Modificação de superfície de Polydopamine bio-inspirada de nanodiamantes e sua redução de nanopartículas de prata

Resumo

Um protocolo facile é apresentado para funcionalizar as superfícies de nanodiamantes com polydopamine.

Resumo

Functionalization superfície de nanodiamantes (NDs) é ainda um desafio devido à diversidade de grupos funcionais nas superfícies de ND. Aqui, demonstramos um protocolo simples para a modificação da superfície multifuncional de NDs usando revestimento de mexilhão-inspirado polydopamine (PDA). Além disso, a camada funcional do PDA no NDs poderia servir como um agente redutor para sintetizar e estabilizar as nanopartículas de metal. Dopamina (DA) pode polimerizar self e espontaneamente formar camadas de PDA em superfícies ND se o NDs e dopamina são simplesmente misturados. A espessura de uma camada de PDA é controlada pela variação da concentração de DA. Um resultado típico que mostra uma espessura de 5 ~ a ~ 15 nm da camada PDA pode ser alcançado pela adição de 50 a 100 µ g/mL para suspensões de ND 100 nm. Além disso, os PDA-NDs são usados como substrato para reduzir os íons metálicos, tais como Ag [(NH₃)₂]⁺, para (AgNPs) de nanopartículas de prata. Os tamanhos das AgNPs dependem as concentrações iniciais de Ag [(NH₃)₂]⁺. Juntamente com um aumento na concentração de Ag [(NH₃)₂]⁺, aumenta o número de NPs, bem como os diâmetros das NPs. Em resumo, este estudo não só apresenta um método fácil para modificar as superfícies de NDs com PDA, mas também demonstra a funcionalidade aprimorada de NDs escorando-se várias espécies de interesse (como AgNPs) para aplicações avançadas.

Introdução

Nanodiamantes (NDs), um romance material à base de carbono, têm atraído a atenção considerável nos últimos anos para o uso em várias aplicações^1,2. Por exemplo, as áreas de superfície elevadas de NDs apoio excelente catalisador de nanopartículas de metal (NPs) devido à sua estabilidade química super e condutividade térmica³. Além disso, NDs desempenhar papéis importantes em bio-imagem, bio-detecção e administração de medicamentos, devido a sua excelente biocompatibilidade e nontoxicity^4,5.

Para estender com eficiência seus recursos, que é valioso para conjugar espécie funcional nas superfícies de NDs, tais como proteínas, ácidos nucleicos e nanopartículas⁶. Embora uma variedade de grupos funcionais (ex., hidroxila, carboxila, lactona, etc.) são criados nas superfícies de NDs durante sua purificação, os rendimentos de conjugação dos grupos funcionais ainda são muito baixos por causa da baixa densidade de cada um grupo químico ativo⁷. Isso resulta em NDs instáveis, que tendem a agregação, limitando ainda mais a aplicação⁸.

Atualmente, os métodos mais comuns utilizados para funcionalizar NDs, são conjugação covalente usando clique sem cobre química⁹, enlace covalente de peptídeo de ácidos nucleicos (PNA)¹⁰e auto montado DNA¹¹. O envolvimento de não-covalente de NDs também foi proposto, incluindo o hidrato de carbono-modificado BSA⁴e revestimento de¹²HSA. No entanto, porque esses métodos são demorados e ineficiente, é desejável que um método simples e geralmente aplicável pode ser desenvolvido para modificar as superfícies do NDs.

Dopamina (DA)¹³, conhecida como um neurotransmissor natural no cérebro, foi amplamente utilizado para aderir e funcionalização de nanopartículas, como nanopartículas de ouro (AuNPs)¹⁴, Fe₂O₃¹⁵e SiO₂¹⁶ . Camadas de PDA auto polimerizadas enriquecem grupos aminoácidos e fenólicos, que podem ser utilizados mais para reduzir diretamente nanopartículas de metal ou para imobilizar facilmente tiol/amina-contendo biomoléculas na solução aquosa. Esta abordagem simples foi recentemente aplicada para funcionalizar NDs por Qin et al. e o nosso laboratório^17,18, embora derivados DA foram empregados para modificar NDs via química clique em anteriores estudos^19,20.

Aqui, descrevemos um método de simples modificação da superfície baseado em PDA que eficientemente functionalizes NDs. Variando a concentração DA, podemos controlar a espessura de uma camada de PDA de alguns nanómetros a dezenas de nanômetros. Além disso, as nanopartículas de metal são diretamente reduzidas e estabilizadas na superfície sem a necessidade de agentes tóxicos de redução adicional de PDA. Os tamanhos de nanopartículas de prata dependem as concentrações iniciais de Ag [(NH₃)₂]⁺. Este método permite a deposição bem controlada de PDA nas superfícies de NDs e a síntese de ND conjugados AgNPs, , que dramaticamente estende a funcionalidade do NDs como excelentes nano-plataformas de catalisador suporta, bio-imagem, e bio-sensores.

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Protocolo

1. Preparação dos reagentes

Atenção: Por favor leia e entenda todas as fichas de dados de segurança (MSDS) antes do uso. Alguns dos produtos químicos são tóxicos e voláteis. Por favor, siga os procedimentos do tratamento especial e os requisitos de armazenamento. Durante o procedimento experimental, use equipamento de protecção pessoal, como luvas, óculos e um jaleco para evitar perigos potenciais.

1. Preparação de tampão Tris-HCl
   1. Dissolver 30,29 g de pó de Tris em 100 mL de deionizada H₂O, certifique-se de que o pó se dissolva completamente e em seguida, transferir a solução para um balão de 250 mL-aferido.
   2. Adicione desionizada H₂O na escala de 250 mL o balão volumétrico para dar 1,0 M de tampão Tris.
   3. Diluir o tampão Tris 1.0 M 100 vezes para dar 0,01 M Tris amortecedor e ajustar o pH a 8.5 usando solução padrão de HCl 1,0 M.
   4. Use um medidor de pH para calibrar o valor do buffer de 0,01 M Tris-HCl pH.
2. Preparação de suspensões de ND
   1. Diluir a 100 nm de monocrystalline ND suspensões (1,0 mg/mL) 50 vezes com o buffer M Tris-HCl 0,01 0,02 mg/mL de suspensões de ND de dar.
3. Preparação da solução de dopamina
   1. Dissolva 20 mg de cloridrato de dopamina em 2,0 mL de tampão de M Tris-HCl 0,01 para dar 10 mg/mL DA solução.
      Nota: A solução DA deve ser recentemente preparada e usada dentro de 15 min.
4. Preparação da solução de OH Ag [(NH₃)₂]
   1. Dissolva 100 mg de AgNO₃ sólido em 10 mL de deionizada H₂O para dar 10 mg/mL solução de AgNO₃ .
   2. Adicionar 1,0 M de hidróxido de amônio (NH₃· H₂O) gota a gota à solução AgNO₃ até amarelo precipitar formas e, em seguida, continuar a adicionar o NH₃· Solução de H₂O até que desapareça a precipitação.
      Nota: Verifique o volume mínimo exigido; preparar imediatamente antes do uso e descarte imediatamente após o uso.
      Atenção: Adicione NH₃· H₂O na coifa com cara de escudos, luvas e óculos de proteção.

2. Síntese PDA camada na superfície do NDs (PDA-NDs)

1. Adicionar a solução recentemente preparada DA (10 mg/mL) para as suspensões de ND dar variadas concentrações finais de 50, 75, 100 µ g/mL de DA. Ajustar o volume da reação total de 1,0 mL, transferir para um tubo de 10 ensaio mL e agitar vigorosamente a 25 ° C, no escuro por 12h.
2. Centrifugue a solução de PDA-NDs para 2 h a 16.000 x g, remover o sobrenadante e lavar três vezes com água desionizada para 1 h em 16, 000 x g cada vez.
3. Re-dispersar os PDA-NDs em 200 µ l de água desionizada com sonication por 30 s. O PDA - revestido NDs estará pronto para utilização posterior.

3. Redução de AgNPs na superfície do PDA-NDs (AgNPs-PDA-NDs)

1. Dilua a 40 µ l dos PDA-NDs pre-sintetizados na etapa 2.3 duas vezes com água desionizada. Adicionar Ag [(NH₃)₂] OH solução dar várias concentrações finais de Ag [(NH₃)₂]⁺ (0.08 0.16, 0,24, 0,40 e 0,60 mg/mL).
2. Ajuste o volume final de 100 µ l em um tubo de 1,5 mL-centrífuga adicionando água desionizada, seguida por sonication por 10 min.
3. Centrifugue os AgNPs-PDA-NDs por 15 min a 16.000 x g para remover os íons de prata livre, descartar o sobrenadante após a centrifugação, adicionar 100 µ l de água deionizada e lavar três vezes com água desionizada a 16.000 x g por 5 min cada tempo.
4. Re-dispersar os AgNPs-PDA-NDs em 100 µ l de deionizedwater com sonication por 30 s para preparar para utilização posterior.

4. Análise de PDA-NDs e Clusters AgNPs-PDA-NDs

1. Espectro ultravioleta-visível (UV)
   1. Use os espectros de UV para monitorar a distribuição de tamanho médio de AgNPs nas superfícies de PDA-ND. Transferir as amostras de AgNPs-PDA-NDs preparadas no passo 3.4 com concentrações variadas de Ag [(NH₃)₂] OH em 1 cubeta de quartzo-cm e monitorar a absorção no comprimento de onda de varredura de 250 a 550 nm.
2. Microscopia de eleição de transmissão (TEM)
   1. Coloque as grelhas de cobre de carbono revestido em uma corrediça de vidro envolvida com parafilm para manter as grades no lugar. Insira a lâmina de vidro com grades TEM anexados o plasma líquido de limpeza. Ligue o limpador de plasma e a bomba de vácuo. Após 5 min, ligue o plasma e as grelhas com um nível de potência média por 3 min de descarga.
   2. Depósito de 5 µ l das amostras do filme de carbono revestido Cu-grades para 3 min. Use papel de filtro para pavio fora a amostra extra da borda da grade. Em seguida, depositar uma gota de água deionizada na grelha por 15 s para remover sais, então wick fora da água com papel de filtro. Repita o procedimento de lavagem duas vezes e permitir a grade para o ar seco para utilização posterior.
   3. Visualize as amostras pela TEM, normalmente em 38.000 ampliação de X. Operar em 200 KV.

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Resultados

A formação de camadas de PDA em superfícies ND foram analisados pela TEM (Figura 1). Observaram-se diferentes espessuras das camadas de PDA como concentrações mais altas DA levou a camadas mais espessas de PDA. Além disso, depois de uma reação de encapsulamento, a cor da solução NDs mudou de incolor ao mais escuro, enquanto o maior a concentração inicial DA era, se tornou a solução mais escura.

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Discussão

Este artigo fornece um protocolo detalhado para a superfície functionalization de NDs com auto polimerizada DA camada e a redução da Ag [(NH₃)₂]⁺ para AgNPs em camadas de PDA (Figura 3). A estratégia é capaz de produzir várias espessuras das camadas de PDA, simplesmente alterando a concentração de DA. O tamanho da AgNPs também pode ser controlado, alterando a concentração original da solução do íon do metal. A imagem TEM na ...

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Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nanodiamond	FND Biotech, Inc.	brFND-100	dispersed in water, and used without further purification
Dopamine hydrochloride	Sigma	H8502-25G	prepare freshly
Silver Nitrate	Fisher	S181-25
Ammonium Hydroxide	Fisher	A669S-500	highly toxic
Tris Hydrochloride	Fisher	BP153-500
TEM grid carbon film	Ted Pella	01843-F	300 mesh copper