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Method Article
Este estudo apresenta um novo modelo de camundongo projetado especificamente para simular o endometrioma, um subtipo clinicamente significativo de endometriose. Ao utilizar camundongos C57BL / 6J, o modelo visa elucidar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes à infertilidade relacionada ao endometrioma, oferecendo uma ferramenta refinada para preencher a lacuna de conhecimento atual em medicina reprodutiva.
O endometrioma (OMA), um subtipo de endometriose caracterizado pela formação de cistos endometrióticos nos ovários, afeta 17-44% dos indivíduos diagnosticados com endometriose. As mulheres com OMA geralmente apresentam fertilidade comprometida, mas os mecanismos exatos subjacentes à infertilidade associada ao OMA permanecem obscuros. Notavelmente, os modelos animais existentes simulam endometriose peritoneal superficial (SUP) e endometriose infiltrativa profunda (DIE), deixando uma lacuna notável na pesquisa focada em OMA. Em resposta à lacuna de conhecimento, este artigo apresenta um modelo pioneiro de camundongo que simula OMA e fornece uma descrição abrangente das técnicas e procedimentos empregados no modelo. Com uma alta taxa de sucesso de 83% e especificidade da lesão ovariana, este modelo é uma promessa significativa para o avanço de nossa compreensão do OMA, particularmente no contexto da infertilidade. Ele oferece uma plataforma valiosa para a realização de pesquisas direcionadas sobre os desafios de fertilidade associados ao OMA, potencialmente abrindo caminho para melhores estratégias diagnósticas e terapêuticas no campo da medicina reprodutiva.
O endometrioma (OMA) é o subtipo mais predominante de endometriose, observado em aproximadamente 17-44% dos indivíduos diagnosticados com endometriose 1,2. É caracterizada pela formação de cistos endometrióticos dentro dos ovários. Esses cistos, coloquialmente chamados de "cistos de chocolate", derivam seu nome de sua consistência marrom distinta, semelhante ao alcatrão3. Além do OMA, a endometriose também pode se apresentar como endometriose peritoneal superficial (SUP) e endometriose infiltrativa profunda (DIE). SUP refere-se às lesões no revestimento peritoneal, enquanto DIE refere-se a lesões que penetram mais de 5 mm abaixo da superfície peritoneal4. A heterogeneidade na localização, aparência e profundidade da lesão entre esses subtipos de endometriose resulta em diversos sintomas clínicos e gravidade variável da doença 5,6. A OMA está particularmente associada a estágios mais graves da endometriose e tem sido implicada em infertilidade, aderências pélvicas e aumento do risco de câncer de ovário 1,7,8,9.
A associação da endometriose, especialmente da OMA, com a infertilidade é uma questão clínica de grande preocupação. A endometriose está presente em 25-50% das mulheres inférteis, com 30-50% das mulheres diagnosticadas com endometriose apresentando infertilidade 10,11,12,13,14. Embora os mecanismos exatos de infertilidade associados ao OMA permaneçam indefinidos, algumas hipóteses foram levantadas. Um sugere que a endometriose leva a um estado inflamatório crônico, que pode interromper a função ovariana normal e prejudicar a qualidade do oócito15,16. Outro propõe sobrecarga anormal de ferro no fluido folicular ovariano, que se acredita estar associada ao distúrbio de maturação do oócito14. Outros estudos abordam as interrupções na regulação hormonal17, na qualidade do oócito18 e no desenvolvimento embrionário19.
Historicamente, os modelos de roedores têm desempenhado um papel crucial no aprofundamento de nossa compreensão da endometriose, particularmente no estudo de sua patologia, impacto na fertilidade e mecanismos de dor 20,21,22,23. Roedores, particularmente ratos e camundongos, têm sido amplamente utilizados como modelos animais na exploração das relações de causa e efeito, mecanismos subjacentes, possíveis técnicas diagnósticas e intervenções terapêuticas para esta doença 22,24,25,26. É importante reconhecer que todos os modelos animais têm seus usos e limitações específicos. A escolha de um modelo específico depende do desfecho ou aspecto específico que está sendo medido ou estudado27. Por exemplo, um modelo de rato demonstrou que o estresse pode exacerbar as manifestações da endometriose e influenciar os parâmetros inflamatórios, fornecendo informações sobre os possíveis gatilhos da doença28.
No contexto da pesquisa de endometriose, existem vários modelos de roedores empregados. Uma abordagem comumente usada é o modelo homólogo, que envolve o transplante de tecido uterino de roedores na cavidade peritoneal ou vasos mesentéricos da mesma espécie29. Esse modelo oferece vantagens em termos de imunocompetência e adequação para estudos de longo prazo30. No entanto, as limitações surgem devido à disparidade parcial entre o tecido uterino ectópico implantado em camundongos e as características das lesões endometrióticas humanas31. Outra abordagem é o modelo heterólogo, onde uma biópsia endometrial humana é implantada em um camundongo imunossuprimido32. Esse modelo permite o uso do endométrio ectópico humano como tecido doador para o desenvolvimento da lesão, proporcionando validade construtiva32. No entanto, conta com camundongos imunossuprimidos como receptores, o que dificulta uma avaliação abrangente das respostas imunes envolvidas na etiologia do distúrbio33. No entanto, é importante reconhecer que os modelos existentes se concentram principalmente em espelhar a condição generalizada SUP, capturando inadequadamente as características únicas do OMA e do DIE34. Atualmente, há uma escassez de modelos específicos disponíveis para estudar o DIE, com apenas alguns modelos existentes, incluindo um modelo recente de roedores desenvolvido por Yan et al.35. Essa escassez ressalta a necessidade de mais pesquisas e o desenvolvimento de modelos que capturem com precisão as características específicas do DIE. Além disso, nossa compreensão do OMA, especialmente sua associação diferenciada com a fertilidade, também permanece limitada26,36.
Abordando os desafios existentes, este artigo apresenta um novo modelo experimental de camundongo homólogo projetado para simular especificamente o OMA. O objetivo é fornecer informações únicas sobre os mecanismos patológicos subjacentes à infertilidade relacionada ao OMA, preenchendo assim a lacuna de conhecimento nesta área crucial da medicina reprodutiva. Em resumo, os camundongos C57BL / 6J foram usados por suas características reprodutivas semelhantes às humanas. Após a sincronização do ciclo estral, os tecidos uterinos de camundongos doadores foram picados e transplantados para a bursa ovariana dos camundongos receptores na proporção de 1:2. Após um intervalo de 4 semanas, foram realizados exames morfológicos e histológicos das lesões ovarianas para validar a presença de OMA e avaliar qualquer atresia folicular associada. Com uma taxa de sucesso de 83%, este modelo oferece aos pesquisadores uma plataforma confiável para estudos de OMA, enfatizando o desenvolvimento de lesões especificamente nos ovários para investigações focadas.
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Todos os procedimentos experimentais conduzidos neste estudo foram aprovados e regulamentados sob o número de protocolo 21-203-MIS_[C] pelo Comitê de Ética da Universidade Chinesa de Hong Kong.
1. Aclimatação e seleção de animais
2. Estabelecimento do modelo de endometrioma
NOTA: Selecione apenas camundongos no estágio de estro como camundongos doadores e receptores no estabelecimento modelo. Ao realizar experimentos em um camundongo, certifique-se de que ele esteja fora da vista de outras pessoas e que não seja reintroduzido na companhia de outros animais até que esteja completamente recuperado. O diagrama de geração do modelo pode ser encontrado na Figura 1.
3. Validação do modelo
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O estabelecimento bem-sucedido do OMA
Dos 12 camundongos submetidos ao protocolo de transplante, 10 exibiram lesões características da OMA, tanto em nível anatômico macroscópico quanto histológico, traduzindo-se em uma taxa de sucesso de 83%. O exame macroscópico revelou lesões cheias de líquido aderentes aos ovários, lembrando apresentações clínicas de OMA (Figura 2). O exame histopatológico, conforme ilustrado na
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A prevalência de OMA na população feminina global ressalta uma preocupação crítica com a saúde38. Além dos sintomas gerais da endometriose, a OMA traz desafios adicionais para a fertilidade, incluindo dor pélvica intensa, potencial para torção ovariana e outras implicações notáveis 39,40. Embora a compreensão da patogênese e progressão da OMA esteja amplamente envolta em mistério, o vácu...
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Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Este estudo é financiado pelo Esquema de Pesquisa Temática concedido pelo Conselho de Bolsas de Pesquisa do Governo da Região Administrativa Especial de Hong Kong (T13-602/21-N).
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Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 cc syringe with 25 G needle | BD Biosciences | 301320 | |
10 mm Tissue culture dish | FALCON | 353001 | |
10% Buffered formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
10x phosphate buffered saline (PBS) buffer | Fisher Scientific | AM9625 | |
30 G needle | BD Biosciences | 305107 | |
5-0 black braided silk non-absorbable suture | Ethicon Inc. | W500H | |
70% Ethanol | |||
Adhesive microscope slides | Marienfeld | 810401 | |
Buprenorphine Injection | Med-Vet International | RXBUPRENOR5 | |
Double-headed cotton swab | SANYO Co., LTD. | HUBY-340 | |
Fine forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
Ketamine | Alfasan International b.v | 2203095-08 | |
Microtubes | Corning | MCT-150-C | |
Needle holder | Excelta Corporation | 2827-NH-35-SE-ND | |
Ophthalmic ointment | Major Pharmaceuticals | 10033691 | |
Periodic Acid Schiff (PAS) Stain Kit | Abcam | Ab150680 | |
Powder free sterile gloves | Fisher Scientific | 19020558 | |
Processing/embedding cassettes | Fisher Scientific | 15-197-700A | |
Size 3 scalpel | Fisher Scientific | 22-079-657 | |
Small serrated semi-curved forceps | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5135 | |
Small surgical scissors | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5850 | |
Standard light microscope | For evaluating vaginal cytology smears and histological analysis. | ||
Steel scalpel blades #10 | B.Braun | BB510 | |
Sterile gauze | MEDICOM | HMWS 077 | |
Sterilized pyrex glass Petri dishes | Corning | 70160-101 | |
Thermoregulated electric pad | |||
VICRYL RAPIDE (polyglactin 910) absorbable Suture | Ethicon Inc. | W9918 | |
Xylazine | Alfasan International b.v | 2110333-10 |
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