Método de rastreamento psicofísico para avaliar limiares de detecção de sabor em crianças, adolescentes e adultos: o teste de limiar de detecção de sabor (TDT)

Resumo

Ferramentas psicofísicas medem a funcionalidade do sistema de paladar tanto para fins de pesquisa quanto de avaliação de saúde. Este artigo descreve um método para medir limiares de detecção de sabor que podem determinar a menor concentração de sacarose, cloreto de sódio ou glutamato monossódico que pode ser provado por indivíduos com até 6 anos.

Resumo

Este artigo descreve um procedimento de detecção de duas alternativas, de escolha forçada, de escada, chamado teste de detecção de sabor (TDT), que fornece uma medida confiável de limiares de detecção de sabor doce, salgado e umami da infância à idade adulta. As vantagens do método incluem procedimentos idênticos para crianças e adultos, permitindo assim a determinação de diferenças relacionadas à idade e individuais na percepção do sabor, se houver, e tarefas que podem ser concluídas em um período de tempo relativamente curto, não dependem de atenção contínua ou requerem memorização, controle para vieses de resposta subjetivo e minimizam o impacto do desenvolvimento da linguagem. Após um jejum de 1 hora, os participantes são apresentados com pares de soluções; em cada par, uma solução é a água, e a outra solução contém concentrações variadas do tastant.

Usando um método de degustação de boca inteira, os participantes provam cada solução (sem engolir e enxaguar entre as degustações) e, em seguida, apontam para a solução com um sabor ou que tem um sabor diferente da água. A concentração do estímulo no par subsequente aumenta após uma única resposta incorreta e diminui após duas respostas corretas consecutivas. Uma reversão ocorre quando a sequência de concentração muda de direção. A tarefa é considerada concluída após a ocorrência de quatro reversões, desde que haja um máximo de dois passos de diluição entre duas reversões sucessivas, e a série de reversões não formam um padrão ascendente. Esses critérios adicionais garantem maior confiabilidade nos resultados. O TDT é então calculado como a média geométrica das concentrações das quatro reversões. Este método tem relevância no mundo real, pois fornece informações sobre uma dimensão da percepção do sabor que é independente da hedônica, e que pode mudar com o envelhecimento e certos estados da doença, tornando-o um valioso teste psicofísico.

Introdução

O senso de paladar funciona como um gatekeeper, determinando em parte se um indivíduo rejeita um alimento ou líquido ou o aceita na cavidade oral. A psicofísicado paladar - o estudo das relações entre estímulos químicos distintos e as sensações e percepções que produzem - fornece informações importantes sobre o funcionamento do sistema de paladar¹. Não só existem vários gostos básicos (doces, salgados, amargos, azedos, umami), mas cada qualidade de sabor pode ser caracterizada por dimensões perceptuais distintas, incluindo o quão sensíveis os indivíduos são em detectar o estímulo químico ou reconhecer seu gosto, e o quanto eles gostam ou não gostam da sensação do sabor.

Este artigo descreve um método psicofísico que pode ser usado para medir de forma confiável os limiares de detecção de sabor (ou seja, a menor concentração de um tastant que pode ser detectado) em indivíduos com até 6 anos. Desde a infância até a idade adulta, os limiares de detecção têm sido utilizados em avaliações clínicas dos efeitos dos estados de trauma ou doença^2,3 e em aplicações básicas de pesquisa, para estudar os efeitos da dieta, envelhecimento, desenvolvimento, obesidade e tabagismo no sistema de paladar, bem como relações genótipo-paladar^{fenotipo 4,5,6,7,8,9,10, 11}.

Este teste de limiar de detecção de sabor (TDT), que normalmente leva uma média de 15 minutos por estímulo (faixa: 4-35 min; mediana: 13 min) para completar, consiste em um procedimento de rastreamento de duas alternativas, de escolha forçada, que tem sido usado para medir a menor concentração de sacarose, cloreto de sódio (NaCl) ou glutamato monossódico (MSG) em solução que possa ser detectada como um sabor. Conforme descrito aqui, os participantes são apresentados com pares de soluções; em cada par, uma solução é a água, e a outra solução contém concentrações variadas do tastant. Usando um método de degustação de boca inteira, os participantes provam cada solução (sem engolir) e, em seguida, apontam para a solução com um sabor ou que tem um sabor diferente da água. A concentração do estímulo no par subsequente aumenta após uma única resposta incorreta e diminui após duas respostas corretas consecutivas. Uma reversão ocorre quando a sequência de concentração muda de direção.

A tarefa é considerada concluída após a ocorrência de quatro reversões, desde que haja um máximo de dois passos de diluição entre duas reversões sucessivas, e a série de reversões não formam um padrão ascendente. Esses critérios adicionais, estabelecidos na prática clínica pelo Dr. Cowart e colegas do Centro de Pesquisa Clínica Monell-Jefferson Chemosensory^2,garantem maior confiabilidade nos resultados e aumentam a confiança na validade das medidas individuais de funcionamento do paladar. Pesquisas têm utilizado esse método para determinar limiares de detecção de sabor para sacarose, sal ou MSG em centenas de crianças saudáveis com até 6 anos, adolescentes e adultos^{4,5,6,7,8,9,10,11} e demonstraram que a maioria (>~80%) das crianças pode completar a tarefa psicofísica^{4,6, 7,8}, destacando a adequação do método para populações pediátricas.

Protocolo

1. Considerações gerais

NOTA: Este protocolo para o teste TDT descreve os procedimentos para preparar as soluções de sabor e para determinar limiares de detecção de sabor para sacarose, NaCl ou MSG, usando como exemplo a sacarose. Este método foi aprovado pelo Escritório de Assuntos Regulatórios da Universidade da Pensilvânia. Para os estudos descritos aqui, obteve-se consentimento informado de cada participante adulto ou responsável/pai/legal dos participantes pediátricos. O parecer favorável informado foi obtido de cada criança com sete anos ou mais de idade antes da participação.

1. Como mostrado na Tabela 1, prepare 17 soluções, variando de 1 M a 0,00010 M, que estão a passos de quarto de log. O ideal é usar água ultrauso, como água destilada (dH₂O) como diluente e não água da torneira devido a problemas de sabor¹². Leve à geladeira as soluções por um máximo de 2 semanas, mas apenas se o protocolo descrito abaixo for cumprido.
2. Após o consentimento informado ser obtido dos participantes adultos ou dos pais/responsáveis legais e, quando aplicável, parecer favorável dos participantes pediátricos, realizar os testes em uma sala confortável e privada que, idealmente, tem uma pia para expectativa. Certifique-se de que as soluções não sejam engolidas, mas sim swished na cavidade oral e cuspido para fora. Se uma pia não estiver disponível, forneça um copo grande para cuspir.
3. Certifique-se de que o pessoal de teste não use produtos fortemente perfumados e limite a conversa para instrução ou explicação de métodos. Instrua os participantes adultos e os pais/responsáveis legais dos participantes infantis que o participante deve abster-se de comer ou beber qualquer coisa, exceto água, ou usar produtos de tabaco (somente para adultos) por 1h antes do teste.

2. Materiais e receitas para fazer soluções de estímulo ao sabor

NOTA: Instruções detalhadas para fazer a solução de estoque (1000 mmol/L; a seguir referida como estoque) e as 16 diluições seriais da solução de estoque (em etapas de registro trimestral) para sacarose, NaCl ou MSG são fornecidas aqui. A Tabela 1 lista as concentrações de cada etapa de diluição. A Figura 1 ilustra os passos para fazer a solução de estoque através das etapas de diluição 1-16. O volume de solução feita será suficiente para determinar os limites para pelo menos quatro participantes.

Passo	Molar	Sacarose (g/L)	NaCl (g/L)	MSG (g/L)
	(1/4 unidades de log separadas)
0	1 M	342.3	58.44	187.13
1	0,562 M	192.37	32.84	105.17
2	0.316 M	108.17	18.47	59.13
3	0.178 M	60.93	10.4	33.31
4	0.100 M	34.23	5.84	18.71
5	0,056 M	19.17	3.27	10.48
6	0,032 M	10.95	1.87	5.99
7	0.018 M	6.16	1.05	3.37
8	0.010 M	3.42	0.58	1.87
9	0,0056 M	1.92	0.33	1.05
10	0,0032 M	1.09	0.19	0.6
11	0.0018 M	0.62	0.11	0.337
12	0,0010 M	0.34	0.058	0.187
13	0,00056 M	0.19	0.033	0.105
14	0,00032 M	0.11	0.019	0.059
15	0.00018 M	0.06	0.0105	0.034
16	0,00010 M	0.03	0.0058	0.019

Tabela 1: Etapas de concentração e molaridade correspondente de soluções de sacarose, cloreto de sódio (NaCl) e glutamato monossódico (MSG) necessárias para o teste de Limiar de Detecção de Sabor (TDT).

1. Prepare materiais de teste.
   1. Obtenha uma fonte de sacarose de grau alimentar, NaCl ou MSG.
   2. Limpe e esterilize todos os vidros necessários (ver Tabela de Materiais).

Figura 1: Instruções passo a passo para fazer soluções de estoque através das etapas de diluição #1-16. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

2. Faça solução de estoque, como retratado na Figura 1A-C.
   1. Rotule todos os vidros com a data, tipo de tastant e Stock.
   2. Pesar o tastant em um barco de pesagem descartável em uma escala precisa de 0,01 g, e transferir para o béquer de 2000 mL.
      NOTA: Os valores necessários para preparar os estoques são de 684,60 g para sacarose, 374,26 g para MSG e 116,88 g para NaCl.
   3. Enxágüe com dH₂O qualquer tastant restante no barco de pesagem, e despeje no béquer. Adicione 1500 mL de dH₂O para dissolver a amostra.
   4. Transfira o conteúdo do béquer para o frasco volumoso de 2000 mL usando um funil, e enxágue o béquer e funil com mais dH₂O, despejando a água de enxágue no frasco. Encha o frasco com dH₂O até a marca de 2000 mL, e afixe a rolha no frasco. Inverta para misturar até que o tastant seja dissolvido.
3. Faça soluções #1-4,como descrito na Figura 1D-F.
   1. Etiqueta 1000 mL frascos volumosos com números de 1 a 4 e correspondentes garrafas de vidro de 1000 mL com a data, tipo de tastant e Stock to Step 4.
   2. Transfira 560 mL, 320 mL, 180 mL e 100 mL de estoque em frascos 1, 2, 3e 4, respectivamente. Encha os frascos 1-4 com dH₂O até a marca de 1000 mL, afixe com rolha e misture até que o tastant seja dissolvido. Despeje o conteúdo de cada frasco em sua garrafa de vidro correspondente de 1000 mL (rotulada passo 1 a passo 4) usando um funil, se necessário.
   3. Despeje a solução restante do estoque no estoquerotulado da garrafa; feche bem a tampa e coloque na geladeira a 4 °C.
4. Faça soluções #5-16,como descrito na Figura 1G-I.
   1. Rotule doze garrafas de 1000 mL com a data, tipo de tastant, e passo 5 para o passo 16.
   2. Alinhe as garrafas em uma grade 4 x 4 com as garrafas contendo o passo 1 - 4 soluções na primeira fila (como mostrado na Figura 1G-I).
      NOTA: Este posicionamento permite uma série de diluição simples, de tal forma que começa com o passo mais diluído da linha (por exemplo, passo 4) e termina com o passo mais concentrado (por exemplo, passo 1).
   3. Pipet 50 mL das etapas 1, 2, 3e 4 nas garrafas 5, 6, 7e 8, respectivamente. Adicione 450 mL de dH₂O às garrafas 5-8, afixe as rolhas e inverta para misturar(Figura 1 H).
   4. Repita o processo começando pela segunda linha. Pipet 50 mL das etapas 5, 6, 7e 8 nas garrafas 9, 10, 11e 12, respectivamente. Adicione 450 mL de dH₂O às garrafas 9-12,afixe as rolhas e inverta para misturar.
   5. Repita o processo começando pela terceira linha(Figura 1 I). Pipet 50 mL das etapas 9, 10, 11e 12 nas garrafas 13, 14, 15e 16, respectivamente. Adicione 450 mL de dH₂O às garrafas 13 - 16, afixe as rolhas e inverta para misturar. Coloque as tampas nas garrafas 1 - 16,feche bem as tampas e guarde na geladeira a 4 °C.
   6. Encha várias garrafas de vidro esterilizadas de 120 mL com dH₂O, feche bem as tampas e guarde na geladeira a 4 °C.

3. O método psicofísico: TDT

1. Apresentar aos participantes copos de medicamentos contendo pares de soluções, uma delas é uma dada concentração de um tastant e o outro dH₂O.
   NOTA: Para o primeiro par, o tastant emparelhado com dH₂O é a etapa de concentração 10 ao determinar limiares de sacarose e passo 12 ao determinar limiares de NaCl ou MSG. As concentrações de tastant na primeira etapa foram escolhidas porque cada uma delas está alguns passos abaixo do limiar médio de detecção para esse tastante particular. No entanto, o TDT é uma ferramenta confiável para medir limites, independentemente de estes estarem acima ou abaixo da média.
2. Peça aos participantes que provem ambas as soluções sem engolir e enxaguar a boca com dH₂O entre as degustações. Instrua-os a apontar para o copo de remédio que eles acham que tem um gosto nele ou que tem um gosto diferente da água.
   NOTA: A concentração do tastant apresentada durante os pares subsequentes depende ou não da resposta do participante estar correta (ou seja,o participante apontou para o tastant). O método é um procedimento de escolha forçada, o que significa que os participantes não podem responder dizendo "nenhum" ou "eu não sei"; em vez disso, eles devem escolher uma das duas soluções. O método é um procedimento de escada porque os estímulos de sabor são apresentados em ordem ascendente (maiores concentrações de tastant) ou descida (menores concentrações de tastant), dependendo da resposta do participante¹³. Para facilitar a descrição, foram fornecidas instruções para fazer a série de sacarose e determinar os limiares de detecção de sacarose. Os métodos para MSG e NaCl são idênticos com duas exceções: (a) concentração de tastant necessária para fazer a solução de estoque difere(Tabela 1), e (b) como observado acima, a concentração que o teste começa é a etapa 12 para NaCl ou MSG, em vez da etapa 10 para sacarose.
3. Ao avaliar os limiares de detecção na população pediátrica, limite o teste a um único tastant por sessão.
   NOTA: Os adultos podem completar todos os três limiares em uma única sessão.

Figura 2: Grade de rastreamento limiar. (A) Registrando limiares de detecção de sabor. (B) Configuração de uma bandeja. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

4. Preparação de materiais antes dos testes

1. Gere uma sequência de randomização para a ordem de apresentação de estímulos dentro de pares e preencha a linha superior da grade de rastreamento (Figura 2A) para cada par colocando W na caixa se a água vier primeiro, ou T se tastant vem em primeiro lugar.
2. Retire as garrafas contendo soluções(passos 0 - 16) e dH₂O da geladeira, e transfira ~120 mL da solução para cada passo em garrafas de vidro esterilizadas 120 mL adequadamente rotuladas 2h antes do teste.
3. Devolva a etapa 0 - 16 garrafas para a geladeira, e permita que as soluções transferidas se equilibrem até a temperatura ambiente.
4. Rotular duas, 12 xícaras de muffin com o número do par, e marcar posições que manterão as xícaras de medicamentos dH₂O com um W (Figura 2B).
   NOTA: Embora não se saiba quantos pares serão necessários, preencha os copos de medicamentos que estão nas posições W com 10 mL de dH₂O para os primeiros 6 pares.

5. Preparação dos participantes para testes

1. Instrua os adultos a se absterem de comer, beber ou usar produtos de tabaco e instruir os pais a não dar ao participante do filho nada para comer ou beber por pelo menos 1h antes do teste.
2. Sentar um participante em uma mesa em frente a uma folha de papel, rotulada com os números 1 e 2 (Figura 3).
   NOTA: Os participantes não devem ver os estímulos de sabor até serem colocados à sua frente; isso pode ser alcançado por ter uma partição opaca separando o participante do investigador.
3. Permita que os participantes se aclimatar à sala de testes e ao testador por pelo menos 10 minutos.
4. Use um cronômetro para cronometrar os intervalos interestimulosos dos anos 10 (tempo de expectativa do primeiro estímulo para beber o segundo estímulo).

Figura 3: Criança participando de um teste de detecção de limiar de sabor. Um par de soluções é colocado sobre a mesa na frente do participante na ordem que deve ser provado. A participante é solicitada a provar a solução na posição 1 para 5 s, para esperar, enxaguar a boca com dH₂O, e repetir para a solução na posição 2. Após a degustação das duas soluções, o participante é convidado a apontar para a solução que tem um sabor ou gostos diferentes da água. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

6. Instruções verbais aos participantes

1. Participantes pediátricos
   1. Mostre as taças para o participante e diga: "Vamos jogar um jogo com coisas a gosto. Aqui estão duas xícaras. Você vai provar o que está dentro do primeiro copo, swish-lo em torno de sua boca, mas não engolir, e eu vou te dizer quando cuspir na pia (ou copo). Em seguida, você vai enxaguar com água, e provar o que está dentro do segundo copo. Eu vou te dizer quando cuspir. Então eu quero que você aponte para aquele que tem um gosto diferente da água. Se você não tem certeza, é só adivinhar. Você então vai enxaguar sua boca duas vezes com água, e nós faremos isso de novo. Não há resposta certa ou errada; queremos saber qual você acha que tem um gosto.
   2. Após cada resposta, recompense o participante dizendo "Obrigado. Você está fazendo um bom trabalho!
2. Adolescentes e adultos
   1. Mostre as xícaras para o participante e diga: "Vamos te dar soluções para provar. Aqui estão duas xícaras. Você vai provar o que está dentro do primeiro copo, swish-lo em torno de sua boca, mas não engolir, e eu vou te dizer quando cuspir na pia (ou copo). Em seguida, você vai enxaguar com água e provar o que está dentro do segundo copo. Eu vou te dizer quando cuspir. Então eu quero que você aponte para aquele que tem um gosto diferente da água. Se você não tem certeza, é só adivinhar. Você então vai enxaguar sua boca duas vezes com água, e nós faremos isso de novo. Não há respostas certas ou erradas; queremos saber qual você acha que tem um gosto.
   2. Após cada resposta, recompense o participante dizendo "Obrigado. Você está fazendo um bom trabalho!

7. Instruções do investigador: Limiares de detecção de sabor

1. Conforme indicado na grade de rastreamento, inicie na etapa 10 para sacarose (ou etapa 12 para NaCl ou MSG). Coloque duas xícaras de medicamentos, uma contendo 10 mL da etapa 10 e outra contendo dH₂O na folha de papel com 1 e 2 na frente do participante(Figura 3).
   NOTA: O número em que a solução de água ou sabor é colocada é determinado pela ordem gerada e aleatória de apresentação de estímulos. Por exemplo, na Figura 2, a ordem aleatória para o par 1 é W (água primeiro), de modo que o copo contendo água está na posição 1, e o que contém o passo 10 está na posição 2.
2. Instrua o participante a provar a solução na posição 1 por swishing; após 5 s, instrua o participante a esperar, enxaguar a boca com água e esperar novamente.
3. Instrua o participante a provar a solução na posição 2, swishing e esperar depois dos 5 s.
4. Peça ao participante para apontar para a solução que tem um sabor ou gostos diferentes da água. Se o participante disser nenhum dos dois, instrua o participante a escolher um.
   NOTA: Os participantes não podem voltar atrás e refasar nenhuma das soluções e devem escolher uma das duas.
5. Depois de fazerem sua escolha, instrua-os a enxaguar a boca com água, e colocar um sinal de mais (+) na grade se o participante escolheu o copo com o tastant(resposta correta), ou um sinal de menos (-) se eles escolheram o copo com água(resposta incorreta).
6. Continue até o segundo par, observando que a concentração do tastant depende da resposta do participante para o primeiro par. Se o participante estava incorreto para o primeiro par (o participante escolheu W), então proceda na grade, observando que o tastant no segundo par será a próxima maior concentração(etapa 9). Se o participante estiver correto (escolheu T),então note que o tastant no segundo par será o mesmo passo 10. Consulte a grade para a ordem de apresentação(W ou T first).
7. Repita este processo descrito nas etapas 7.2-7.5. Se o participante estiver correto duas vezes seguidas na etapa 10 (escolha T em ambas as vezes), lembre-se que o próximo par conterá a próxima concentração inferior(passo 11). Se o participante estiver incorreto para o par 2 (picks W),prossiga na grade para a próxima maior concentração(etapa 9).
8. Continue este processo, subindo a grade para a próxima concentração maior com cada resposta incorreta, ou descendo a grade para a próxima concentração inferior após duas respostas corretas seguidas.
9. Circule os degraus na grade onde há uma reversão- uma mudança de direção na precisão na resposta do participante, ou seja, quando o participante se torna mais ou menos bem sucedido na identificação do tastant ao provar os próximos passos na escada.
   NOTA: Especificamente, o participante passa de não identificar T em uma etapa (- )para identificar T com sucesso na próxima etapa mais concentrada duas vezes seguidas (++), ou o participante passa de identificar T duas vezes na mesma etapa (++) para não identificar T quando dado o próximo passo menos concentrado; essa falha pode ocorrer durante a primeira ou segunda apresentação da etapa menos concentrada (- ou +-).
10. Continue com os testes de gosto até que quatro reversões sejam alcançadas, e liste os números de etapas dessas quatro reversões.
11. Determinar que as quatro reversões atenderam aos critérios desejados; ou seja,as reversões sucessivas não são mais do que dois passos de distância uma da outra, e há dois pares em que o participante identificou corretamente o T duas vezes na mesma etapa. PARE e vá para 7.13 para calcular o limiar de detecção.
12. Alternativamente, determinar que as quatro reversões não atenderam aos critérios; ou seja,as reversões sucessivas estão a mais de 2 passos um do outro, ou pelo menos 2 pares não estão presentes em que o participante identificou corretamente o T duas vezes na mesma etapa. CONTINUE com os testes até quatro reversões atenderem aos critérios, ou o participante atinge o topo da grade (o limiar é de 1 M(estoque)) ou continua a fornecer respostas corretas e chega à parte inferior da grade, dando respostas corretas duas vezes na etapa 16 (o limiar é de 0,00010 M(etapa 16)).
13. Determine o limiar de detecção do participante calculando a média aritmética dos valores de registro da molaridade dessas quatro reversões:
    média aritmética = (etapa de concentração de tronco de reversão 1 + etapa de concentração de tronco de reversão 2 + etapa de concentração de tronco de reversão 3 + etapa de concentração de tronco de reversão 4) / 4.
    NOTA: Isso equivale ao cálculo da média geométrica das concentrações das últimas quatro reversões:
    
14. Descarte as soluções de sabor nãoutilizados que foram transferidas para garrafas de 120 mL durante a preparação de materiais para testes.

Resultados

A Figura 4 ilustra os resultados da grade de rastreamento de quatro participantes representativos (A-D). As reversões, que são mudanças na direção das respostas do participante, são denotadas por círculos e numeradas por ordem de ocorrência para ilustrar quando os critérios são atendidos. As inversões são codificadas por cores para ilustrar quando a mudança de direção passa de incorreta para correta (verde) ou da correta para incorreta (vermelha).

A Figura 4A mostra a grade de rastreamento de um participante cujas respostas atenderam aos critérios nas quatro primeiras reversões. Por ordem de ocorrência, as reversões para este participante ocorreram nas etapas 8, 9, 8e 10. Esta sequência atendeu aos critérios porque (a) não houve mais do que dois passos entre as duas reversões consecutivas (passo 8 vs 9, 9 vs 8, 8 vs 10), e (b) havia dois conjuntos de pares em que o participante identificou corretamente o T duas vezes na mesma etapa (8 ). O limiar de detecção para este participante é determinado pela média geométrica das concentrações dessas quatro reversões:

Média geométrica = 0,0065 M

A Figura 4B mostra a grade de rastreamento de um participante com um limiar de detecção de sacarose relativamente alto (baixa sensibilidade) cujas respostas nas quatro primeiras reversões não atenderam aos critérios. Por ordem de ocorrência, as quatro primeiras reversões ocorreram nas etapas 9, 10, 8e 9. Embora essas reversões estivessem dentro de duas etapas uma da outra (9 vs 10, 10 vs 8, 8 vs 9), não havia dois conjuntos de pares em que o participante identificasse corretamente o T duas vezes na mesma etapa (8 vs 9). Essas reversões formaram um padrão ascendente; portanto, os critérios não foram atendidos e os testes continuaram. As reversões 6-9 atenderam aos critérios porque não havia (a) não mais do que dois passos entre as duas reversões sucessivas ( passo8 vs 6, 6 vs 7, 7 vs 6), e (b) dois conjuntos de duas respostas corretas seguidas foram obtidos na mesma etapa ( passo6 ). O limiar de detecção para este participante é determinado pela média geométrica das concentrações dessas quatro reversões:

Média geométrica = 0,021 M

A Figura 4C mostra a grade de rastreamento de um participante com um limiar de detecção de sacarose relativamente baixo (alta sensibilidade) cujas respostas nas quatro primeiras reversões não atenderam aos critérios. As inversões ocorreram nos passos 9, 10, 9e 13. Embora em dois pares (pares 3-4 e 7-8), o participante identificou corretamente o tastant duas vezes na mesma etapa(passo 9),houve mais de dois passos entre as inversões 3 e 4 (passo 9 vs 13). Assim, os testes continuaram. As últimas quatro reversões (etapas 13, 12, 13, 12) atenderam aos critérios porque (a) não foram mais do que dois passos entre quaisquer duas reversões sucessivas (13 vs 12), e (b) o participante identificou corretamente a mesma concentração(passo 12) quando dado os pares 17-18 e 20-21 . O limiar de detecção para este participante é determinado pela média geométrica das concentrações dessas quatro reversões:

Média geométrica = 0,00075 M

A Figura 4D mostra a grade de rastreamento de um participante com um limiar de detecção de sacarose relativamente alto (baixa sensibilidade) cujas respostas atenderam aos critérios dentro das quatro primeiras reversões(etapas 6, 7, 5, 8). Não houve mais do que dois passos entre as duas reversões consecutivas (6 vs 7, 7 vs 5, 5 vs 8), e o participante identificou corretamente a mesma concentração(passo 6) quando dado os pares 7-8 e 13-14. O limiar de detecção para este participante é determinado pela média geométrica das concentrações dessas quatro reversões:

Média geométrica   = 0,024 M

Figura 4: Rastreamento de grades. (A-D) Dados representativos de quatro sujeitos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussão

O teste TDT é um procedimento de escada de duas alternativas, de escolha forçada, que usa regras rígidas para atender aos critérios do que os métodos^{anteriores 12,}garantindo assim uma medida de resultado mais estável. Utilizando critérios estabelecidos no Centro de Pesquisa Clínica Monell-Jefferson Chemosensory², o TDT é um método confiável de swish-and-spit que mede a menor concentração de sacarose, NaCl ou MSG em solução que pode ser detectada pelo gosto entre indivíduos de até 6 anos. Se concluídos como descrito, incluindo a aplicação dos participantes enxaguando a boca antes e depois de cada degustação, os resultados são confiáveis e rápidos e fornecem uma visão de uma dimensão importante do sabor que é independente do hedônico⁸.

Embora a aplicação de ferramentas psicofísicas para medir essa dimensão do sabor esteja bem estabelecida no campo, muitos métodos não foram validados para uso em crianças^{de 14 anos}. Existem várias etapas críticas no protocolo, algumas das quais se aplicam especialmente às crianças [veja também referência¹⁵]. Em primeiro lugar, os critérios para atingir o limiar não devem depender apenas da ocorrência de quaisquer quatro reversões ou variar em decorrência da idade do participante. Em vez disso, deve haver um máximo de dois passos de diluição entre duas reversões sucessivas, e a série de reversões não deve formar um padrão ascendente, o que pode ser o caso quando o participante está simplesmente adivinhando ou não atendendo à tarefa. Esses critérios adicionais, estabelecidos com base na experiência clínica^2,permitem a avaliação do funcionamento do sistema de paladar do indivíduo, em parte porque controlam os falsos positivos, especialmente quando o participante está simplesmente adivinhando¹⁶.

Em segundo lugar, o procedimento é de escolha forçada, portanto, se os participantes responderem que "nenhuma" ou "ambas" soluções têm gosto, essa resposta não é aceita. Em vez disso, eles são ditos para "adivinhar". Durante o TDT, os participantes muitas vezes sentem que estão adivinhando, mas isso não deve ser aceito como prova de que eles não estão completamente inconscientes dos estímulos de sabor¹⁷. Além disso, os indivíduos podem variar em seus critérios internos para o que constitui uma sensação de sabor e, portanto, sua vontade de dizer que uma solução tem ou não gosto. Terceiro, porque a recência da alimentação afeta a percepção do paladar¹⁸, padronizando o tempo desde a última vez que o participante comeu ou bebeu qualquer coisa, mas a água é importante para reduzir a variabilidade entressubje causada pela adaptação sensorial ou aprimoramento. Em quarto lugar, os tastants aqui utilizados são palatáveis e apresentados em solução, não em uma matriz alimentar. Quando uma matriz alimentar é usada, intervalos interestimulosos mais longos podem ser necessários para que os alimentos limpem o paladar. Embora este método tenha sido usado para medir limiares de detecção de tastants azedos ou amargos entre adultos^2,11, seu uso para medir limiares de detecção para tastants inpalatáveis entre algumas crianças pequenas pode ser problemático devido à sua sensibilidade aumentada a alguns tastants amargos e sua potencial relutância em continuar a participação¹⁹.

Um procedimento de escolha forçada de apresentar até quatro pares de concentrações ascendentes de soluções de degustação amarga e dH₂O foi bem sucedido para populações pediátricas^19,20. Em quinto lugar, incorporado no contexto de um jogo, o método é sensível às limitações cognitivas e linguísticas das crianças, e requer apenas que o participante aponte para o copo que contenha o sabor. Em estudo recente, 80% das crianças prestaram atenção sustentada por, em média, 15 min e atingiram os critérios⁸. Tais informações sobre a conclusão das tarefas devem ser relatadas, especialmente quando as populações pediátricas são estudadas.

O presente método tem relevância no mundo real e tem sido utilizado para avaliar limiares de detecção para os outros gostos básicos de azedo (ácido cítrico) e amargo (quinino)² e em adultos de idades variadas⁸. Como o método não requer respostas verbais, as instruções devem ser facilmente traduzidas para outras línguas^21,tornando-se uma valiosa ferramenta psicofísica para cientistas em todo o mundo. No entanto, como qualquer outro método psicofísico, provavelmente haverá limitações em seu uso, particularmente com crianças mais jovens. O procedimento pode ser mais difícil de alcançar critérios para crianças do que para adultos. Em um estudo, 20% das crianças não atingiram critérios, em comparação com 5% dos adultos⁸. As razões para a não conclusão incluíram comportamento desfocado, falha em entender a tarefa ou ficar cansado e incapaz de continuar.

Os achados de estudos que utilizaram esse TDT de sabor contribuíram extensivamente para o diagnóstico de ageusia do sabor na clínica e promoveram a compreensão de como a sensibilidade ao sabor muda com a idade e o estado de saúde. A avaliação clínica dos pacientes revelou que os limiares de detecção de sacarose ≥ 0,025 M para ambos os sexos e limiares de detecção de NaCl ≥ 0,012 M para homens ou ≥ 0,010 M para mulheres são considerados anormais². Entre os adultos, há um declínio gradual na sensibilidade ao sabor para sabores doces, salgados, azedos e amargos que continua até a oitava década²². Adultos mais jovens normalmente têm limiares de detecção de sabor mais baixos (são mais sensíveis) do que os idosos^22,23,24,25. No entanto, crianças e adolescentes têm limiares de sabor para sacarose maior (menos sensível)⁸ e que são menores (mais sensíveis) do que os de adultos para o gosto amargo do propylthiouracil, com o padrão adulto emergindo durante a adolescência^19,26.

Os limiares de detecção de sabor têm se mostrado relacionados a indicadores de saúde. Por exemplo, os limiares de detecção de sabor salgado correlacionaram-se positivamente com a pressão arterial sistólica entre as crianças com peso normal⁷, enquanto as crianças com obesidade central apresentaram limiares de detecção mais baixos para sacarose (mais sensível) do que aquelas sem obesidade central⁴, com achados semelhantes entre adolescentes²⁷. No entanto, a relação entre obesidade e limiares de detecção de sacarose não foi observada em mulheres adultas, e mulheres adultas com obesidade apresentaram maiores limiares de detecção (foram menos sensíveis) ao sabor salgado do MSG⁹.

Embora as pesquisas sobre as diferenças nos limiares de detecção entre crianças e adultos sejam limitadas, sabe-se que os limiares de detecção de sabor de sacarose não prevêem preferências de sabor doce ou classificações de intensidade supratensão da infância à idade adulta^8,28,29, fornecendo mais evidências de que a sensibilidade ao sabor representa uma dimensão distinta do sabor que é independente das preferências e, portanto, sugerindo diferentes mecanismos subjacentes. Uma maior compreensão da complexa interação entre idade, hábitos alimentares, estado de saúde e sensibilidade do sistema de paladar, e se tais interações diferem entre os principais tastantes, é uma área importante para futuras pesquisas.

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Digital stopwatch	Fisherbrand	14-649-7
Funnel	Thermo Scientific	10-348D
Glass beaker, 2000 mL	Cole-Parmer	NC0821737
Glass bottles with lids, 120 mL (25)	Fisherbrand	FB02911904
Glass bottles with lids, 950 mL (17)	Fisherbrand	FB02911903
Graduated glass cylinders, 100 mL	PYREX	08-552E
Graduated glass cylinders, 1000 mL	PYREX	08-566G
Graduated glass cylinders, 50 mL	PYREX	08-566C
Graduated glass cylinders, 500 mL	PYREX	08-566F
Medicine cups	Medline	22-666-470
Mini Cupcake, 48-cup Muffin pan (2)	Wilton	NA
Monosodium glutamate (MSG)	Ajinomoto	NA
Pipet Fillers	Thermo Scientific	14-387-163
Pipets 50 mL	Fisherbrand	13-676-10Q
Sodium chloride (NaCl)	Morton	NA
Sucrose, Crystal, NF	Spectrum Chemical MFG Corp	57-50-1
Volumetric flask, 2000 mL, with stopper	PYREX	10-210H
Volumetric flasks, 1000 mL, with stoppers (4)	PYREX	10-210G
Weight boats	Sartorius	13-735-744