Coletar amostras de cabelo para cabelo análise de Cortisol em americanos africanos

Resumo

Análise de concentração de cortisol cabelo fornece uma alternativa às medidas tradicionais de cortisol; no entanto, para coletar amostras de cabelo de afro-americanos, os cientistas precisam ser culturalmente competente e informada. O propósito do presente protocolo é demonstrar uma técnica culturalmente informada para coletar amostras de cabelo para análise de cortisol de afro-americanos.

Resumo

Cortisol, o hormônio normalmente é avaliado em amostras de urina, saliva ou soro. Mais recentemente, cortisol foi extraído com sucesso de cabelo, incluindo os seres humanos. A vantagem da concentração de cortisol de cabelo é que reflete uma retrospectiva representação de função de eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA) ao longo do tempo, muito parecido com hemoglobina A1C representa o controle glicêmico. No entanto, obtenção de amostras de cabelo pode ser um desafio, devido a crenças culturais e práticas de cuidado de cabelo de participantes de minoria. Por exemplo, americanos africanos podem ser relutantes em fornecer amostras. Além disso, alguns pesquisadores são treinados para coletar amostras de cabelo de afro-americanos. O objetivo deste trabalho é apresentar um protocolo culturalmente informado para ajudar os pesquisadores a obter amostras de cabelo de afro-americanos. Para ilustrar os resultados representativos da implementação deste protocolo, são fornecidos dados de identificados de afro-americanos que participaram de um estudo de base comunitária no estresse crônico. Preferências de prática de cabelo são avaliadas. Os participantes são feitos à vontade, mostrando fotos de amostras de cabelo antes de cortar seu cabelo. O single Coe torção e delicadamente o método pull é usado para coletar aproximadamente 30-50 fios de cabelo da região posterior do vértice do couro cabeludo. Este protocolo irá melhorar significativamente a coleta de amostras de cabelo de afro-americanos.

Introdução

Coletando amostras de saliva, sangue ou urina para análise de cortisol tem desafios únicos processuais e carga maior de participantes, conforme o procedimento requer várias amostras de saliva, amostras de venopunção ou coleta de urina de 24 horas. Obtenção de amostras de cabelo de cortisol é uma alternativa simples e aceitável para usar saliva, soro ou urina amostras^1,2. Cortisol cabelo fornece uma representação de retrospectiva de função de eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA) ao longo do tempo. Cerca de 3 cm de cabelo coletado do couro cabeludo é igual a média de liberação de cortisol durante os últimos 3 meses¹. No entanto, pesquisadores encontram desafios exclusivos ao tentar coletar amostras de cabelo entre populações diversas. Estes desafios incluem crenças religiosas ou espirituais, incluindo expondo o cabelo (por exemplo, as mulheres muçulmanas), como o sagrado (grupos de índios americanos), ou normas culturais que conectam o cabelo aos padrões de beleza e auto-imagem.

Na cultura Africano-Americana, particularmente entre as mulheres, o cabelo do couro cabeludo é um aspecto muito pessoal e importante da sua imagem corporal^3,4. Além disso, o históricas de experiências (por exemplo, as experiências de Tuskegee) continuam a promover a desconfiança no processo pesquisa⁵. Alguns folclore Africano-americano e crenças culturais também sugerem que a amostra de cabelo pode ser usada em rituais que poderiam causar danos^6,7. Os investigadores devem estar cientes dos potenciais desafios que eles podem enfrentar nos estudos, quando os participantes Africano-americanos são convidados a fornecer amostras de cabelo.

Além de problemas envolvendo a imagem corporal, as técnicas específicas para coleta e manipulação de amostras de cabelo de afro-americanos podem diferir do que dos americanos europeus^6,7. Por exemplo, afro-americanos pode ter reta fina, encaracolado, kinky, grosseiros, ou uma combinação desses tipos de cabelo, cada um que requerem diferentes técnicas para coletar e prenda o cabelo adequado amostras para processamento. Estudos recentes sobre amostras de adolescentes americanos africanos⁸, bem como amostras multi-étnica⁹, mostraram que coleção de cabelos para medição de nível de cortisol era aceitável entre Africano-americanos participantes. Actualmente, não existem procedimentos treino visual projetados para fornecer a pesquisadores com a habilidade e conhecimento cultural para coletar amostras de cabelo em americanos africanos. O objetivo deste trabalho é apresentar um protocolo culturalmente informado para ajudar os pesquisadores a obter amostras de cabelo adequado do americanos Africano participantes. Este método foi desenvolvido com a consideração cuidadosa das características físicas, psicossociais e culturais relevantes para a coleta de amostras de cabelo de Africano-americanos adultos. Até à data, não há nenhum visuais métodos de recolha de amostras, e este protocolo será o primeiro guia que coleta de amostra de cabelo adequado de detalhes dos Africano-americanos adultos. Para ilustrar os resultados representativos da implementação do protocolo, eliminação identificados dados são apresentados de afro-americanos que participaram de um estudo de base comunitária no estresse crônico que estavam com idade entre 65 e mais velhos. Os dois assistentes de pesquisa masculino e feminino de uma variedade de origens raciais contactado potenciais participantes de uma lista de clínica gerada e panfletos. O investigador principal, que é uma mulher afro-americana, falou em centros comunitários e apartamentos de habitação subsidiados sênior para afro-americanos adultos mais velhos sobre o estudo, incluindo uma descrição dos métodos de coleta de cabelo.

Protocolo

O estudo é aprovado pela Universidade hospitais Cleveland médica centro institucional Review Board, e o protocolo segue as diretrizes de segurança proteção e dados participante conforme indicado pelo Comitê de revisão.

1. preparar o participante para a amostra de cabelo e perguntas de coleta de amostra de cabelo

1. Explique ao participante que a amostra de cabelo coletada é menos cabelo do que o que está perdido normalmente em escovar todos os dias na parte de trás da cabeça (vértice posterior). Diga-o participante que o site da amostra de cabelo é oculto, envolvendo o cabelo e, assim, não é visível após a coleta. Informe o participante que a amostra será usada para medir um hormônio chamado cortisol presente no cabelo^10,11.
2. Tirar a foto de exemplo e mostrar o participante a quantidade de cabelo que serão coletados (fios de 30-50).
   Nota: Consulte a Figura 1 para a foto de uma amostra de cabelo.
3. Pergunte ao participante as cabelo cuidados prática¹² perguntas listadas na tabela 1.

2. coletar a amostra de cabelo

1. Diga-o participante que a amostra é coletada em uma área privada por trás de uma partição portáteis, cortina ou porta fechada. Assegurar que os participantes que, se eles usam uma peruca ou uma peruca, o cabelo não é cortado em uma área onde os outros podem ver. Medir o comprimento do cabelo do couro cabeludo para acabar puxando o cabelo delicadamente e tenso.
2. Se o cabelo for curto (menos de 3 cm), siga o protocolo de cabelo curto na etapa 3 (embora se o cabelo é menos de 1 cm de comprimento, a amostra não pode ser recolhida e, idealmente, o cabelo deve ser pelo menos 3 cm de comprimento). Para cabelos mais de 6 cm, segui o protocolo de cabelo comprido na etapa 4. Caso contrário, continue para a próxima etapa.
3. Certifique-se de que os materiais estão prontos colocando os suprimentos de corte de cabelo (uma folha de papel alumínio, envelope de negócios, salão grau tesouras, pente de despedida de dentes grandes e pequenos, preparações de álcool, fita de pintores, marcador permanente, sem látex luvas [opcionais] e cabelo clipes)¹⁰ , sobre uma superfície ao lado do participante. Limpe a tesoura e pente com a almofada da preparação do álcool antes de coletar a amostra. Corte uma folha de 8 x 10" da folha de alumínio a ser usado para a amostra.
4. Coloque luvas sem látex. Pegue o pente e parte o cabelo horizontalmente ao longo do vértice posterior do couro cabeludo entre as pontas das orelhas.
5. Pegue um clip e mover o cabelo da parte superior da peça e, em seguida, colocar outro clip na parte inferior para expor um retângulo de 5 x 10 cm entre os dois grampos de cabelo solto (aproximadamente o tamanho de um baralho de cartas).
6. Pergunta o participante se eles preferem o uso de um dente largo ou estreito pente através o retângulo de 2-3" de cabelo. Pergunte ao participante como ele ou ela gostaria de ter os cabelos remanescentes no pente Descartado. Dê o cabelo no pente ao participante, ou, se (e somente se) o participante declara que é okey descartar o cabelo solto, descarte os cabelos remanescentes do pente dentro de uma lata de lixo.
7. Segure a aproximadamente 30-50 fios de cabelo para a direita do retângulo de 2-3" e puxe delicadamente e torça o cabelo longe do couro cabeludo em um movimento de rolamento entre os dedos.
8. Certifique-se de que a amostra é coletada como perto a couro cabeludo quanto possível, mas não corte o couro cabeludo. Use tesoura de salão de grau e fazer um corte limpo em linha reta.
9. Segure a amostra de cabelo e garantir que a extremidade da raiz está alinhada com cuidado ao longo do corte.
10. Prenda o cabelo para a folha de papel alumínio gravando com fita do pintor. Não cubra o fim do couro cabeludo e não use fita de pintor no cabelo que é igual ou inferior a 3 cm. lugar corta o cabelo no centro da folha solta e dobre-os em um quadrado, assegurando que o cabelo não cair fora da folha.
11. Pegue o marcador e rotular o fim de couro cabeludo, sobre a folha de alumínio. Use etiquetas de código de barras do premade para anexar à folha e envelope.
12. Dobre a folha de alumínio sem dobrar o cabelo do lado do couro cabeludo para evitar a cabeceira da cama (amarrotado e dobrado o cabelo), coloque-a dentro do envelope de tamanho comercial e selar.
13. Etiqueta fora do envelope com o nome do investigador principal, data e número de identificação exclusivo de estudo do participante, ou usar uma etiqueta de código de barras, se disponível.
14. Armazene a amostra em um local seco, à temperatura ambiente.

3. amostra coleta para cabelo curto (1-3 cm)

1. Siga as etapas 2.3 e 2.4.
2. Após a despedida, pedir o participante a prender o cabelo se separaram perto do couro cabeludo. Cortar o cabelo ao longo da parte, mantendo o cabelo firmemente com o dedo indicador e o polegar¹⁰.
3. Coloque cabelos soltos em papel alumínio e dobre-o firmemente. Não tape o cabelo para a folha.
4. Siga os passos 2.11 através de 2.14.

4. amostra coleção para cabelos longos (mais de 6 cm)

1. Separe o cabelo da esquerda para a direita no vértice posterior.
2. Use os grampos de cabelo para segurar o cabelo extra.
3. Criar uma torção do cabelo e segurar firmemente com o dedo indicador e o polegar para não soltar a amostra de¹⁰.
4. Faça um corte limpo direito mais próximo do couro cabeludo quanto possível. Colete 30-50 fios de cabelo.
5. Se o participante tem cabelo fino, atravessam áreas pequenas de 2-3 (1 centímetros distante) o vértice posterior para esconder o local do corte.
6. Siga os passos 2.10 através de 2.14.

5. processamento da amostra

1. Armazene os pacotes de folha que contém a amostra de cabelo na temperatura indefinidamente até a análise.
   Nota: Cabelo cortisol é extremamente estável no cabelo e pode ser armazenado por anos. Na verdade, cortisol foi medido em amostras de cabelo de restos mumificados¹¹.
2. Analise o cortisol cabelo como publicado anteriormente¹². As amostras podem ser enviadas durante a noite à temperatura ambiente.

Resultados

Em nosso estudo, vinte e um Africano americanos (idade média = 75; SD = 6,9; 85% do sexo feminino) consentiram em participar. Quatro participantes (19%) recusou-se a fornecer uma amostra de cabelo e duas (9,5%) não poderia fornecer uma amostra porque seu cabelo era muito curto. Um total de 15 amostras de cabelo foram obtidas e processadas (tabela 2). O comprimento das amostras de cabelo que foram processadas variou entre 1 cm e 4,8 cm. problemas técnicos incluídos as ...

Discussão

Etapas essenciais no protocolo de coleta de cabelo incluem fornecendo um exemplo de quanto cabelo será tomado, mostrando o site de exemplo (vórtice posterior), uso de torção a única estirpe e puxe delicadamente o método e fixando a amostra com fita de pintor, longe da fim do couro cabeludo. Delicadamente, torcendo e puxando a amostra, o cabelo encaracolado é alongado e o alinhamento final do couro cabeludo é mantido. Isto reduz o tempo de laboratório necessário para alinhar as extremidades do couro cabeludo, me...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Salon grade scissors	Cricket	S-3 550	Carded Professional Hair Shear, 5.5 inch
Large tooth comb	Goody	No catalog number__Goody Stylista Rake Comb	Link to Company website  http://www.goody.com/Products/Styling_Tools/Goody_Stylista_Rake_Comb?colId=d11c04a1-1dd3-4848-a313-046fc6c109ec&c_id=35a36c88-d359-4104-a53c-dfbfd8452780
Small tooth comb	Goody	No catalog number_ Goody Start.Style.Finish. Link to company website http://www.goody.com/Products/Styling_Tools/Goody_StartStyleFinish_Combs?colId=d11c04a1-1dd3-4848-a313-046fc6c109ec&c_id=35a36c88-d359-4104-a53c-dfbfd8452780
Alcohol preps	Kendall Webcol Alcohol Preps	No catalog number. Kendall Webcol Alcohol Preps	https://www.buyemp.com/product/kendall-webcol-alcohol-preps
Painter's tape	3M Scotch	ScotchBlue ORIGINAL Painter’s Tape	https://www.scotchblue.com/3M/en_US/scotchblue/products/painters-tape/
Permanent marker	Sharpie	Black Sharpie Fine Point	http://www.sharpie.com/sharpie/fine/SHFineBlackFine.html
Non-latex gloves	Protégé	93997	Protege®Nitrile Powder-Free Examination Gloves http://aureliagloves.com/product/protege/
Hair clips	Goody	Goody Start.Style.Finish. Curl Clips	http://www.goody.com/Products/Styling_Tools/Goody_StartStyleFinish_Curl_Clips
Envelope	Office Depo	330808	Office Depot® Brand Clasp Envelopes, 9" x 12", Brown, Box Of 100
Foil sheets	Choice	1229105	Box of 500 Sheets Food Service Interfolded Pop-up foil sheets
Pre-weighed 2 ml cryovial	Wheaton, Millville, NJ, USA	W985902
100% isopropanol	Spectrum	I1275 | 67-63-0
Liquid nitrogen	Ohio State Unversity Stores	Gas Cylinder Warehouse	http://osustores.osu.edu/prodservices/liquidnitrogen.aspx
Stainless steel ball bearing	McMasterCarr	9291K42	https://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-balls/=1acqby0
Specially milled aluminum cassettes	FisherScientific	Retsch 20.745.0001
HPLC grade methanol	FisherScientific	A452N1-19	https://www.fishersci.com/shop/products/methanol-hplc-fisher-chemical-6/p-216129
Microcentrifuge tube	Eppendorf North America	22363352	https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Laboratory-Consumables-44512/Tubes-44515/Eppendorf-Safe-Lock-Tubes-PF-8863.html?_ga=2.36544352.1776616592.1511283212-1254533852.1511283212
Cortisol ELISA Kit	Salimetrics LLC, State College, PA, USA	1-3002 (5PK 1-3002-5)	https://www.salimetrics.com/assay-kit/cortisol-salivary-elisa-eia-kit
Centtrifuge for the micorcentrifuge tube	Beckman Coulter	Microfuge 20 series	http://centrifugebybeckman.com/?page_id=727/?pi_ad_id=creative?utm_term=microfuge