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Neste Artigo

  • Resumo
  • Resumo
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  • Protocolo
  • Resultados
  • Discussão
  • Divulgações
  • Agradecimentos
  • Materiais
  • Referências
  • Reimpressões e Permissões

Resumo

Aqui, uma implantação ortotópica sinténica seguida de um procedimento de amputação do osteossarcoma com metástase pulmonar espontânea que pode ser usada para investigação pré-inlinética da biologia da metástase e desenvolvimento de novas terapêuticas é descrita.

Resumo

O avanço mais recente no tratamento do osteossarcoma (OS) ocorreu na década de 1980, quando a quimioterapia multi-agente mostrou melhorar a sobrevida geral em comparação apenas com a cirurgia. Para resolver esse problema, o objetivo do estudo é refinar um modelo menos conhecido de OS em ratos com uma abordagem cirúrgica histológica, de imagem, biológica, implantação e amputação abrangente que prolonga a sobrevivência. Utilizamos um imunocompetente, sprague-Dawley (SD), modelo de rato síngênico com linha celular UMR106 OS implantada (originária de um rato SD) com implantes de tumor tibial ortotópico em ratos machos e fêmeas de 3 semanas de idade para modelar o OS pediátrico. Descobrimos que os ratos desenvolvem tumores pulmonares primários e metastáticos reprodutíveis, e que as amputações de membros em 3 semanas após a implantação reduzem significativamente a incidência de metástase pulmonar e previnem mortes inesperadas. Histologicamente, as OSs primárias e metastáticas em ratos eram muito semelhantes aos humanos. Usando métodos imunohistoquímicos, o estudo mostra que os os ratos estão infiltrados com macrófagos e células T. Um levantamento de expressão proteica das células de OS revela que esses tumores expressam cineases familiares ErbB. Uma vez que essas quinases também são altamente expressas na maioria das OSs humanas, este modelo de rato poderia ser usado para testar inibidores da via ErbB para terapia.

Introdução

O osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo primário mais comum em crianças, adolescentes e adultos jovens. O avanço mais recente no tratamento da OS ocorreu na década de 1980, quando a quimioterapia multi-agente mostrou-se para melhorar a sobrevida geral em comparação apenas com a cirurgia1. O SISTEMA OPERACIONAL desenvolve-se durante o rápido crescimento ósseo, tipicamente ocorrendo em ossos tubulares longos como fêmur, tíbia e úmero. Caracterizam-se por uma aparência osteolítica, osteoblástica ou mista com notável reação peristeal2. A quimioterapia e a ressecção cirúrgica podem melhorar o resultado para pacientes com sobrevi....

Protocolo

Todos os procedimentos e experimentos envolvendo ratos foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Johns Hopkins.

1. O protocolo de cultura celular DA linha celular OS de rato SD UMR-106

  1. Células de cultivo em DMEM, suplementadas com 10% (v/v) FBS, penicilina (10 U/mL)-estreptomicina (10 U/mL) a 37 °C na atmosfera umidificada de 5% de CO2. Realizar experimentos usando células com passagens de 2-812.

2. Injeção intratibial de protocolo de células do SISTEMA

NOTA: Ratos SD gestantes com ac....

Resultados

Ratos de sosseio de ORIGEM imunocompetente são usados para esses estudos de SO, que oferece um modelo animal com um sistema imunológico intacto. Usamos a linha celular UMR106 da ATCC, desenvolvida a partir de células que foram inicialmente isoladas de um SO de um rato SD. Implantamos as células em ratos SD, fornecendo assim um modelo sinténico para as células UMR106 são implantadas na tíbia de ratos SD masculinos e fêmeas de 3 semanas de idade, simulando um modelo de SO pediátrico. Além disso, a implantação .......

Discussão

Ratos com implantes tibiais da OS desenvolvem tumores mensuráveis por 3 semanas após a implantação. Se os membros com tumores forem amputados 3 semanas após a implantação, a incidência de metástase pulmonar é reduzida significativamente. Os OSs são osteolíticos e osteoblásticos. Ratos sem amputação desenvolvem metástases pulmonares de tamanho múltiplo e variado, observadas por radiografia ou necropsia por 7 semanas após a implantação. EGFR, ErbB2 e ErbB4 são expressos em umr106 OS de rato, semelhante.......

Divulgações

Nenhuma divulgação para declarar.

Agradecimentos

Financiamento do NIH através do Instituto Nacional do Câncer, conceder # CA228582. Shun Ishiyama está recebendo uma bolsa da Toray Medical Co., Ltd.

....

Materiais

NameCompanyCatalog NumberComments
AKTCell Signaling TECHNOLOGY4685S
absorbable sutureEthiconJ214H
β-actinSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-47778
β2-AR antibodySANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-569replaced by β2-AR (E-3): sc-271322
Bis–Tris gelsThermo FisherNP0321PK2
Buprenorphine SR LabZooPharmIZ-70000-201908
CD3 antibodyDako#A0452
CD68 antibodyeBioscience#14-0688-82
Chemiluminescent substratecytivaRPN2232
CL-Xposure filmThermo Fisher34089
Complete Anesthesia SystemEVETEQUIP922120
diaminobenzidineVECTOR LABORATORIESSK-4100
DoxorubicinActavisNDC 45963-733-60
EGFR antibodySANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-03replaced by EGFR (A-10): sc-373746
ERBB2 antibodySANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-284replaced by Neu (3B5): sc-33684
ERBB4 antibodySANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-283replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050
ERK antibodySANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-514302
eye lubricantPHARMADERMNDC 0462-0211-38
Hamilton syringe (100 µL)HamiltonModel 1710 SN SYR
horseradish peroxidase-linked secondary antibodycytivaNA934
HRP polymer detection kitVECTOR LABORATORIESMP-7401
HRP polymer detection kitVECTOR LABORATORIESMP-7402
isofluraneBUTLER SCHEINNDC 11695-6776-2
isoflurane vaporizerEVETEQUIP911103
UMR-106 cellATCCCRL-1661
X-rayFaxitronUltraFocus
X-ray processorHope X-Ray Peoducts IncMicroMax X-ray ProcessorHope Processors are not available in USA anymore
wound clipsBECTON DICKINSON427631

Referências

  1. Link, M. P., et al. The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity. New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).
  2. Bielack, S. S., et al.

Reimpressões e Permissões

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