x6027;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x75C7;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x505C;&#x6B62;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x7D30;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x904B;&#x52D5;&#x96C6;&#x56E3;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x53CD; Gr1 &#x6297;&#x4F53;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x8CEA;&#x816B;&#x760D;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x306E;&#x30D1;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x89E3;&#x6790;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x816B;&#x760D;&#x5185;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6280;&#x8853;&#x764C;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x304F;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3002;

&#xC2E4;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC804; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Stromal &#xC138;&#xD3EC; &#xC9D1;&#xB2E8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC591; microenvironments &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBE5B;&#xAE54;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; T-&#xB9BC;&#xD504; &#xD1A8; (Tregs) &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC1C;&#xACAC;. Dendritic &#xAC19;&#xC740; &#xC140;, &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC554; &#xAD00;&#xB828; &#xC804;&#xC2DC;&#xB294; &#xC885;&#xC591; &#xB0B4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC885;&#xC591; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; microenvironment&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC9C8;&#xB7C9;. &#xC0B0;&#xC18C; &#xC218;&#xC900; &#xC885;&#xC591; microenvironments &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xACBD;&#xC6B0; &#xAE09;&#xC131; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xACC4;&#xC18D; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; Tregs &#xAE09;&#xC131; &#xC870;&#xC9C1; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D;, &#xC544;&#xB798; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC911;&#xC9C0;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xAC19;&#xC740; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; microenvironment, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC138;&#xBD84;&#xD654; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xADF8; &#xAE00;&#xADC0;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD600; dextran &#xC815;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xC885;&#xC591; &#xCD09;&#xC9C4;, &#xB610;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBD80;&#xBD84; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xB2E8;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC548;&#xD2F0; Gr1 &#xD615;&#xAD11; &#xD56D; &#xCCB4; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC885;&#xC591; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC640; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC21C;&#xCC30;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE30;&#xC220;&#xC774; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC140; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC704;&#xCE58;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;, &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC885;&#xC591; &#xB0B4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC870;&#xD569; &#xBD84;&#xC11D;. &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC554;, &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB354; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC140; &#xB3D9;&#xC791;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xD68C;&#xC804; &#xC2DC;&#xCF1C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC591; microenvironments stromal &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

El microambiente tumoral consiste en c&eacute;lulas del estroma y factores extracelulares que evolucionan en paralelo con las c&eacute;lulas del carcinoma. Para obtener informaci&oacute;n sobre las actividades de las poblaciones de c&eacute;lulas estromales, hemos desarrollado y aplicado las t&eacute;cnicas de imagen multicolores para analizar el comportamiento de estas c&eacute;lulas en microambientes tumor diferentes en el mismo rat&oacute;n vivo. Encontramos que linfocitos T reguladoras (Tregs) emigraron en proximidad a los vasos sangu&iacute;neos. Dendr&iacute;tica-como las c&eacute;lulas, las c&eacute;lulas mieloides y fibroblastos asociados a carcinoma exhibieron mayor movilidad en el microambiente en la periferia del tumor que dentro del tumor masa. Puesto que los niveles de ox&iacute;geno se diferencian entre microambientes de tumor, probamos si la hipoxia aguda podr&iacute;a explicar las diferencias en la migraci&oacute;n celular. Visualizaci&oacute;n directa revel&oacute; que Tregs dejado de migraci&oacute;n bajo hipoxia sist&eacute;mica aguda, mientras que las c&eacute;lulas mieloides continuaron emigrando. En el mismo rat&oacute;n y microambiente, experimentalmente subdividir la poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas mieloides y revel&oacute; que la absorci&oacute;n de fluorescentes dextrano define una subpoblaci&oacute;n de baja movilidad que expresan marcadores de macr&oacute;fagos tumor-promover, alternativamente activados. Por el contrario, anticuerpos fluorescentes anti-Gr1 marcan patrullando dentro de los vasos del tumor y en el estroma de c&eacute;lulas mieloides. Nuestras t&eacute;cnicas permiten en tiempo real an&aacute;lisis combinatorio de poblaciones celulares basados en la localizaci&oacute;n espacial, expresi&oacute;n g&eacute;nica, comportamiento y c&eacute;lula mol&eacute;culas superficiales en tumores intactos. Las t&eacute;cnicas no se limitan a investigaciones en c&aacute;ncer, pero podr&iacute;an dar nuevos conocimientos sobre el comportamiento de la c&eacute;lula m&aacute;s ampliamente en el desarrollo y la enfermedad.

Visualizaci&oacute;n din&aacute;mica de c&eacute;lulas estromales en microambientes diferentes tumor girando la microscopia confocal de disco.

Le s&eacute;quen&ccedil;age du g&eacute;nome humain a conduit &agrave; la plupart des g&egrave;nes &eacute;tant disponible en vecteurs de BAC ou de la CIP. Cependant, peu d&#39;informations fonctionnel a re&ccedil;u &agrave; la plupart de ces g&egrave;nes. Techniques de manipulation et de transfert d&#39;unit&eacute;s fonctionnelles compl&egrave;tes sur grands fragments d&#39;ADN dans les cellules humaines sont indispensables pour l&#39;analyse des g&egrave;nes complets dans leur contexte naturel de g&eacute;nomique. Une des limitations des &eacute;tudes fonctionnelles &agrave; l&#39;aide de ces vecteurs sont la fr&eacute;quence faible de transfection.

R&eacute;glement&eacute;s d&#39;expression d&#39;un transg&egrave;ne introduit sur un vecteur de navette PAC oriP/EBNA-1 dans les cellules humaines.

Sequenziamento del genoma umano ha portato alla maggior parte dei geni, essendo disponibile nei vettori BAC o PAC. Tuttavia, limitate informazioni funzionali sono stati assegnati per la maggior parte di questi geni. Tecniche per la manipolazione e trasferimento di unit&agrave; funzionali complete su grandi frammenti di DNA nelle cellule umane sono fondamentali per l&#39;analisi dei geni completi nel loro naturale contesto genomico. Una limitazione degli studi funzionali utilizzando questi vettori &egrave; la frequenza di transfezione bassa.

Regolamentato l&#39;espressione di un transgene introdotto su un vettore navetta di PAC oriP/EBNA-1 in cellule umane.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x6D4B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6B63;&#x5728; BAC &#x6216; PAC &#x5411;&#x91CF;&#x4E2D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4FE1;&#x606F;&#x5DF2;&#x4EA4;&#x7ED9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x64CD;&#x7EB5;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5355;&#x5143;&#x4E0A;&#x5927; DNA &#x7247;&#x6BB5;&#x8F6C;&#x5165;&#x4EBA;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5176;&#x81EA;&#x7136;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5A92;&#x4ECB;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9650;&#x5236;&#x662F;&#x4F4E;&#x8F6C;&#x67D3;&#x9891;&#x7387;&#x3002;

OriP/EBNA-1 PAC &#x7A7F;&#x68AD;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0A;&#x5F15;&#x5165;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

Sequencing of the human genome has led to most genes being available in BAC or PAC vectors. However, limited functional information has been assigned to most of these genes. Techniques for the manipulation and transfer of complete functional units on large DNA fragments into human cells are crucial for the analysis of complete genes in their natural genomic context. One limitation of the functional studies using these vectors is the low transfection frequency.

Regulated expression of a transgene introduced on an oriP/EBNA-1 PAC shuttle vector into human cells.

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;BAC &#x307E;&#x305F;&#x306F; PAC &#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3067;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x60C5;&#x5831;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x304D;&#x3044; DNA &#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x8EE2;&#x9001;&#x64CD;&#x4F5C;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x6587;&#x8108;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5B8C;&#x5168;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x307E;&#x305F;&#x306F; Ip/EBNA-1 PAC &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; BAC &#xB610;&#xB294; PAC &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB418; &#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD560;&#xB2F9; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC870;&#xC791; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD070; DNA &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC790;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xAC8C;&#xB188; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;&#xAC00; &#xB0AE;&#xC740; transfection &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; oriP/EBNA-1 PAC &#xC154;&#xD2C0; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; transgene&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC2DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La secuencia del genoma humano ha llevado a la mayor&iacute;a de los genes est&aacute; disponible en vectores BAC o PAC. Sin embargo, la limitada informaci&oacute;n funcional se ha asignado a la mayor&iacute;a de estos genes. T&eacute;cnicas para la manipulaci&oacute;n y transferencia de unidades funcionales completas en grandes fragmentos de ADN en las c&eacute;lulas humanas son cruciales para el an&aacute;lisis de genes completos en su contexto natural de la gen&oacute;mica. Una limitaci&oacute;n de los estudios funcionales usando estos vectores es la frecuencia de transfecci&oacute;n baja.

Expresi&oacute;n regulada de un transgen introducido en un vector de lanzadera de PAC D.i.i.p/EBNA-1 en c&eacute;lulas humanas.

&#x52A8;&#x6001;&#x7597;&#x6CD5;&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x5316;&#x7597;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x663E;&#x5FAE;&#x6280;&#x672F;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x6309;&#x7167;&#x836F;&#x7269;&#x5206;&#x5E03;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x8840;&#x7BA1;&#x6E17;&#x6F0F;&#x548C;&#x963F;&#x9709;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6539;&#x5584;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-9 &#x7A7A;&#x6709;&#x4E86;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x6E17;&#x6F0F;&#x56DE;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; CCR2 &#x4F9D;&#x8D56;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D78;&#x6DA6;&#x7684;&#x9AD3;&#x540E;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x90A3; Ccr2 &#x7A7A;&#x4E3B;&#x673A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5BF9;&#x963F;&#x9709;&#x7D20;&#x6216;&#x987A;&#x94C2;&#x6CBB;&#x7597;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4F5C;&#x51FA;&#x7B54;&#x590D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x6781;&#x5176;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x7BA1;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x548C;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D78;&#x6DA6;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x83B7;&#x53D6;&#x836F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x539F;&#x4F4D;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x5728;&#x5316;&#x7597;&#x671F;&#x95F4;&#x6210;&#x50CF;&#x80BF;&#x7624;&#x57FA;&#x8D28;&#x4EA4;&#x4E92;&#x663E;&#x793A;&#x5230;&#x62B5;&#x6297;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

Little is known about the dynamics of cancer cell death in response to therapy in the tumor microenvironment. Intravital microscopy of chemotherapy-treated mouse mammary carcinomas allowed us to follow drug distribution, cell death, and tumor-stroma interactions. We observed associations between vascular leakage and response to doxorubicin, including improved response in matrix metalloproteinase-9 null mice that had increased vascular leakage. Furthermore, we observed CCR2-dependent infiltration of myeloid cells after treatment and that Ccr2 null host mice responded better to treatment with doxorubicin or cisplatin. These data show that the microenvironment contributes critically to drug response via regulation of vascular permeability and innate immune cell infiltration. Thus, live imaging can be used to gain insights into drug responses inÂ situ.

Imaging tumor-stroma interactions during chemotherapy reveals contributions of the microenvironment to resistance.

On en sait peu sur la dynamique de la mort des cellules canc&eacute;reuses dans la r&eacute;ponse au traitement dans le microenvironnement tumoral. La microscopie intravitale des carcinomes mammaires de souris trait&eacute;es &agrave; la chimioth&eacute;rapie a permis de suivre la distribution des m&eacute;dicaments, la mort cellulaire et des interactions tumeur-stroma. Nous avons observ&eacute; des associations entre une fuite vasculaire et r&eacute;ponse &agrave; la doxorubicine, y compris une r&eacute;ponse am&eacute;lior&eacute;e chez les souris de null matrix metalloproteinase-9 qui avaient augment&eacute; la perm&eacute;abilit&eacute; vasculaire. En outre, nous avons observ&eacute; l&#39;infiltration CCR2 d&eacute;pendante des cellules my&eacute;lo&iuml;des apr&egrave;s traitement et cette Ccr2 souris h&ocirc;te null mieux r&eacute;pondus au traitement par la doxorubicine ou cisplatine. Ces donn&eacute;es montrent que le microenvironnement contribue gravement &agrave; la r&eacute;action aux m&eacute;dicaments par l&#39;interm&eacute;diaire de r&eacute;gulation de la perm&eacute;abilit&eacute; vasculaire et l&#39;infiltration de cellules immunitaires inn&eacute;es. Ainsi, l&#39;imagerie direct peut servir &agrave; &eacute;clairer dans les r&eacute;ponses de drogue in situs.

Imagerie des interactions tumeur-stroma pendant la chimioth&eacute;rapie r&eacute;v&egrave;le des contributions du microenvironnement de r&eacute;sistance.

Poco si sa circa le dinamiche della morte delle cellule di cancro in risposta alla terapia nel microambiente del tumore. Intravital microscopia di carcinomi mammari mouse trattati con chemioterapia ci ha permesso di seguire la distribuzione di droga, morte cellulare e interazioni tumore-stroma. Abbiamo osservato le associazioni tra perdite vascolari e risposta alla doxorubicina, tra cui una migliore risposta in matrix metalloproteinase-9 null topi che avevano aumentato le perdite vascolari. Inoltre, abbiamo osservato l&#39;infiltrazione di cellule mieloidi CCR2-dipendente dopo il trattamento e che Ccr2 topi null host ha risposto meglio al trattamento con doxorubicina o cisplatino. Questi dati mostrano che il microambiente criticamente contribuisce alla risposta di droga tramite regolazione della permeabilit&agrave; vascolare e infiltrazione di cellule immuni innate. Cos&igrave;, dal vivo imaging pu&ograve; essere utilizzato per acquisire conoscenze in risposte di droga in situ.

Imaging interazioni tumore-stroma durante chemioterapia rivela contributi del microambiente di resistenza.

&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x764C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x3078;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7642;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x5206;&#x5E03;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3084;&#x816B;&#x760D;&#x9593;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8840;&#x7BA1;&#x6F0F;&#x308C;&#x3084;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x6F0F;&#x308C;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; 9 null &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C9;&#x30AD;&#x30BD;&#x30EB;&#x30D3;&#x30B7;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; CCR2 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068; null &#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x30C9;&#x30AD;&#x30BD;&#x30EB;&#x30D3;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30B7;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;Ccr2 &#x6D78;&#x6F64;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x85AC;&#x5264;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3068;&#x751F;&#x6765;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x6279;&#x5224;&#x7684;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x85AC;&#x7269;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x5834;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x816B;&#x760D;&#x9593;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x5EA6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC791;&#xC740; &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Intravital &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC720; carcinomas &#xB9C8;&#xC57D; &#xC720;&#xD1B5;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xACFC; &#xC885;&#xC591;-&#xAE30;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xAD00; &#xB204;&#xC124; &#xBC0F; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; metalloproteinase 9 null &#xC950; &#xD608;&#xAD00; &#xC720;&#xCD9C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB3C5; &#xC18C; &#xB8E8;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; CCR2 &#xC885;&#xC18D; &#xCE68;&#xD22C; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xADF8; Ccr2 null &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC950; &#xB3C5; &#xC18C; &#xB8E8;&#xBE44; &#xB610;&#xB294; cisplatin&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC798; &#xBC18;&#xC751; &#xD6C4; &#xAD00;&#xCC30;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; microenvironment &#xD608;&#xAD00; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xBC0F; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xD22C;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC601;&#xC0C1; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC57D; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD654;&#xD559;&#xC694;&#xBC95; &#xC911; &#xC885;&#xC591; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC800;&#xD56D; microenvironment&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC; &#xAE08;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Poco se sabe sobre la din&aacute;mica de muerte celular en respuesta a la terapia en el microentorno del tumor. Microscopia intravital de carcinomas mamarios de rat&oacute;n tratados con quimioterapia permiti&oacute; seguir la distribuci&oacute;n de los f&aacute;rmacos, muerte celular y las interacciones del tumor de estroma. Se observaron asociaciones entre salida vascular y la respuesta a la doxorrubicina, incluyendo mejorar la respuesta en ratones nulo de matriz metaloproteinasa 9 que hab&iacute;an aumentado la salida vascular. Adem&aacute;s, se observ&oacute; infiltraci&oacute;n CCR2 dependiente de c&eacute;lulas mieloides despu&eacute;s del tratamiento y eso Ccr2 ratones null anfitri&oacute;n respondieron mejor al tratamiento con doxorrubicina o cisplatino. Estos datos demuestran que el microambiente cr&iacute;ticamente contribuye a la respuesta de la droga mediante la regulaci&oacute;n de la permeabilidad vascular y la infiltraci&oacute;n de c&eacute;lulas inmunitarias innatas. As&iacute;, en proyecci&oacute;n de imagen puede utilizarse para ganar penetraciones en las respuestas de la droga in situ.

Hanne A. Askautrud

Cold Spring Harbor Laboratory

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer