primary-neuronal-cultures-from-brains-late-stage-drosophila

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

preparation-neuronal-cultures-from-midgastrula-stage-drosophila

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

University of California, Irvine (UCI)

&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x4E2D;&#x70DF;&#x78B1;&#x578B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (nAChRs) &#x8C03;&#x89E3;&#x4F53;&#x5185;&#x8611;&#x83C7;&#x51EF;&#x5C3C;&#x6069;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6EE5;&#x7528;&#x836F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x751F;&#x6210;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5FEB;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; nAChRs &#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x529F;&#x80FD;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x70DF;&#x78B1;&#x8BF1;&#x53D1;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x4ECE;&#x5927;&#x8111;&#x665A;&#x9636;&#x6BB5; OK107 GAL4 &#x86F9;&#x3002;&#x51EF;&#x5C3C;&#x6069;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP +&#xFF09; &#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x3002;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x6FC0;&#x6D3B; nAChRs alpha &#x91D1;&#x73AF;&#x86C7;&#x6BD2;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6C34;&#x5E73;&#x8D85;&#x8FC7; 95%&#x7684;&#x51EF;&#x5C3C;&#x6069;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x70DF;&#x78B1;&#x8BF1;&#x53D1;&#x9499;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (VGCC) &#x4F9D;&#x8D56;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A; VGCC &#x72EC;&#x7ACB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x76F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7; nAChRs &#x9499;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x3002;Thapsigargin &#x6CBB;&#x7597;&#x51CF;&#x5C11;&#x80DE;&#x5185;&#x50A8;&#x5B58;&#x7684;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x7B26;&#x5408;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5BF9;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7ECF;&#x9A8C;&#x7684;&#xFF1A; &#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x77ED;&#x8C03;&#x8282;&#x8109;&#x51B2;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BF9;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8109;&#x51B2;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x89C4;&#x6A21;&#x77AC;&#x6001;&#x51CF;&#x5C11; 50%&#x65F6;&#x7684;&#x8109;&#x95F4;&#x9694; 4 h&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x662F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x548C;&#x8425;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001;&#xFF0C;VGCC &#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; nAChRs &#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x51EF;&#x5C3C;&#x6069;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6210;&#x4EBA;&#x884C;&#x4E3A;&#x6D89;&#x53CA;&#x4FE1;&#x606F;&#x5904;&#x7406;&#x4E2D;&#x7684;&#x8611;&#x83C7;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5BF9;&#x5C3C;&#x53E4;&#x4E01;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;

nAChR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x9499;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x51EF;&#x5C3C;&#x6069;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;

In Drosophila, nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) mediate fast excitatory synaptic transmission in mushroom body Kenyon cells, a neuronal population involved in generation of complex behaviors, including responses to drugs of abuse. To determine whether activation of nAChRs can induce cellular changes that contribute to functional plasticity in these neurons, we examined nicotine-evoked responses in cells cultured from brains of late stage OK107-GAL4 pupae. Kenyon cells can be identified by expression of green fluorescent protein (GFP+). Nicotine activates alpha-bungarotoxin-sensitive nAChRs, causing a rapid increase in intracellular calcium levels in over 95% of the Kenyon cells. The nicotine-evoked calcium increase has a voltage-gated calcium channel (VGCC) dependent component and a VGCC-independent component that involves calcium influx directly through nAChRs. Thapsigargin treatment reduces the nicotine response consistent with amplification by calcium release from intracellular stores. The response to nicotine is experience-dependent: a short conditioning pulse of nicotine causes a transient 50% reduction in the magnitude of the response to a test pulse of nicotine when the interpulse interval is 4 h. This cellular plasticity is dependent on activation of the VGCC-component of the nicotine response and on cAMP-signaling, but not on protein synthesis. These data demonstrate that activation of nAChRs induces a calcium-dependent plasticity in Kenyon cells that could contribute to adult behaviors involving information processing in the mushroom bodies including responses to nicotine.

nAChR-mediated calcium responses and plasticity in Drosophila Kenyon cells.

Chez la drosophile, les r&#xE9;cepteurs nicotiniques de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine (nAChR) la m&#xE9;diation rapide transmission synaptique excitatrice dans les cellules de champignons Kenyon corps, une population neuronale impliqu&#xE9;e dans la production de comportements complexes, y compris les r&#xE9;ponses aux drogues d&#x26;#39;abus. Pour d&#xE9;terminer si l&#x26;#39;activation du nAChR peut induire des changements cellulaires qui contribuent &#xE0; la plasticit&#xE9; fonctionnelle dans ces neurones, nous avons examin&#xE9; la nicotine des r&#xE9;ponses &#xE9;voqu&#xE9;es dans les cellules cultiv&#xE9;es &#xE0; partir de cerveaux de stade tardif OK107-GAL4 pupes. Cellules de Kenyon peuvent &#xEA;tre identifi&#xE9;s par l&#x26;#39;expression de la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP +). La nicotine active alpha-bungarotoxine-sensibles nAChR, entra&#xEE;nant une augmentation rapide des niveaux de calcium intracellulaire dans plus de 95% des cellules de Kenyon. L&#x26;#39;augmentation de calcium nicotine &#xE9;voqu&#xE9; a un canal calcique voltage-d&#xE9;pendant (CCAGV) composante d&#xE9;pendante et une composante CCAGV-ind&#xE9;pendant qui implique l&#x26;#39;influx de calcium directement par nAChR. Traitement thapsigargine r&#xE9;duit la r&#xE9;ponse &#xE0; la nicotine compatible avec l&#x26;#39;amplification par la lib&#xE9;ration de calcium des r&#xE9;serves intracellulaires. La r&#xE9;ponse &#xE0; la nicotine est une exp&#xE9;rience d&#xE9;pendant: une impulsion de conditionnement courte de la nicotine provoque une r&#xE9;duction transitoire 50% de l&#x26;#39;amplitude de la r&#xE9;ponse &#xE0; une impulsion de test de la nicotine lorsque l&#x26;#39;intervalle entre impulsions est de 4 h. Cette plasticit&#xE9; cellulaire d&#xE9;pend de l&#x26;#39;activation du composant CCAGV de la r&#xE9;ponse &#xE0; la nicotine et le AMPc-signalisation, mais pas sur la synth&#xE8;se des prot&#xE9;ines. Ces donn&#xE9;es d&#xE9;montrent que l&#x26;#39;activation des nAChR induit une plasticit&#xE9; d&#xE9;pendante du calcium dans les cellules de Kenyon qui pourrait contribuer &#xE0; des comportements adultes impliquant le traitement d&#x26;#39;informations dans les corps p&#xE9;doncul&#xE9;s, y compris les r&#xE9;ponses &#xE0; la nicotine.

Les r&#xE9;ponses de calcium nAChR m&#xE9;diation et la plasticit&#xE9; des cellules de drosophile Kenyon

Drosophila vermitteln nikotinische Acetylcholin-Rezeptoren (nAChRs) schnell erregenden synaptischen &Uuml;bertragung in Pilz K&ouml;rper, die Kenyon Zellen, eine neuronale Bev&ouml;lkerung, die Generierung von komplexen Verhaltensweisen, einschlie&szlig;lich Antworten auf Drogen Missbrauch beteiligt. Um zu bestimmen, ob die Aktivierung des nAChRs zellul&auml;re Ver&auml;nderungen, die auf funktionelle Plastizit&auml;t in diese Neuronen beitragen hervorrufen kann, wir Nikotin hervorgerufen Reaktionen in den Zellen untersucht kultiviert von Gehirn der sp&auml;ten Phase OK107-GAL4 Puppen. Kenyon Zellen k&ouml;nnen durch Ausdruck des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins (GFP +) identifiziert werden. Nikotin aktiviert Alpha-Bungarotoxin-Sensitive nAChRs, zu einen raschen Anstieg im intrazellul&auml;ren Kalziumspiegel in &uuml;ber 95 % der Zellen Kenyon. Die Nikotin-hervorgerufen Kalzium-Erh&ouml;hung hat ein Spannung-Gating Kalzium-Kanal (Golfzielorten) abh&auml;ngige Komponente und eine Golfzielorten-unabh&auml;ngige Komponente, bei der Kalzium-Zustrom direkt &uuml;ber nAChRs. Thapsigargin Behandlung reduziert die Nikotin-Antwort mit Verst&auml;rkung durch Freisetzung von Kalzium aus intrazellul&auml;ren speichern. Die Reaktion auf Nikotin ist von der Erfahrung abh&auml;ngig: ein kurzen Klimaanlage-Puls von Nikotin verursacht eine vor&uuml;bergehende Reduktion von 50 % in das Ausma&szlig; der Reaktion auf einen Test-Puls von Nikotin, wenn das interpulse Intervall 4H ist. Diese zellul&auml;re Plastizit&auml;t ist angewiesen auf die Aktivierung der Golfzielorten-Komponente der Nikotin-Antwort und auf Lager-Signalisierung, aber nicht auf die Proteinsynthese. Diese Daten zeigen, dass die Aktivierung des nAChRs eine Kalzium-abh&auml;ngigen Plastizit&auml;t in Kenyon Zellen induziert, die zum Verhalten der Erwachsenen, die Informationsverarbeitung in den Pilzen-Gremien z. B. Reaktionen auf Nikotin beitragen k&ouml;nnte.

Kalzium nAChR-vermittelte Reaktionen und Plastizit&auml;t in Drosophila Kenyon Zellen.

In drosofila, recettori nicotinici acetilcolina (nAChRs) mediano eccitatorio veloce trasmissione sinaptica nel fungo corpo che cellule Kenyon, una popolazione neuronale coinvolta nella generazione dei comportamenti complessi, incluse le risposte alle droghe d&#39;abuso. Per determinare che se l&#39;attivazione di nAChRs pu&ograve; indurre cambiamenti cellulari che contribuiscono alla plasticit&agrave; funzionale di questi neuroni, abbiamo esaminato risposte evocate da nicotina in cellule coltivate dal cervello del tardo pupe GAL4 OK107 fase. Cellule Kenyon possono essere identificate dall&#39;espressione della proteina fluorescente verde (GFP +). Nicotina attiva nAChRs alfa-bungarotoxin-sensibili, causando un rapido aumento nei livelli di calcio intracellulare in oltre il 95% delle cellule del Kenyon. L&#39;aumento di calcio evocata da nicotina ha una componente dipendente del canale (VGCC) calcio voltaggio-dipendenti e un componente VGCC-indipendente che coinvolge l&#39;afflusso di calcio direttamente attraverso nAChRs. Thapsigargin trattamento riduce la risposta di nicotina coerenza con amplificazione di rilascio di calcio dai depositi intracellulari. La risposta alla nicotina &egrave; esperienza-dipendente: un impulso breve condizionata di nicotina provoca una transitoria riduzione del 50% la grandezza della risposta a un impulso di prova di nicotina quando l&#39;intervallo di interpulse &egrave; di 4 h. Questa plasticit&agrave; cellulare &egrave; dipendente dall&#39;attivazione del VGCC-componente della risposta nicotina e sul campo di segnalazione, ma non sulla sintesi proteica. Questi dati dimostrano che l&#39;attivazione di nAChRs induce una plasticit&agrave; di calcio-dipendente nelle cellule Kenyon che potrebbe contribuire a comportamenti adulti che coinvolgono i corpi dei funghi tra cui risposte alla nicotina di elaborazione dell&#39;informazione.

risposte di calcio mediato nAChR e plasticit&agrave; nelle cellule di Drosophila Kenyon.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;nAChRs&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30CE;&#x30B3;&#x4F53;&#x30B1;&#x30CB;&#x30E8;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x901F;&#x3044;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x4E71;&#x7528;&#x85AC;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002; nAChRs&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;OK107-GAL4&#x86F9;&#x5F8C;&#x671F;&#x306E;&#x8133;&#x304B;&#x3089;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B1;&#x30CB;&#x30E8;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP +&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3B1;-&#x30D6;&#x30F3;&#x30AC;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;nAChRs&#x3001;&#x30B1;&#x30CB;&#x30E8;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;95&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;VGCC&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x5206;&#x3068;nAChRs&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;VGCC&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x7D4C;&#x9A13;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x9694;&#x306F;4&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;50&#xFF05;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;VGCC&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;cAMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;nAChRs&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AD;&#x30CE;&#x30B3;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x308B;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B1;&#x30CB;&#x30E8;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

nAChR&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30B1;&#x30CB;&#x30E8;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;

&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, nicotinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (nAChRs) &#xBE68;&#xB9AC; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC84;&#xC12F; &#xBAB8; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xCF00; &#xB144;, &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0A8;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560;. &#xC870;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xAC16;&#xB294; Nachrs&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xAC00;&#xC774; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218;, &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xAD50;&#xC591; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xBB34;&#xB300; OK107 GAL4 pupae. &#xCF00; &#xB144; &#xC140; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP +) &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xCE90;&#xB144; &#xC140;&#xC758; 95% &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xC54C;&#xD30C; bungarotoxin &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; nAChRs &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC744; &#xBD88;&#xB7EC; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xB2E4; &#xCE7C;&#xC298; &#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; (VGCC) &#xC885;&#xC18D; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; nAChRs &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; VGCC &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xAD6C;&#xC131;. Thapsigargin &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9E4;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xD3ED;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xACBD;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xCEE8;&#xB514;&#xC154;&#xB2DD; &#xD384;&#xC2A4; interpulse &#xAC04;&#xACA9;&#xC740; 4 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB54C; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD384;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; 50% &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xBA74;. &#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC758; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4; &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; &#xCEA0;&#xD504; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; VGCC &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Nachrs&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC815;&#xBCF4; &#xC751;&#xB2F5; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xBC84;&#xC12F; &#xC2DC;&#xCCB4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC131;&#xC778; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCF00; &#xB144; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xC18C;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; nAChR &#xC911;&#xC7AC; &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xCE90;&#xB144; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;.

En Drosophila, los receptores nicot&#xED;nicos de la acetilcolina (nAChR) median rapidez en la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica excitadora en las c&#xE9;lulas del cuerpo seta Kenyon, una poblaci&#xF3;n neuronal implicado en la generaci&#xF3;n de comportamientos complejos, incluyendo las respuestas a las drogas de abuso. Para determinar si la activaci&#xF3;n de nAChR pueden inducir cambios celulares que contribuyen a la plasticidad funcional de estas neuronas, se analiz&#xF3; la nicotina de respuestas evocadas en las c&#xE9;lulas cultivadas a partir de cerebros de la etapa terminal OK107-GAL4 pupas. Kenyon c&#xE9;lulas pueden ser identificados por la expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na fluorescente verde (GFP +). La nicotina activa alfa-bungarotoxina sensibles nAChR, provocando un r&#xE1;pido aumento de los niveles de calcio intracelular en m&#xE1;s del 95% de las c&#xE9;lulas Kenyon. El aumento de calcio nicotina evocada tiene un canal de calcio dependientes del voltaje (VGCC) componente dependiente y un componente VGCC independiente que implica la entrada de calcio directamente a trav&#xE9;s de nAChR. El tratamiento thapsigargin la nicotina reduce la respuesta en consonancia con la amplificaci&#xF3;n por la liberaci&#xF3;n de calcio desde los dep&#xF3;sitos intracelulares. La respuesta a la nicotina es dependiente de la experiencia: un pulso acondicionado corto de nicotina provoca una reducci&#xF3;n transitoria 50% en la magnitud de la respuesta a un pulso de prueba de la nicotina cuando el intervalo entre impulsos es de 4 h. Esta plasticidad celular depende de la activaci&#xF3;n del componente VGCC de la respuesta de nicotina y el cAMP se&#xF1;alizaci&#xF3;n, pero no en la s&#xED;ntesis de prote&#xED;nas. Estos datos demuestran que la activaci&#xF3;n de nAChR induce una plasticidad dependiente de calcio en las c&#xE9;lulas de Kenyon que podr&#xED;an contribuir a comportamientos adultos que implican tratamiento de la informaci&#xF3;n en los cuerpos de setas incluidas las respuestas a la nicotina.

Beatriz Sicaeros

Department of Development and Cell Biology,
Department of Anatomy and Neurobiology,
Department of Development and Cell Biology, Department of Anatomy and Neurobiology

University of California, Irvine (UCI)

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beatriz Sicaeros

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Development and Cell Biology,Department of Anatomy and Neurobiology,Department of Development and Cell Biology, Department of Anatomy and Neurobiology

University of California, Irvine (UCI)

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Department of Development and Cell Biology,
Department of Anatomy and Neurobiology,
Department of Development and Cell Biology, Department of Anatomy and Neurobiology