Para começar, segure com segurança a cabeça dos ratos recém-nascidos eutanasiados no lugar. Com a tesoura microoperatória, abra o couro cabeludo ao longo da sutura sagital. Em seguida, separe e imobilize o couro cabeludo bilateralmente com os dedos.
Use uma tesoura para cortar o crânio e virá-lo para frente para acessar o crânio. Utilize um pequeno elevador periosteal para extrair o cérebro e, em seguida, use a ponta da tesoura para raspar suavemente o cérebro, revelando a base do crânio. Agora, examine os ossos temporais bilaterais na base do crânio.
Utilize tesoura para incisar a base do crânio ao longo da linha média. Em seguida, raspe a pele e elimine qualquer osso desnecessário. Preservar e transferir os ossos temporais para placas de Petri estéreis de 35 milímetros preenchidas com HBSS fresco.
Em seguida, use um par de pinças de 5 pontas numéricas para eliminar a bola e o tecido circundante da porção petrosa do osso temporal. Segure a pinça com uma das mãos para estabilizar a parte semicircular do osso temporal. Utilize a outra mão para inserir a ponta inferior da pinça no nicho da janela redonda, separando o osso lateral da cóclea da escala do vestíbulo.
Remover cuidadosamente a porção petrosa do osso temporal sem entrar em contato com o epitélio do Órgão de Corti. Em seguida, desprender meticulosamente e extrair o labirinto ósseo da cóclea, iniciando da extremidade basal até a apical. Usando pinças de 5 pontas numéricas, microisole cuidadosamente o epitélio sensorial do Órgão de Corti do modíolo.
Em seguida, empregar pinças microoperadoras para segurar o ligamento espiral e separá-lo suavemente da estria vascular. Transfira o epitélio auditivo limpo, utilizando uma pipeta de 200 microlitros, para uma placa de cultura estéril de três milímetros contendo HBSS. Colocar o epitélio auditivo isolado em uma placa de Petri estéril de 100 milímetros preenchida com HBSS para as etapas subsequentes de preparação.
