Forward Genetic Approaches in <em>Chlamydia trachomatis</em>

Chlamydia trachomatis, the etiological agent of sexually transmitted diseases and ocular infections, remains poorly characterized due to its ...

Duke University Medical Center

&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5728;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x9020;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC; (rLM) &#x8868;&#x8FBE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x9176;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;-2 (&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-2&#xFF09;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6076;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE; nonmutated &#x9ED1;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027;&#x5206;&#x5316;&#x6297;&#x539F;&#x91CD;&#x7EC4;&#x682A;&#x3002;&#x8FD9; rLM &#x682A; C57Bl/6 &#x5C0F;&#x9F20;&#x514D;&#x75AB;&#x6709;&#x6548;&#x5F15;&#x7269; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BC6;&#x522B; MHC &#x7C7B;-&#x9650;&#x5236;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-2180&#x5E74;-188 &#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x80BD;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x7684;&#x5FEB;&#x9012;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma;&#x3002;&#x80BD;&#x52A0;&#x8F7D;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-2 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x53D1;&#x751F;&#x88C2;&#x89E3;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x548C;&#x63A8;&#x52A8;&#x4E86; rLM &#x8868;&#x793A;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A; 2 &#x529F;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230;&#x4ECE;&#x76AE;&#x4E0B; B16 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x9762;&#x4E34;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FA8;&#x522B;&#x6297;&quot;&#x81EA;&#x6211;&quot;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x91CD;&#x7EC4;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x8868;&#x793A;&#x5185;&#x751F;&#x3001; nonmutated &#x80BF;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#x3002;

Anti-self &#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x8868;&#x8FBE;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A; 2 &#x7684;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x7684; CD8 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

A potential approach to activate tumor-specific T cells is to use live bacterial vectors to deliver appropriate antigens in a highly immunostimulatory context. We constructed a recombinant strain of Listeria monocytogenes (rLM) expressing murine tyrosinase-related protein-2 (TRP-2), a nonmutated melanocyte-derived differentiation antigen highly expressed in melanomas. Immunization of C57Bl/6 mice with this rLM strain efficiently primed CD8 T cells to recognize the MHC class I-restricted TRP-2180-188 epitope and express IFN-gamma upon in vitro peptide stimulation. Peptide-loaded target cells were lysed in vitro by TRP-2-specific T cells in cytotoxicity assays, and mice immunized and boosted with rLM expressing TRP-2 were functionally protected from subcutaneous challenge with B16 melanoma cells. These results identify and characterize the anti-"self" T-cell responses induced by recombinant L. monocytogenes expressing an endogenous, nonmutated tumor antigen.

Characterization of anti-self CD8 T-cell responses stimulated by recombinant Listeria monocytogenes expressing the melanoma antigen TRP-2.

Une approche potentielle pour activer les lymphocytes T sp&eacute;cifique est d&#39;utiliser des vecteurs de bact&eacute;ries vivants pour livrer des antig&egrave;nes appropri&eacute;s dans un contexte hautement immunostimulantes. Nous avons construit un recombinant strain of Listeria monocytogenes (rLM) exprimant murine li&eacute;es &agrave; la tyrosinase prot&eacute;ine-2 (TRP-2), un antig&egrave;ne de diff&eacute;renciation de m&eacute;lanocytes d&eacute;riv&eacute;s nonmutated fortement exprim&eacute; dans les m&eacute;lanomes. Immunisation des souris C57Bl/6 avec cette souche rLM amorc&eacute;e efficacement les cellules T CD8 afin de reconna&icirc;tre le MHC classe I-permis TRP-2180-188 &eacute;pitope et IFN-gamma express lors de la stimulation in vitro de peptide. Peptide-charg&eacute; de cibler les cellules sont lys&eacute;es in vitro de cellules T sp&eacute;cifiques TRP-2 analyses de cytotoxicit&eacute; et souris immunis&eacute;es et stimul&eacute; avec rLM exprimant TRP-2 &eacute;taient fonctionnellement prot&eacute;g&eacute;s du d&eacute;fi sous-cutan&eacute;e avec des cellules de m&eacute;lanome B16. Ces r&eacute;sultats, identifient et caract&eacute;risent les anti-&laquo; soi &raquo; T-lymphocytes induite par recombinant L. monocytogenes, exprimant l&#39;antig&egrave;ne endog&egrave;ne, nonmutated.

Caract&eacute;risation des r&eacute;ponses de cellules T CD8 anti-l&eacute;gitime stimul&eacute;es par recombinaison Listeria monocytogenes, exprimant l&#39;antig&egrave;ne de m&eacute;lanome TRP-2.

Charakterisierung von Anti-Selbst CD8-T-Zell-Reaktionen durch rekombinante Expression der Listeria monocytogenes Melanom-Antigen TRP-2 stimuliert.

Un potenziale approccio per attivare le cellule T tumorali specifici &egrave; quello di utilizzare vettori batterici vivi per consegnare gli antigeni appropriati in un contesto altamente immunostimolante. Abbiamo costruito un ceppo ricombinante di Listeria monocytogenes (rLM) esprimendo murino tirosinasi-related protein-2 (TRP-2), un antigene di differenziazione nonmutated derivato da melanociti altamente espresso nei melanomi. Immunizzazione dei topi C57Bl/6 con questo ceppo rLM innescato in modo efficiente le cellule T CD8 riconoscono il MHC classe I-limitato TRP-2180-188 epitopo e IFN-gamma express dopo stimolazione in vitro del peptide. Cellule bersaglio di caricamento del peptide sono state lisate in vitro da cellule T TRP-2-specifico nelle analisi di citotossicit&agrave; e topi immunizzati e potenziato con rLM esprimendo TRP-2 erano funzionalmente protetti dalla sfida sottocutaneo con cellule di melanoma B16. Questi risultati identificano e caratterizzano l&#39;anti-&quot;auto&quot; le risposte delle cellule T indotta da ricombinante L. monocytogenes, che esprime un antigene tumorale endogena, nonmutated.

Caratterizzazione delle risposte di cellule T CD8 anti-self stimolate da ricombinante Listeria monocytogenes, che esprimono l&#39;antigene del melanoma TRP-2.

&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x7D30;&#x83CC;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x9AD8;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x914D;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-2 (TRP-2), &#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x3067;&#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; nonmutated &#x306E;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x83CC;&#x682A;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC; (rLM) &#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3002;&#x3053;&#x306E; rLM &#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3068; c57bl/6 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B; CD8 T &#x7D30;&#x80DE; MHC &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; I &#x62D8;&#x675F; TRP-2180&#x5E74;-188 &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E; IFN-&gamma; in vitro &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;TRP 2 &#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x304C; in vitro &#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x3001;TRP 2 &#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; rLM &#x3092;&#x5F8C;&#x62BC;&#x3057;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684; B16 &#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x76AE;&#x4E0B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x53CD;-&#x300C;&#x81EA;&#x5DF1;&#x300D;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x3001;nonmutated &#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Anti-self CD8 T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x6297;&#x539F; TRP 2 &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xADE0; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; immunostimulatory &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC74;&#xC124; murine tyrosinase &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-2 (TRP-2) &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC815;&#xBA74;&#xC744; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; nonmutated melanocyte &#xD30C;&#xC0DD; &#xBD84;&#xD654; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xD604; Listeria monocytogenes (rLM)&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;. &#xC774; rLM &#xAE34;&#xC7A5; &#xB41C; C57Bl/6 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; MHC &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I &#xC81C;&#xD55C; TRP-2180-188 &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504;&#xC640; &#xCCB4; &#xC678; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC778;&#xC2DD; CD8 T &#xC138;&#xD3EC; &#xC561;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; TRP 2 &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCCB4; &#xC678; lysed &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;, rLM TRP 2 &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC00;&#xC5B4; &#xC900; B16 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD53C;&#xD558; &#xCC4C;&#xB9B0;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC548;&#xD2F0;-&quot;&#xC790;&#xAE30;&quot; T &#xC140; &#xC751;&#xB2F5; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; L. monocytogenes &#xC0DD;, nonmutated &#xC885;&#xC591; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4;.

Anti-self CD8 T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Listeria monocytogenes TRP 2 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Un enfoque potencial para activar los linfocitos T espec&iacute;ficos del tumor es utilizar vectores bacterianos vivos para entregar ant&iacute;genos apropiados en un contexto altamente inmunoestimulantes. Construimos una cepa recombinante de Listeria monocytogenes (rLM) expresando murino relacionada con tirosinasa protein-2 (TRP-2), un ant&iacute;geno de diferenciaci&oacute;n nonmutated derivados de melanocitos altamente expresado en los melanomas. Inmunizaci&oacute;n de ratones C57Bl/6 con esta variedad de rLM preparado eficientemente las c&eacute;lulas CD8 T para reconocer el MHC clase-restringido TRP-2180-188 epitopo y expresa IFN-gamma sobre estimulaci&oacute;n in vitro de p&eacute;ptidos. Las c&eacute;lulas diana cargados de p&eacute;ptido fueron lisadas in vitro por las c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas TRP-2 en ensayos de citotoxicidad, y protegieron a los ratones inmunizados y potenciado con el rLM expresando TRP-2 funcionalmente de desaf&iacute;o subcut&aacute;neo con las c&eacute;lulas del melanoma B16. Estos resultados, identifican y caracterizan los anti-&quot;&quot; las respuestas de c&eacute;lulas T autoinducidos por l.monocytogenes recombinante que expresa un ant&iacute;geno tumoral end&oacute;geno, nonmutated.

Caracterizaci&oacute;n de las respuestas de c&eacute;lulas T CD8 anti-self estimuladas por recombinante Listeria monocytogenes que expresan el ant&iacute;geno de melanoma TRP-2.

&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x662F;&#x5BF9;&#x5E38;&#x89C4;&#x5316;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x8010;&#x836F;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x90FD;&#x662F;&#x6B21;&#x4F18;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x6A21;&#x578B;&#x662F; B16 &#x5C0F;&#x9F20;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x6076;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x53D7;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x76AE;&#x4E0B;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x8BA1;&#x6570;&#x80BA;&#x7ED3;&#x8282;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6A21;&#x578B;&#x548C;&#x95F4;&#x63A5;&#x6027;&#x8D28;&#x7684;&quot;&#x751F;&#x5B58;&quot;&#x66F2;&#x7EBF;&#x7814;&#x7A76;&#x8111;&#x8F6C;&#x79FB;&#x65F6;&#x7684;&#x5361;&#x5C3A;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E0D;&#x51C6;&#x786E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5F00;&#x53D1;&#x5E76;&#x51C6;&#x786E;&#x3001; &#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x91CD;&#x73B0;&#x53D1;&#x5149; B16 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6D3B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BF;&#x7624;&#x8D1F;&#x62C5;&#x4E32;&#x884C;&#x3001; &#x5B9E;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x76AE;&#x4E0B;&#x80BF;&#x7624;&#x3001; &#x80BA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x548C;&#x9885;&#x5185;&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x4E3A;&#x8BB8;&#x591A;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x673A;&#x578B;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x6765;&#x663E;&#x793A;&#x8868;&#x793A;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x9176;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;-2 &#x4FDD;&#x62A4;&#x9759;&#x8109; B16 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6311;&#x6218;&#x5BF9;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x7597;&#x6548;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6269;&#x5C55;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; A375 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x80FD;&#x591F;&#x663E;&#x793A;&#x514B;&#x9686;&#x682A;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6F5C;&#x80FD;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x8868;&#x793A;&#x4F53;&#x5185;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x51C6;&#x786E;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7684;&#x6D3B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Melanoma is highly resistant to conventional chemotherapeutic agents and novel therapeutic approaches are needed. Current animal models of melanoma in animals are sub-optimal. The most commonly used homograft model is the B16 mouse melanoma. Evaluation of potential melanoma therapies with this model is limited by the inaccuracy of caliper measurement of subcutaneous tumors, of counting lung nodules in metastasis models, and the indirect nature of "survival" curves when studying brain metastases. We have developed and characterized an accurate, sensitive, and reproducible bioluminescent B16 melanoma model that allows for serial, real-time analyses of tumor burden in live mice. We demonstrate that this model is applicable to subcutaneous tumors, lung metastases, and intracranial tumors and offers a solution to many of the limitations of previous models. As proof of principle, we use this model to show the efficacy of a live, Listeria monocytogenes vaccine expressing the melanoma antigen tyrosinase-related protein-2 to protect mice against intravenous B16 melanoma challenge. Additionally, we extend our approach to include the human A375 melanoma model and are able to show in vivo differences between sub-lines with varying metastatic potential. These models represent an accurate and reproducible means for in vivo melanoma monitoring in preclinical studies.

Bioluminescent imaging of melanoma in live mice.

Le m&eacute;lanome est tr&egrave;s r&eacute;sistant aux agents chimioth&eacute;rapeutiques classiques et nouvelles approches th&eacute;rapeutiques sont n&eacute;cessaires. Mod&egrave;les animaux actuels de m&eacute;lanome chez les animaux sont sous-optimales. Le mod&egrave;le homogreffe plus couramment utilis&eacute; est le m&eacute;lanome de souris B16. &Eacute;valuation des th&eacute;rapies potentielles de m&eacute;lanome avec ce mod&egrave;le est limit&eacute;e par l&#39;impr&eacute;cision de mesure de calibre des tumeurs sous-cutan&eacute;es, du comptage des nodules du poumon dans les mod&egrave;les de m&eacute;tastase et le caract&egrave;re indirect des courbes de &laquo; survie &raquo; lorsque l&#39;on &eacute;tudie les m&eacute;tastases c&eacute;r&eacute;brales. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; un pr&eacute;cis, sensible et reproductible bioluminescent B16 m&eacute;lanome mod&egrave;le permettant des analyses en temps r&eacute;el s&eacute;ries du fardeau de la tumeur chez des souris vivantes. Nous d&eacute;montrons que ce mod&egrave;le s&#39;applique aux tumeurs sous-cutan&eacute;es, m&eacute;tastases pulmonaires et des tumeurs intracr&acirc;niennes et offre une solution &agrave; bon nombre des limitations des mod&egrave;les pr&eacute;c&eacute;dents. Comme preuve de principe, nous utilisons ce mod&egrave;le pour montrer l&#39;efficacit&eacute; du vaccin vivant, Listeria monocytogenes exprimant le m&eacute;lanome antig&egrave;ne li&eacute;es &agrave; la tyrosinase prot&eacute;ine-2 pour prot&eacute;ger les souris contre l&#39;infection de m&eacute;lanome B16 par voie intraveineuse. En outre, nous &eacute;tendre notre approche afin d&#39;inclure le mod&egrave;le de m&eacute;lanome humain A375 Office et sont en mesure de montrer in vivo diff&eacute;rences entre sous-lignes avec diverses potentiel m&eacute;tastatique. Ces mod&egrave;les repr&eacute;sentent un moyen pr&eacute;cis et reproductible pour la surveillance de m&eacute;lanome in vivo dans les &eacute;tudes pr&eacute;cliniques.

Imagerie bioluminescente de m&eacute;lanome chez les souris vivantes.

Bioluminescent Bildgebung von Melanomen in lebenden M&#xE4;usen.

Il melanoma &egrave; altamente resistente agli agenti chemioterapici convenzionali e sono necessari nuovi approcci terapeutici. Attuali modelli animali del melanoma negli animali sono sub-ottimali. Il modello pi&ugrave; comunemente usato homograft &egrave; melanoma B16 del mouse. Valutazione di potenziali terapie melanoma con questo modello &egrave; limitata per l&#39;imprecisione della misurazione pinza dei tumori sottocutanei, del conteggio noduli polmonari in modelli di metastasi e il carattere indiretto delle curve di &quot;sopravvivenza&quot; quando studiare metastasi al cervello. Abbiamo sviluppato e caratterizzato un&#39;accurata, sensibile e riproducibile bioluminescente B16 melanoma modello che permette analisi di seriale, in tempo reale di onere di tumore nei topi vivi. Dimostreremo che questo modello &egrave; applicabile per i tumori sottocutanei, metastasi polmonari e tumori intracranici e offre una soluzione a molti dei limiti dei modelli precedenti. Come prova di principio, usiamo questo modello per mostrare l&#39;efficacia dei vaccini vivi, Listeria monocytogenes esprimendo il melanoma antigene tirosinasi-correlati protein-2 per proteggere i topi contro sfida di melanoma B16 per via endovenosa. Inoltre, estendiamo il nostro approccio per includere il modello di melanoma A375 umano e sono in grado di mostrare le differenze in vivo tra sub-lines con diverse potenziale metastatico. Questi modelli rappresentano un mezzo di accurate e riproducibile per il monitoraggio di melanoma in vivo in studi preclinici.

Imaging bioluminescenti di melanoma nei topi vivi.

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&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x60AA;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xB192;&#xC740; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD654;&#xD559;&#xC694;&#xBC95; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC811;&#xADFC; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xB294; &#xD751;&#xC0C9;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xD558;&#xC704;-&#xCD5C;&#xC801;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; homograft &#xBAA8;&#xB378; B16 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB1CC; &#xC804;&#xC774; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xBC0F; &quot;&#xC0DD;&#xC874;&quot; &#xACE1;&#xC120;&#xC758; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xD3D0; nodules&#xC758; &#xD53C;&#xD558; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xCE98;&#xB9AC;&#xD37C;&#xC2A4; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xD655;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xACE0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC7AC;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xBD80; B16 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC9C1;&#xB82C;, &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xD53C;&#xD558; &#xC885;&#xC591;, &#xD3D0; &#xC804;&#xC774; &#xBC0F; intracranial &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC774;&#xC804; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xD56D; &#xC6D0; tyrosinase &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-2 &#xC815; &#xB9E5; B16 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC950;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, Listeria monocytogenes &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; A375 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC73C;&#xB85C; sub-lines&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD751;&#xC0C9;&#xC758; &#xBD80; &#xC601;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El melanoma es altamente resistente a los agentes quimioterap&eacute;uticos convencionales y son necesarios nuevos enfoques terap&eacute;uticos. Los modelos animales actuales de melanoma en animales son sub&oacute;ptimos. El modelo de homoplastia m&aacute;s com&uacute;nmente utilizado es el melanoma del rat&oacute;n B16. Evaluaci&oacute;n de posibles terapias de melanoma con este modelo est&aacute; limitada por la inexactitud de la medici&oacute;n del calibre de tumores subcut&aacute;neos, de contar los n&oacute;dulos pulmonares en modelos de met&aacute;stasis y la naturaleza indirecta de las curvas de &quot;supervivencia&quot; al estudiar las met&aacute;stasis del cerebro. Hemos desarrollado y caracterizado un exacto, sensible y reproducible bioluminiscente B16 modelo de melanoma que permite an&aacute;lisis serial, en tiempo real de la carga tumoral en ratones vivos. Demostramos que este modelo es aplicable a los tumores subcut&aacute;neos, las met&aacute;stasis del pulm&oacute;n y tumores intracraneales y ofrece una soluci&oacute;n para muchas de las limitaciones de los modelos anteriores. Como prueba del principio, utilizamos este modelo para demostrar la eficacia de una vacuna viva, de monocytogenes de Listeria expresando el melanoma ant&iacute;geno relacionada con tirosinasa prote&iacute;na-2 para proteger a ratones contra el desaf&iacute;o de melanoma B16 intravenosa. Adem&aacute;s, ampliamos nuestro enfoque para incluir el modelo de melanoma humano A375 y son capaces de Mostrar en vivo diferencias sub-l&iacute;neas con diversos potencial metast&aacute;tico. Estos modelos representan un medio exacto y reproducible para monitoreo de melanoma in vivo en los estudios precl&iacute;nicos.

Proyecci&oacute;n de imagen bioluminiscente de melanoma en ratones vivos.

&#x901A;&#x8FC7;&#x5355;&#x53CD;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x89E6;&#x53D1;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x9053;&#x4F50;&#x5242;&#x75AB;&#x82D7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E73;&#x818F;&#xFF0C;&#x5408;&#x6210; TLR7 &#x4FC3;&#x6548;&#x5242;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7684;&#x6D3B;&#x3001; &#x91CD;&#x7EC4;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x80BF;&#x7624;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x548C;&#x813E;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x6709;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x54AA;&#x55B9;&#x83AB;&#x7279;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x4E8B;&#x5148;&#x9884;&#x9632;&#x63A5;&#x79CD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x767D;&#x765C;&#x98CE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E; TLR &#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x523A;&#x6FC0;&#x4EA7;&#x751F;&#x5728;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x65C1;&#x8DEF;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x6709;&#x7740;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x672A;&#x6765;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x6CBB;&#x7597;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x75AB;&#x82D7;&#x3002;

TLR7 &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x54AA;&#x55B9;&#x83AB;&#x7279;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; anti-melanoma &#x7684;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x751F;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x75AB;&#x82D7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Activation of innate immune cells through TLR triggers immunomodulating events that enhance cell-mediated immunity, raising the possibility that ligands to these receptors might act as adjuvants in conjunction with T cell activating vaccines. In this report, topical imiquimod, a synthetic TLR7 agonist, significantly enhanced the protective antitumor effects of a live, recombinant listeria vaccine against murine melanoma. This tumor protective effect was not dependent on direct application to the tumor and was associated with an increase in tumor-associated and splenic dendritic cells. Additionally, the combination of imiquimod treatment with prior vaccination led to development of localized vitiligo. These findings indicate that activation of the innate immune system with TLR ligands stimulates dendritic cell activity resulting in a bypass of peripheral tolerance and enhanced antitumor activity. The results of these studies have broad implications for future designs of immunotherapeutic vaccines against tumors and the treatment of metastatic melanoma.

The TLR7 agonist imiquimod enhances the anti-melanoma effects of a recombinant Listeria monocytogenes vaccine.

Activation des cellules immunitaires inn&eacute;es par TLR d&eacute;clenche des &eacute;v&eacute;nements d&#39;immunomodulateurs qui renforcent l&#39;immunit&eacute; &agrave; m&eacute;diation cellulaire, soulevant la possibilit&eacute; que les ligands de ces r&eacute;cepteurs pourraient agir comme adjuvants en conjonction avec activation de vaccins des lymphocytes T. Dans ce rapport, imiquimod topique, un agoniste TLR7 synth&eacute;tique, am&eacute;lior&eacute; significativement les effets antitumoraux protectrice d&#39;un vaccin vivant, recombinant listeria contre les m&eacute;lanomes murins. Cet effet protecteur de la tumeur n&#39;&eacute;tait pas tributaire de l&#39;application directe de la tumeur et a &eacute;t&eacute; associ&eacute; &agrave; une augmentation des cellules dendritiques associ&eacute;es &agrave; la tumeur et de la rate. En outre, la combinaison de l&#39;imiquimod traitement avec une vaccination ant&eacute;rieure a conduit au d&eacute;veloppement du vitiligo localis&eacute;. Ces r&eacute;sultats indiquent que l&#39;activation du syst&egrave;me immunitaire inn&eacute; avec des ligands TLR stimule l&#39;activit&eacute; des cellules dendritiques r&eacute;sultant dans une d&eacute;rivation de la tol&eacute;rance p&eacute;riph&eacute;rique et augmentation de l&#39;activit&eacute; antitumorale. Les r&eacute;sultats de ces &eacute;tudes ont de larges implications pour futures conceptions de vaccins immunoth&eacute;rapeutiques contre les tumeurs et le traitement du m&eacute;lanome m&eacute;tastatique.

L&#39;imiquimod d&#39;agoniste TLR7 am&eacute;liore les effets anti-melanoma d&#39;un recombinant vaccine de Listeria monocytogenes.

Die TLR7 Agonisten Imiquimod verbessert die Anti-Melanom-Wirkungen eines rekombinanten Listeria monocytogenes Impfstoff.

Attivazione di cellule del sistema immunitario innate attraverso TLR innesca eventi immunomodulanti che aumentano l&#39;immunit&agrave; cellulo-mediata, alzando la possibilit&agrave; che i ligandi a questi recettori potrebbero agire come coadiuvanti in combinazione con cellule T attivando i vaccini. In questa relazione, imiquimod d&#39;attualit&agrave;, un agonista sintetico TLR7, notevolmente migliorato gli effetti protettivi antitumorali di un vaccino vivo, ricombinante listeria contro melanoma murino. Questo effetto protettivo del tumore non era dipendente da applicazione diretta al tumore ed &egrave; stato associato con un aumento di cellule dendritiche tumore-associati e spleniche. Inoltre, la combinazione di imiquimod trattamento con vaccinazione preventiva ha portato allo sviluppo di vitiligine localizzata. Questi risultati indicano che l&#39;attivazione del sistema immunitario innato con ligandi TLR stimola l&#39;attivit&agrave; delle cellule dendritiche risultante in un bypass della tolleranza periferica e una maggiore attivit&agrave; antitumorale. I risultati di questi studi hanno ampie implicazioni per progetti futuri di immunotherapeutic vaccini contro i tumori e il trattamento del melanoma metastatico.

L&#39;imiquimod agonista TLR7 esalta gli effetti anti-melanoma di un ricombinante vaccino di Listeria monocytogenes.

&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; TLR &#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x30A2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; T &#x7D30;&#x80DE;&#x884C;&#x52D5;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x5F37;&#x5316;&#x514D;&#x75AB;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;, &#x5408;&#x6210; TLR7 &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x5916;&#x7528; imiquimod &#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x813E;&#x81D3;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x4E8B;&#x524D;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E; imiquimod &#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767D;&#x6591;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;TLR &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x751F;&#x6765;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x672B;&#x68A2;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x79FB;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TLR7 &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; imiquimod &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8840;&#x4E2D;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TLR &#xD1B5;&#xD574; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; ligands T &#xC140; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; adjuvants &#xC5ED;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC81C;&#xAE30; &#xC140; &#xC911;&#xC7AC; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC870;&#xC815; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6D; &#xC18C; imiquimod, &#xD569;&#xC131; TLR7 &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;, &#xD06C;&#xAC8C; murine &#xD751;&#xC0C9; &#xC885;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; listeria &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; antitumor &#xD6A8;&#xACFC; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC885;&#xC591; &#xC608;&#xBC29; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC774; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBC0F; &#xBE44;&#xC7A5; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; vitiligo&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC804; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xACFC; imiquimod &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; TLR ligands&#xC640; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACB0;&#xACFC; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xAD00;&#xC6A9;&#xACFC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; antitumor &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xD328;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC885;&#xC591; &#xBC0F; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; immunotherapeutic &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;.

TLR7 &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; imiquimod &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Listeria monocytogenes &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; anti-melanoma &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xD654;.

Activaci&oacute;n de c&eacute;lulas inmunes innatas a trav&eacute;s de TLR desencadena eventos inmunomodulador que mejoran la inmunidad mediada por c&eacute;lulas, incrementa la posibilidad de que ligandos a estos receptores pueden actuar como adyuvantes en conjunci&oacute;n con la c&eacute;lula de T, activaci&oacute;n de vacunas. En este informe, el imiquimod t&oacute;pico, un agonista sint&eacute;tico de TLR7, hab&iacute;a mejorado significativamente los efectos antitumorales protectores de la vacuna contra el melanoma murino listeria vivo, recombinante. Este efecto protector del tumor no era dependiente en aplicaci&oacute;n directa al tumor y se asoci&oacute; con un aumento en c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas tumor-asociados y espl&eacute;nicas. Adem&aacute;s, la combinaci&oacute;n de tratamiento imiquimod con vacunaci&oacute;n anterior condujo al desarrollo del vitiligo localizado. Estos resultados indican que la activaci&oacute;n del sistema inmune innato con ligandos TLR estimula la actividad de la c&eacute;lula dendr&iacute;tica resultando en una carretera de circunvalaci&oacute;n de la tolerancia perif&eacute;rica y mayor actividad antitumoral. Los resultados de estos estudios tienen amplias implicaciones para futuros dise&ntilde;os de inmunoterapia vacunas contra los tumores y el tratamiento del melanoma metast&aacute;sico.

El imiquimod agonista de TLR7 mejora los efectos anti-melanoma de un recombinante vacuna de Listeria monocytogenes.

&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS) &#x548C; lipooligosaccharides (LOS) &#x662F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x662F;&#x6700;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684; LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc &#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;]&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x5408;&#x6210;&#x8102; A&#xFF0C;&#x72AF;&#x4E0B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x963B;&#x6B62;&#x6D1B;&#x6749;&#x77F6;&#x5408;&#x6210;&#x4E2D;&#x9884;&#x7559;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x6C99;&#x773C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x6D1B;&#x6749;&#x77F6;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#xFF0C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x53EF;&#x884C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x7ACB;&#x4E86;&#x652F;&#x6301;&#x5F3A;&#x5065;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x6CE1; (&quot;&#x5305;&#x5BB9;&quot;&#xFF09;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E0D;&#x518D;&#x6709;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x3002;LpxC &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x590D;&#x5236;&#x7F51;&#x7EB9;&#x673A;&#x6784;&#x4E2D;&#x79EF;&#x7D2F;&#x653E;&#x5927;&#x5939;&#x6742;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x672A;&#x80FD;&#x8868;&#x793A;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x540E;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x5C0F;&#x5B66;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#x7A97;&#x4F53;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x4F20;&#x67D3;&#x75C5;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x6784;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x7C7B;&#x7684; antichlamydial &#x4EE3;&#x7406; LpxC &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x5E94;&#x7528;&#x5916;&#x819C;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;

&#x6C99;&#x773C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x521D;&#x7B49;&#x673A;&#x6784;&#x4EE3;&#x9700;&#x8981; Lipooligosaccharide&#x3002;

Lipopolysaccharides (LPS) and lipooligosaccharides (LOS) are the main lipid components of bacterial outer membranes and are essential for cell viability in most Gram-negative bacteria. Here we show that small molecule inhibitors of LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc deacetylase], the enzyme that catalyzes the first committed step in the biosynthesis of lipid A, block the synthesis of LOS in the obligate intracellular bacterial pathogen Chlamydia trachomatis. In the absence of LOS, Chlamydia remains viable and establishes a pathogenic vacuole ("inclusion") that supports robust bacterial replication. However, bacteria grown under these conditions were no longer infectious. In the presence of LpxC inhibitors, replicative reticulate bodies accumulated in enlarged inclusions but failed to express selected late-stage proteins and transition to elementary bodies, a Chlamydia developmental form that is required for invasion of mammalian cells. These findings suggest the presence of an outer membrane quality control system that regulates Chlamydia developmental transition to infectious elementary bodies and highlights the potential application of LpxC inhibitors as unique class of antichlamydial agents.

Lipooligosaccharide is required for the generation of infectious elementary bodies in Chlamydia trachomatis.

Lipopolysaccharides (LPS) et lipooligosaccharides (LOS) sont les principaux constituants lipidiques de membranes externes bact&#xE9;riennes et sont essentiels pour la viabilit&#xE9; des cellules dans la plupart des bact&#xE9;ries Gram-n&#xE9;gatives. Ici, nous montrons que les petites mol&#xE9;cules inhibitrices de LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc d&#xE9;ac&#xE9;tylase], l&#x26;#39;enzyme qui catalyse la premi&#xE8;re &#xE9;tape engag&#xE9;e dans la biosynth&#xE8;se du lipide A, de bloquer la synth&#xE8;se de LOS dans le intracellulaire obligatoire trachomatis Chlamydia bact&#xE9;rienne pathog&#xE8;ne. En l&#x26;#39;absence de LOS, chlamydia demeure viable et &#xE9;tablit une vacuole pathog&#xE8;ne (&#xAB;inclusion&#xBB;) qui prend en charge la r&#xE9;plication bact&#xE9;rienne robuste. Cependant, les bact&#xE9;ries cultiv&#xE9;es dans ces conditions ne sont plus contagieux. En pr&#xE9;sence d&#x26;#39;inhibiteurs LpxC, corps r&#xE9;ticul&#xE9;s r&#xE9;plicatives accumul&#xE9;es dans les inclusions agrandies, mais a omis d&#x26;#39;exprimer s&#xE9;lectionn&#xE9;s &#xE0; un stade avanc&#xE9; prot&#xE9;ines et la transition vers des corps &#xE9;l&#xE9;mentaires, une forme de d&#xE9;veloppement de Chlamydia qui est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;invasion des cellules de mammif&#xE8;res. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un syst&#xE8;me de contr&#xF4;le de qualit&#xE9; externe membrane qui r&#xE9;gule la transition Chlamydia d&#xE9;veloppement &#xE0; infectieuses corps &#xE9;l&#xE9;mentaires et met en &#xE9;vidence l&#x26;#39;application potentiel des inhibiteurs de LpxC que la classe unique d&#x26;#39;agents antichlamydiens.

Lipooligosaccharide est n&#xE9;cessaire &#xE0; la production de corps &#xE9;l&#xE9;mentaires infectieuses infections &#xE0; Chlamydia trachomatis

Lipopolysaccharide (LPS) und Lipooligosaccharides (LOS) sind die wichtigsten Lipid-Komponenten von bakteriellen &auml;u&szlig;eren Membranen und unverzichtbar f&uuml;r die Zellviabilit&auml;t in den meisten gramnegativen Bakterien. Hier zeigen wir, dass niedermolekularer Hemmer des LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc Deacetylase], blockieren das Enzym, das sich zun&auml;chst in die Biosynthese von Lipid A, katalysiert die Synthese von LOS in der obligat intrazellul&auml;re bakterielle Erreger Chlamydia Trachomatis. In Ermangelung von LOS Chlamydien praktikabel bleibt und gr&uuml;ndet eine pathogene Vakuole (&quot;Aufnahme&quot;), die robuste bakterielle Replikation unterst&uuml;tzt. Bakterien, die unter diesen Bedingungen gewachsen waren jedoch nicht mehr infekti&ouml;s. In Anwesenheit von Inhibitoren der LpxC replicative EB K&ouml;rper angesammelt vergr&ouml;&szlig;ert Einschl&uuml;sse konnte aber express ausgew&auml;hlte Sp&auml;tstadium Proteine und &Uuml;bergang zur elementaren stellen, ein Chlamydien-Entwicklungs-Formular, das f&uuml;r Invasion der S&auml;ugetier-Zellen erforderlich ist. Diese Ergebnisse weisen das Vorhandensein des eine Au&szlig;enmembran Qualit&auml;tskontrolle, Chlamydien Entwicklungsst&ouml;rungen &Uuml;bergang zu infekti&ouml;sen elementare K&ouml;rper reguliert bzw. hebt die m&ouml;gliche Anwendung des LpxC-Inhibitoren als eindeutige Klasse Antichlamydial Agenten.

Lipooligosaccharide ist erforderlich f&uuml;r die Generierung von infekti&ouml;sen elementare Einrichtungen in Chlamydia Trachomatis.

Lipopolisaccaridi (LPS) e lipooligosaccharides (LOS) sono i componenti principali dei lipidi delle membrane batteriche esterne e sono essenziali per la vitalit&agrave; delle cellule in batteri Gram-negativi pi&ugrave;. Qui vi mostriamo che piccole molecole inibitori di LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc deacetylase], l&#39;enzima che catalizza il primo passaggio impegnato nella biosintesi di lipidi A, bloccare la sintesi di LOS in patogeno intracellulare batterica obligata Chlamydia trachomatis. In assenza di LOS, Chlamydia rimane valida e stabilisce un vacuolo patogeno (&quot;inclusione&quot;) che supporta la replica batterica robusta. Tuttavia, batteri coltivati in queste condizioni non erano pi&ugrave; infettive. In presenza di inibitori LpxC, corpi reticolari replicativa accumulati allargata inclusioni ma non &egrave; riuscito ad esprimere proteine fase tardiva selezionate e transizione verso corpi elementari, una forma evolutiva clamidia che &egrave; necessaria per l&#39;invasione delle cellule di mammiferi. Questi risultati suggeriscono la presenza di un sistema di controllo qualit&agrave; della membrana esterna che regola la transizione evolutiva Chlamydia infettivi corpi elementari e mette in evidenza il potenziale applicazione di inibitori LpxC come unica classe di agenti antichlamydial.

Lipooligosaccharide &egrave; necessaria per la generazione di corpi elementari infettive in Chlamydia trachomatis.

&#x30EA;&#x30DD;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x3068;lipooligosaccharides&#xFF08;LOS&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8102;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x793A;&#x3059;LpxC [UDP-3-O-&#xFF08;R-3-hydroxymyristoyl&#xFF09;-GlcNAc&#x306E;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;]&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;LOS&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B3;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x3092;&#x7FA9;&#x52D9;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3002; LOS&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x6DB2;&#x80DE;&#xFF08; &#x26;quot;&#x5305;&#x542B;&#x26;quot;&#xFF09;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x5897;&#x6B96;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3082;&#x306F;&#x3084;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; LpxC&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x7DB2;&#x72B6;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x62E1;&#x5927;&#x4ECB;&#x5728;&#x7269;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5C0F;&#x5B66;&#x751F;&#x306E;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x671F;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x5B66;&#x751F;&#x306E;&#x4F53;&#x306B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x6297;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x85AC;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;LpxC&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x5916;&#x819C;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x7BA1;&#x7406;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30EA;&#x30DD;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x985E;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6821;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

Lipopolysaccharides (LPS) &#xBC0F; lipooligosaccharides (LOS) &#xC138;&#xADE0; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xC138;&#xADE0;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc deacetylase]&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; A&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEE4;&#xBC0B;&#xB41C; &#xCCAB;&#xAC78;&#xC74C; catalyzes &#xD6A8;&#xC18C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC758;&#xBB34; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD074; &#xB77C; &#xBBF8;&#xB514; &#xC544;&#xC758; trachomatis&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB85C;&#xC2A4;&#xC758; &#xD569;&#xC131;. &#xB85C;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD074; &#xB77C; &#xBBF8;&#xB514; &#xC544; &#xC2E4;&#xD589; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xACF5;&#xD3EC; (&quot;&#xD3EC;&#xD568;&quot;) &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC138;&#xADE0; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC774;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. LpxC &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC77C;&#xCC28; reticulate &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xD760;&#xB3C4; &#xD655;&#xB300; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC804;&#xD658; &#xCD08;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50; &#xC2DC;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xC785;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD074; &#xB77C; &#xBBF8;&#xB514; &#xC544; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD328;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD074; &#xB77C; &#xBBF8;&#xB514; &#xC544; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xCD08;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50; &#xAE30;&#xAD00; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC804;&#xD658;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; antichlamydial &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB85C; LpxC &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lipooligosaccharide&#xB294; &#xD074; &#xB77C; &#xBBF8;&#xB514; &#xC544;&#xC758; trachomatis&#xC5D0; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xCD08;&#xB4F1;&#xD559;&#xAD50; &#xC2DC;&#xCCB4;&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lipopolisac&#xE1;ridos (LPS) y lipooligosac&#xE1;ridos (LOS) son los principales componentes lip&#xED;dicos de las membranas externas de bacterias y son esenciales para la viabilidad celular en la mayor&#xED;a de bacterias Gram-negativas. Aqu&#xED; nos muestran que los inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de LpxC [UDP-3-O-(R-3-hydroxymyristoyl)-GlcNAc deacetilasa], la enzima que cataliza el primer paso comprometido en la bios&#xED;ntesis del l&#xED;pido A, bloquean la s&#xED;ntesis de internaci&#xF3;n en la intracelular obligado trachomatis Chlamydia bacteriana pat&#xF3;geno. En ausencia de LOS, clamidia sigue siendo viable y establece una vacuola pat&#xF3;gena (&#x26;quot;inclusi&#xF3;n&#x26;quot;) que soporta la replicaci&#xF3;n bacteriana resistente. Sin embargo, las bacterias que crecen en estas condiciones ya no son infecciosos. En la presencia de inhibidores LpxC, cuerpos replicativos reticuladas acumulado en inclusiones ampliadas, pero no para expresar seleccionados la &#xFA;ltima etapa de prote&#xED;nas y la transici&#xF3;n a cuerpos elementales, una forma Chlamydia desarrollo que se requiere para la invasi&#xF3;n de c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. Estos hallazgos sugieren la presencia de un sistema de control de la membrana externa de la calidad que regula la transici&#xF3;n de la clamidia en el desarrollo de cuerpos elementales infecciosos y pone de relieve la aplicaci&#xF3;n potencial de los inhibidores LpxC como clase &#xFA;nica de agentes antichlamydial.

Lipooligosac&#xE1;rido se requiere para la generaci&#xF3;n de los cuerpos elementales infecciosos en Chlamydia trachomatis

Chlamydia trachomatis, a pathogen responsible for diseases of significant clinical and public health importance, remains poorly characterized because of its intractability to routine molecular genetic manipulation. We have developed a combinatorial approach to rapidly generate a comprehensive library of genetically defined mutants. Chemical mutagenesis, coupled with whole-genome sequencing (WGS) and a system for DNA exchange within infected cells, was used to generate Chlamydia mutants with distinct phenotypes, map the underlying genetic lesions, and generate isogenic strains. As a result, we identified mutants with altered glycogen metabolism, including an attenuated strain defective for type II secretion. The coupling of chemically induced gene variation and WGS to establish genotype-phenotype associations should be broadly applicable to the large list of medically and environmentally important microorganisms currently intractable to genetic analysis.

Virulence determinants in the obligate intracellular pathogen Chlamydia trachomatis revealed by forward genetic approaches.

Salicylidene acylhydrazides (SAHs) inhibit the type III secretion system (T3S) of Yersinia and other Gram-negative bacteria. In addition, SAHs restrict the growth and development of Chlamydia species. However, since the inhibition of Chlamydia growth by SAH is suppressed by the addition of excess iron and since SAHs have an iron-chelating capacity, their role as specific T3S inhibitors is unclear. We investigated here whether SAHs exhibit a function on C. trachomatis that goes beyond iron chelation. We found that the iron-saturated SAH INP0341 (IS-INP0341) specifically affects C. trachomatis infectivity with reduced generation of infectious elementary body (EB) progeny. Selection and isolation of spontaneous SAH-resistant mutant strains revealed that mutations in hemG suppressed the reduced infectivity caused by IS-INP0341 treatment. Structural modeling of C. trachomatis HemG predicts that the acquired mutations are located in the active site of the enzyme, suggesting that IS-INP0341 inhibits this domain of HemG and that protoporphyrinogen oxidase (HemG) and heme metabolism are important for C. trachomatis infectivity.

Mutations in hemG mediate resistance to salicylidene acylhydrazides, demonstrating a novel link between protoporphyrinogen oxidase (HemG) and Chlamydia trachomatis infectivity.

Bidong D. Nguyen

Department of Molecular Genetics and Microbiology,
Center for Microbial Pathogenesis,
Department of Molecular Genetics and Microbiology, Center for Microbial Pathogenesis

Duke University Medical Center

Forward Genetic Approaches in Chlamydia trachomatis

Bidong D. Nguyen

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular Genetics and Microbiology,Center for Microbial Pathogenesis,Department of Molecular Genetics and Microbiology, Center for Microbial Pathogenesis

Duke University Medical Center

Forward Genetic Approaches in Chlamydia trachomatis

Department of Molecular Genetics and Microbiology,
Center for Microbial Pathogenesis,
Department of Molecular Genetics and Microbiology, Center for Microbial Pathogenesis