Comece por pulverizar o rato devidamente eutanasiado com álcool a 75% para desinfetar a pele. Em seguida, coloque o mouse em decúbito dorsal. Levante a pele da região abdominal do animal e, usando uma tesoura cirúrgica, faça uma pequena incisão nela.
Em seguida, usando a tesoura, separe sem rodeios a pele e os músculos abdominais da pelve até o pescoço, ao longo da linha média ventral. Exponha o coração e os pulmões cortando o diafragma e as costelas ao longo de ambos os lados da linha média. Em seguida, remova cuidadosamente o fígado, baço, intestinos e rins, evitando danos à parede intestinal.
Depois disso, remova os pulmões e o esôfago. Agora levante suavemente o coração usando pinças seguradas em uma mão e separe a aorta da coluna vertebral com tesoura cirúrgica segurada na outra mão. Em seguida, coloque o coração e a aorta em uma placa de Petri de 60 milímetros, contendo PBS suplementado com antibiótico.
Recupere a pinça microcirúrgica e a tesoura microcirúrgica do álcool e enxágue-as em 25 mililitros de PBS para remover o excesso de álcool. Trabalhando sob um microscópio estéreo, remova o timo e outros tecidos do coração e da aorta. Em seguida, remova o coração, deixando a aorta com os tecidos adiposos perivasculares ou PVATs.
Transfira a aorta juntamente com os PVATs para uma placa de Petri limpa de 60 milímetros contendo PBS suplementado com antibiótico. Usando um par de pinças microcirúrgicas, segure a aorta e, usando outro par, retire os tecidos adiposos aderidos para separar os PVATs da aorta. Remova o máximo de tecido vascular possível, causando o mínimo de danos aos PVATs.
Finalmente, transferir os PVATs coletados para um tubo de microcentrífuga de dois mililitros, contendo antibiótico suplementado, alta glicose, DMEM, colocado sobre gelo.
