Para começar, pegue uma placa de 96 poços contendo eletrodos de conexão de dedo interdigitados cobrindo uma área de cerca de quatro milímetros quadrados. Coloque a placa na estação do poço e clique no botão de configuração. Se os poços estiverem conectados corretamente, as leituras verdes aparecerão.
Quaisquer poços não conectados serão identificados como vermelhos. Adicione 200 microlitros de mídia a cada poço que está sendo usado e, em seguida, coloque a placa no sensor de impedância do substrato da célula elétrica, ou estação ECIS. Para estabilizar os poços e prepará-los para experimentos, clique em setup, seguido de check e, em seguida, clique em stabilize.
Após 40 minutos, retire a placa da estação e retire a mídia de cada poço. Seme as células B2B a uma densidade de 40.000 células por mililitro nos poços que contêm as células e coloque a placa na estação ECIS na incubadora. Em seguida, clique em check para garantir que todos os eletrodos sejam lidos pelos sensores da estação.
Selecione o tempo de frequência múltipla para medir cada eletrodo em sete frequências diferentes. Clique em iniciar e deixe que ele funcione por 24 horas para que as células possam formar uma monocamada confluente. A leitura de cada poço é exibida em uma cor diferente.
Após cerca de 24 horas, os poços contendo células apresentarão maior resistência no monitor indicando a fixação das células aos eletrodos. Pressione pausar para interromper a coleta de dados. Por exemplo, para alterações de mídia, edição de reagentes e assim por diante.
Exponha as nanopartículas de ZIF8 ao poço em branco e aos poços celulares com um volume de 100 microlitros por poço, Coloque a placa na estação e clique em verificar novamente para garantir que os sensores estão lendo todos os eletrodos. Clique em retomar para retomar os experimentos após a pausa escolhida. Após a coleta de dados, clique em concluir para salvar os dados como um arquivo de planilha.
Para obter os parâmetros alfa clique no modelo, e na tela apareceu, clique em mídia apenas bem, em seguida, selecione o poço que tem apenas mídia. Clique em definir referência para avaliação dos dados e selecione a referência relacionada ao experimento controle. Clique em localizar para iniciar o ajuste de referência.
Selecione definir e ajustar o intervalo T para processar os dados relativos à referência selecionada. Para avaliar o anexo de célula, selecione alfa. Finalmente, depois que o sistema concluir a análise, clique em salvar RBA e salve os parâmetros como um arquivo de planilha.
A análise do comportamento celular após exposição aos MOFs ZIF8 foi realizada através do sensoriamento de impedância do substrato elétrico celular. As imagens mostraram mudanças nas interações do substrato celular e as mudanças são dependentes do tempo de exposição e da dose utilizada.
