Para começar, coloque o camundongo C57 preto 6 anestesizado de oito a 10 semanas de idade no banco cirúrgico. Usando pinças rombas, puxe a língua e segure-a. Insira um laringoscópio na boca e visualize a corda vocal.
Insira um fio-guia em um cateter intravenoso de calibre 20. Em seguida, empurre suavemente o cateter para dentro da traqueia até que sua parte da asa fique uniforme com a ponta do nariz. Conecte o mouse ao ventilador e coloque-o em decúbito dorsal sob uma lâmpada de calor.
Mantenha a temperatura retal em 37 graus Celsius. Após raspar e desinfetar a área cirúrgica, fazer uma incisão cutânea de um centímetro nas áreas inguinais direita e esquerda para acessar as artérias femorais. Em seguida, desinfetar e ligar a artéria femoral distal e aplicar uma gota de lidocaína.
Coloque um clipe na artéria femoral proximal e faça um pequeno corte na artéria distal ao clipe. Insira um cateter de polietileno 10 nas artérias femorais esquerda e direita. Injetar 50 microlitros de um a 10 soro fisiológico heparinizado em cada linha arterial.
Para evitar a coagulação na linha, vire o mouse para a posição prona e monte-o em uma estrutura de cabeça estereotáxica. Conecte três eletrodos de agulha ao braço esquerdo, à perna esquerda e ao braço direito para monitoramento do eletrocardiograma. Em seguida, raspe o topo da cabeça e esterilize-o com três rodadas alternadas de cotonetes de iodo e álcool.
Faça uma incisão de pele mediana de 2,5 centímetros e use quatro pequenos afastadores para expor toda a superfície do crânio para imagens cerebrais. Em seguida, coloque um Laser Speckle Contrast Imager acima da cabeça. Ajuste o Laser Speckle Imager para ver a linha de base dos vasos sanguíneos cerebrais antes da parada cardíaca.
Antes de induzir a parada cardíaca, encha uma seringa plástica de um mililitro com 26 microlitros da solução estoque do coquetel de ressuscitação. Quando a temperatura corporal atingir 37 graus Celsius, ajuste o medidor de oxigênio a 100% para oxigenar o sangue por dois minutos. Em seguida, retire até 200 microlitros de sangue através da artéria femoral direita para a seringa de plástico contendo o coquetel de ressuscitação.
Para induzir a parada cardíaca, desligue o oxigênio e aumente o nitrogênio para 100% para induzir a anóxia. Desligue o ventilador, o vaporizador de isoflurano, o controlador de temperatura e o medidor de fluxo de nitrogênio. Confirme a ausência de fluxo sanguíneo cerebral durante a parada cardíaca.
Ao observar a imagem do laser speckle, ajuste o oxigênio a 100% e ligue o ventilador oito minutos após o início da parada cardíaca. Infundir imediatamente o sangue oxigenado retirado misturado com o coquetel de ressuscitação na circulação sanguínea através da artéria femoral direita em um minuto para restaurar sinais vitais, como frequência cardíaca e pressão arterial. Veja a imagem Laser Speckle para confirmar a reperfusão bem-sucedida do cérebro.
Para recuperação pós-operatória, retirar os afastadores da cabeça, aplicar bupivacaína a 0,25% na incisão da pele e fechar a incisão com fio de náilon 6-0. Em seguida, aplique pomada antibiótica na superfície de incisão da pele fechada. A indução de parada cardíaca no camundongo levou a bradicardia grave em 45 segundos.
Após dois minutos de anóxia, a frequência cardíaca reduziu significativamente. A pressão arterial diminuiu abaixo de 20 milímetros de mercúrio e o fluxo sanguíneo cerebral cessou. Além disso, a temperatura corporal caiu lentamente para cerca de 32 graus Celsius no final da parada cardíaca.
Após a injeção da mistura de ressuscitação sanguínea, todas as funções vitais começaram a se recuperar. O Laser Speckle Contrast Imaging confirmou a completa ausência de fluxo sanguíneo no cérebro durante a parada cardíaca, as imagens fotoacústicas permitiram a identificação de alterações no fluxo sanguíneo, estrutura e oxigenação durante o procedimento de parada cardíaca.
