Fonte: Laboratório da Dra.B. Jill Venton - Universidade da Virgínia

A eletroforese capilar (CE) é uma técnica de separação que separa moléculas em um campo elétrico de acordo com o tamanho e a carga. Ce é realizado em um pequeno tubo de vidro chamado capilar que é preenchido com uma solução de eletrólitos. Os analitos são separados devido a diferenças na mobilidade eletroforética, que varia de acordo com carga, viscosidade solvente e tamanho. A eletroforese tradicional em géis é limitada na quantidade de tensão que pode ser aplicada porque os efeitos de aquecimento de Joule arruinarão o gel e a separação. Os capilares têm uma grande relação superfície-área-volume e, assim, dissipam melhor o calor. Portanto, as tensões aplicadas para um experimento de eletroforese capilar são bastante grandes, muitas vezes de 10.000 a 20.000 V.

A eletroforese capilar é útil para separações de alto desempenho. Em comparação com a cromatografia líquida, as separações ce são muitas vezes mais rápidas e eficientes. No entanto, a eletroforese capilar funciona melhor para separar moléculas carregadas, o que não é uma limitação da cromatografia líquida. A CE tem uma capacidade máxima maior do que a cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), o que significa que as separações são mais eficientes e mais picos podem ser detectados. A instrumentação pode ser muito simples. No entanto, o HPLC é mais versátil e muitas fases estacionárias e móveis foram desenvolvidas para diferentes tipos de moléculas.

1. Configuração de instrumentação CE

1. Ligue o instrumento CE e o computador. Usando o software do computador, ligue a fonte de luz para análise UV para permitir que ele se aqueça. Alguns softwares têm um indicador quando a lâmpada está pronta para uso (o ícone da lâmpada vira cor).
2. Faça um arquivo de métodos. Defina os parâmetros importantes para a execução do CE. Nesta análise, as temperaturas do cartucho e do armazenamento da amostra são de 35 °C. O comprimento de onda para detecção de UV é de 214 n

Eletroferogramas coletados para amostras diet pepsi e pepsi são mostrados nas Figuras 1 e 2, respectivamente. Os três picos de cafeína, aspartame e ácido benzoico são observados na Pepsi diet e têm tempos de migração semelhantes aos padrões. Para a Pepsi normal, o pico da cafeína está presente, mas não os picos de aspartame e ácido benzoico. A análise ce é rápida, pois os tempos de migração são de apenas 3 a 4 minutos.

A curva de calibraçã...

A eletroforese capilar é usada para muitas separações especiais. Por exemplo, é usado na indústria farmacêutica para testes de qualidade, para se certificar de que não há produtos laterais ou interferentes. Ce é particularmente útil para separar drogas com um grupo de amino básico, pois as paredes do capilar podem ser neutras com um pH ácido e, portanto, a droga não vai grudar no capilar.

Um modo de CE também foi usado para sequenciar o genoma humano e separar o DNA. Este modo de...