Protocolo para Longa Duração Hipertermia corpo inteiro em Ratos

Resumo

Este documento descreve um protocolo para a hipertermia de corpo inteiro em camundongos que podem estimular a febre como condições até 12-24 horas.

Resumo

A hipertermia é um termo geral utilizado para definir o aumento da temperatura corporal central acima do normal. Muitas vezes, é utilizado para descrever o aumento da temperatura corporal central que é observado durante a febre. A utilização de hipertermia como adjuvante tem emergido como um procedimento promissor para a regressão do tumor no domínio da biologia do cancro. Para este efeito, a exigência mais importante é ter os protocolos de aquecimento fiáveis ​​e uniformes. Nós desenvolvemos um protocolo para a hipertermia (corpo inteiro) em ratinhos. Neste protocolo, os animais são expostos a ciclos de hipertermia durante 90 min seguido por um período de repouso de 15 min. Durante este período, os ratos têm fácil acesso à comida e água. Picos de alta temperatura do corpo dos camundongos durante a primeira ciclos de exposição poucas hipertermia são impedidos por imobilizar o animal. Além disso, a solução salina normal é administrado em primeiro poucos ciclos para minimizar os efeitos da desidratação. Este protocolo pode simular febre como as condições em camundongos até 12-24 horas. Temosusado 8-12 semanas de idade BALB / cJ fêmeas para demonstrar o protocolo.

Protocolo

1. Ética animais

Antes de realizar a hipertermia longa duração em camundongos certifique-se de que o procedimento tenha sido aprovado pelo Animal Care Institucional e Comitê de uso. Todos os procedimentos discutidos neste papel e mostrado no vídeo que a acompanha foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal Institucional do Instituto Nacional de Imunologia.

2. Hipertermia entendimento

A hipertermia do corpo inteiro (WBH) é entregue ao colocar os animais em gaiolas de pré-aquecido que são colocados na incubadora mantida a 39,5 ° C. Durante a padronização do protocolo, um sensor de temperatura foi implantado cirurgicamente nos murganhos e a temperatura corporal foi monitorizada em diferentes condições experimentais. Observou-se que, ao colocar os animais num ambiente aquecido, a sua temperatura aumentada gradualmente a partir de 37 ° C a até 42 ° C ao longo da duração de 100 minutos (Figura 1). The resultando "spike" de temperatura é intrigante que a temperatura interna do corpo disparado ainda maior do que a temperatura externa do ambiente.

Quando a temperatura corporal superior a 40 ° C, o animal iria mostrar sinais de stress e de desidratação, tais como agentes molhantes em volta do focinho. Aumentar a temperatura corporal acima de 40 ° C, conduzirá a molhar e estresse irreversíveis ou até a morte dos animais, devido ao estresse térmico. Por isso, é importante para evitar os picos de temperatura durante o curso de hipertermia.

Este fenómeno de picos de alta temperatura está associada com a hiperactividade física do animal durante a exposição a hipertermia. Picos de temperatura semelhantes foram observados por outros grupos e também foram associados com a hiperactividade física do animal ao ser introduzida a atmosfera com temperaturas mais elevadas ^10.

No nosso protocolo, os ratos são imobilizados durante a exposição a hipertermia. Comomostrado na Figura 2, a imobilização do animal, impede que os picos de temperatura.

Temos usado 8-12 semanas de idade BALB / Cj ratos para demonstrar esse protocolo. O protocolo não está restrita a um tipo particular / estirpe de ratos.

3. Preparando-se para o Experimento

3,1 Incubadora

Esta experiência pode ser realizada em uma incubadora de CO ₂ normal, uma vez que têm um bom controlo da temperatura. Desligue fornecimento de gás CO ₂ e remova bandeja de retenção de água da _incubadora de CO2. Em alguns modelos de incubadoras, é possível desligar o controlador ₂ CO. Organizar prateleiras da incubadora a fim de que a gaiola de ratos pode ser colocado convenientemente no interior. Definir a temperatura da incubadora a 39,5 ° C.

3,2 Gaiolas

Tipicamente, o ensaio é realizado a hipertermia em 4 ratinhos de cada vez. Duas gaiolas são obrigatórios; noe é colocado dentro da incubadora e o outro é colocado no exterior, à temperatura ambiente. Cama de gaiolas é evitada, tal como os adesivos de cama seja molhada com o tempo o que resulta na não-uniforme da temperatura no interior da gaiola. A gaiola exterior deve ter peletes alimentares e da garrafa de água.

3,3 Ratos tubos de imobilização

Durante o curso de primeiros 4 ciclos de ratinhos hipertermia são imobilizados em tubos perfurados. Estes tubos de imobilização pode ser feita a partir de 50 'de centrifugação' ml por tubos de perfuração 3 furos milímetros em todo o seu corpo, e quatro de tais tubos será necessária. O tubo de 50 ml pode convenientemente imobilizar BALB / Cj ratos que estão com mais de 8 semanas. Os tubos de tamanhos apropriados pode ser necessária para alguns estirpe invulgarmente diferente de ratos ou ratinhos para os quais são muito jovens ou mais velhos do que 50 semanas.

Colocar os tubos de imobilização e uma gaiola dentro da incubadora mantida a 39,5 ° C. Espere até que, pelo menos, duas horas, de modo que a gaiola e itubos mmobilization atingir a temperatura da incubadora.

4. Primeiro ciclo da hipertermia

Ratos podem sofrer uma desidratação durante a exposição hipertermia. Portanto, antes de iniciar o experimento, administrar 0,5 ml de solução salina normal, por via intraperitoneal a cada rato. Use uma agulha de 26 G com uma seringa ml.

Assumir rapidamente a gaiola colocado na incubadora, o local de um animal de cada um de tubos de imobilização e colocar a gaiola de volta na incubadora. Registrar o tempo. É essencial manter a gaiola no mesmo local na incubadora de cada vez.

Depois de 90 minutos, retire a gaiola da incubadora. Libertar os animais a partir dos tubos de imobilização e colocá-los na gaiola, à temperatura normal com um fácil acesso a comida e água. Coloque os tubos de imobilização vazios de volta na incubadora.

Após 15 minutos, o segundo ciclo de hipertermia é iniciado através da apresentação de 0.5 ml de solução salina por via intraperitoneal a cada rato.

Em seguida, são imobilizadas em tubos de 50 ml de imobilização perfurados e colocado na incubadora.

5. Ciclos subsequentes Hipertermia

Para os primeiros quatro ciclos, que é essencial para imobilizar ratos durante a exposição, a hipertermia e para os dois primeiros ciclos, a injecção é dada solução salina antes de se iniciar o período de hipertermia.

Após estes ciclos de hipertermia seguidos de descanso são concluídas, os ratos obter aclimatar e não se tornar hiperativo durante a exposição hipertermia. A injecção intraperitoneal de soro fisiológico não pode ser necessário se ratinhos prontamente tomar alimentos e água, durante o tempo de repouso.

6. Depois de todos os ciclos completos, o último passo é examinar os Animais

Não deve haver nenhuma morte durante os ciclos de hipertermia. Cada animal tem que ser visto com muito cuidado no primeiroalguns ciclos. Rapidamente olhar para qualquer molhar ao redor do focinho. Este sintoma é uma assinatura de desidratação. Ratos com tais sintomas deve imediatamente ser dado 0,5 ml de solução salina normal IP e descansar em temperatura ambiente. A maioria dos ratos imobilizados não vai exigir qualquer tratamento adicional e vai conseguir suportar o stress a hipertermia.

Depois de completar os ciclos necessários, os animais podem parecer fraco e desidratado, mas eles vão se recuperar rapidamente em poucas horas.

Figura 1. Variação da temperatura corporal central de ratinhos quando a gaiola foi colocada numa incubadora a 39,5 ° C. Após 90 min a gaiola foi removido da incubadora e colocadas a 25 ° C. Círculos vermelhos indicam picos de alta temperatura.

Figura 2. Variação da temperatu corpo do núcleore de uma Ratos imobilizados durante os ciclos de hipertermia. Após a imobilização do animal, picos elevados temperaturas não foram observar quando a gaiola foi colocada a 39,5 ° C.

Discussão

Já em 5000 aC, os médicos egípcios tratados tumores com o calor. Os gregos reconheceram o valor de calor em alguns tratamentos médicos. Os textos mais antigos da Lei de Moisés menção Hot Springs (Gênesis 36:24) para terapeuticamente elevar a temperatura corporal.

As técnicas empregadas anteriores ou o uso de extratos microbianos pirogênicas para a indução de febre ou banhos de água quente para a indução de hipertermia ^1. No entanto nenhuma destas abordagens po...

Materiais

Termistor	RS componentes	528-8558
CO 2 Incubator	Heraeus	B5060 EK-CO2
Ratos gaiolas	Cidadão Industries Ltd.		Tipo B 365X207X190 centímetros
Alimentação animal	Provimi Índia
Garrafa de água para a gaiola	Fornecedor local		Garrafa de vidro
Ferro de solda	Solderon, Índia
50 ml tubos de centrífuga	BD Biosciences	352070
Cronômetro	Fornecedor local
Uma seringa com agulha de 26G ml	BD Biosciences	309602
Salina	Fornecedor local