Para configurar o sistema de imagem, comece deixando o laser de 532 nanômetros ligado por 15 minutos para aquecer. Em seguida, coloque uma rampa personalizada conectada a um estágio ajustável manualmente ao lado da membrana de imagem. Conecte um suporte de dente de mouse com um tubo de respiração conectado à rampa e fixe uma almofada de aquecimento na superfície da rampa.
Depois que o laser aquecer, coloque uma placa detectora IR próxima à entrada do feixe de fibras e verifique o alinhamento do laser, garantindo que a luz laser entre no feixe. Comece a preparação do animal aparando o pelo da cabeça do rato anestesiado com um barbeador elétrico de perto dos olhos para atrás das orelhas. Aplique um creme depilatório no topo da cabeça.
Depois de deixá-lo ligado por cinco minutos, limpe o creme com um cotonete molhado. Repita a aplicação até que a pele da cabeça esteja totalmente depilada. Pouco antes de transferir o animal para a plataforma do sistema, use uma agulha de calibre 27 para injetar retro-orbitalmente 100 microlitros de microbolhas na concentração de estoque.
Agora, coloque uma gota da loção protetora ocular nos olhos. Inicie a criação de imagens PAUSAT preenchendo a janela de imagem com água destilada na superfície para acoplamento acústico. Em seguida, prenda a cabeça do mouse no suporte do dente e garanta a anestesia adequada e o fluxo de ar.
Usando uma lâmpada de aquecimento e uma sonda retal conectada a um controlador de temperatura, mantenha a temperatura corporal do animal em 37 graus Celsius. Abra o aplicativo de imagem e navegue até o ultrassom do modo B. Use a janela de ultrassom ao vivo para ajustar a cabeça do mouse para a posição desejada manualmente e a altura do palco de acordo.
Ajuste o valor da frequência de transmissão do ultrassom no modo B para 16 mega-hertz. Em seguida, insira as informações do diretório de salvamento no aplicativo de geração de imagens. Em seguida, selecione a região desejada da varredura cerebral usando a caixa flutuante.
Pressione o botão adquirir estático e verifique os resultados da varredura assim que a aquisição da imagem for concluída para garantir a imagem da região desejada. Para realizar a angiografia acústica, retorne à Aquisição de Imagens e, em seguida, mude o modo para Angiografia Acústica. Em seguida, insira os parâmetros de protocolo de varredura desejados, definindo o espaçamento entre quadros em 0,2 milímetros e 10 quadros por posição.
Verifique os resultados da varredura sob análise de imagem para garantir a qualidade da imagem. Para obter imagens com tomografia fotoacústica, abra o oscilador paramétrico óptico, ou aplicação OPO, e configure-o para 756 nanômetros. Em seguida, converta manualmente o transdutor de matriz linear para as coordenadas previamente determinadas para co-registrar automaticamente os volumes de oscilação e os volumes de matriz linear.
Abra a aplicação do laser e ligue o laser de 532 nanômetros. Defina os parâmetros de digitalização como tamanho de passo de 0,4 milímetros, comprimento de varredura de 20 milímetros e média de 10 quadros por posição. Agora, abra o programa MATLAB do sistema de aquisição de dados de ultrassom e pressione o botão de execução.
Em seguida, pressione iniciar no aplicativo de digitalização. Quando a verificação estiver concluída, abra o programa de salvamento MATLAB. Altere o nome de salvamento para o nome de arquivo desejado e pressione Executar.
Em seguida, altere o comprimento de onda OPO para 798 nanômetros e repita a digitalização. A angiografia acústica, ou imagem AA, mostrou que, no cérebro não lesado, ambos os hemisférios apresentam distribuição semelhante de vasos sanguíneos. Resultados semelhantes são observados nas imagens fotoacústicas em dois comprimentos de onda diferentes.
Notável redução do sinal na cortical lateral direita foi observada nas imagens AA de camundongos eletrocauterizados. A mesma região também apresentou redução da oxigenação tecidual, sugerindo isquemia. A imagem PAUSAT pode identificar áreas de AVC com base no modelo de AVC fototrombótico, identificando a região do córtex superior com suprimento de fluxo sanguíneo reduzido e saturação de oxigênio diminuída.
A idade do camundongo pode afetar a imagem, uma vez que o crânio se torna mais espesso e resulta em impedância acústica diferente, resultando em diminuição da profundidade da imagem para camundongos mais velhos.
