Comece colocando uma almofada de bancada limpa ou material de drape na superfície de trabalho. Tape o cone nasal de um vaporizador de isoflurano na superfície, garantindo que ele fique virado para longe do experimentador. Conecte uma agulha de calibre 27 de 10 milímetros de comprimento com um bisel de 45 graus em uma seringa de vidro de cinco microlitros.
Adicione a tubulação de silastic à agulha, permitindo que 3,5 milímetros da ponta se projetem e fixe a tubulação com fita adesiva de laboratório ao corpo da seringa. Em seguida, desenhe três microlitros de meio de injeção na seringa de vidro, desenhando inicialmente mais do que o necessário, ejetando o excesso até restarem apenas três microlitros. Inicie um temporizador de laboratório no modo de contagem regressiva e posicione-o para facilitar a visualização durante as injeções.
Depois de praticar a movimentação lateral e caudal de uma agulha, prepare o camundongo anestesiado para injeção limpando primeiro o local da injeção com iodo e depois com álcool três vezes. Identificar o local da injeção utilizando uma agulha calibre 18, passando-a pelo local da craniotomia. Para injetar o mouse, primeiro, segure firmemente a cabeça do mouse com a mão não dominante.
Posicione a cabeça plana na superfície de trabalho. Em seguida, coloque a agulha da seringa de vidro através do orifício no crânio até que a tubulação descanse na pele do rato. Segurando a seringa verticalmente nos planos coronal e sagital, injete lentamente o meio durante um minuto.
Segure a seringa e a agulha por mais um minuto para minimizar o refluxo. Em seguida, retraia lentamente a agulha. Remova o mouse do cone do nariz.
Limpe qualquer sangue do local de injeção usando gaze estéril e coloque o rato numa gaiola num aquecedor de gaiola até ficar acordado. A breve exposição à anestesia gasosa e a injeção isolada de três microlitros de líquido no sistema ventricular não alteraram a secreção do hormônio luteinizante pulsátil. As vias injetáveis eram visíveis no tecido neural e interseccionadas com o ventrículo lateral.
