Para realizar a criolesão do miômero em peixes-zebra, use uma criosonda de aço inoxidável fabricada sob medida. Para evitar congelamento durante o manuseio da sonda durante o procedimento, insira a alça da sonda em uma ponta de pipeta e prenda-a envolvendo-a com fita adesiva. Antes de iniciar o procedimento de criolesão, prepare um copo para a solução de trabalho da anestesia, uma colher para manusear os peixes, uma esponja úmida e um tanque com água do sistema para recuperação pós-procedimento dos peixes.
Prepare a solução de estoque de anestesia seguindo as etapas mostradas na tela. Em seguida, adicione quatro mililitros da solução de estoque preparada a 100 mililitros de água do sistema em um copo para preparar a solução de trabalho de tricaina. Para iniciar o procedimento de criolesão, mergulhe a sonda em nitrogênio líquido por um mínimo de três minutos.
Molhe a esponja em água do sistema e coloque-a em uma superfície plana. Em seguida, um a dois minutos após a transferência de um único peixe-zebra adulto para a solução de trabalho de tricaina, confirme sua falta de resposta tocando o peixe suavemente com a colher. Coloque o peixe anestesiado sobre a esponja molhada.
Localizar o pedúnculo caudal posterior à nadadeira anal e anterior à nadadeira caudal. Nesta fase, remova a criosonda do nitrogênio líquido. Agite a sonda suavemente para garantir que não permaneça nitrogênio líquido residual na ponta.
Coloque a borda da espátula perpendicular ao corpo sobre o pedúnculo caudal. Manter a sonda nessa posição por seis segundos sem aplicar pressão, antes de liberar a criosonda do tecido. Em seguida, transfira os peixes para a água do sistema no tanque de recuperação.
Monitore o peixe enquanto ele retoma a respiração e a natação após acordar da anestesia. Se os movimentos operculares não ocorrerem após 30 segundos, estimule o peixe pipetando a água do sistema nas brânquias até que o animal inicie a respiração sozinho. A gravação em vídeo dos peixes controle e criolesionados em um dia após a lesão ou DPCI revelou que, embora os peixes crioleados nadassem menos ativamente, eles não exibiam movimentos anormais, como turbilhão, convolução ou equilíbrio reduzido.
No sistema de criação, sua posição no tanque e ingestão de alimento foi semelhante à dos peixes não lesionados. Como observado no 5 DPCI, o comportamento normal ainda era persistente, indicando que o procedimento de criolesão não afetou severamente o bem-estar dos animais.
