Para começar, cubra uma agulha borboleta e sua tubulação com solução de EDTA a 1% de potássio. Corte a tubulação logo atrás da agulha para coletar sangue em gotas. Coloque um rato anestesiado sobre a estrutura estereotáxica, mantendo a anestesia através de uma máscara facial.
Coloque uma almofada de aquecimento sob o animal, mantendo uma parte de sua cauda em contato direto com a almofada. Mova os animais para trás de tal forma que ele fique voltado para os lados, e a veia lateral da cauda seja visível na parte superior. Mergulhe a cauda em água morna para dilatar a veia lateral.
Em seguida, limpe a cauda com etanol 70%. Coloque luz quente na cauda usando uma lâmpada incandescente regular. Insira a agulha borboleta 21G na veia lateral da cauda em um ângulo de 20 graus a uma profundidade de cinco milímetros.
Em seguida, colete sangue em um tubo de coleta a vácuo de 500 microlitros contendo cinco miligramas de EDTA de potássio como anticoagulante. Remova a agulha e pare o fluxo do sangue, colocando pressão no local da punção. Devolva o rato à sua gaiola de origem.
Em seguida, inverta suavemente o tubo 10 vezes para misturar anticoagulante no sangue. Faça furos profundos de 1,5 centímetro no gelo e coloque os tubos neles verticalmente. Dentro de uma hora após a coleta, centrifugar a amostra de sangue em uma centrífuga refrigerada para separar o plasma.
Em seguida, aspirar cerca de 200 microlitros de plasma, evitando a camada de glóbulos vermelhos e brancos. Coloque o plasma retirado em um microtubo estéril de 0,2 mililitro. Separar cinco microlitros da amostra para controle de qualidade e armazenar o restante da amostra a 80 graus Celsius negativos até a análise.
O sangue foi retirado dos ratos em cinco momentos, utilizando diferentes métodos, como a técnica de vácuo no 52º dia, a ordenha de cauda no 55º dia e a queda nos dias 58 a 64. A qualidade das amostras de plasma avaliada por espectrofotometria UV mostrou que o plasma era cor-de-rosa com um valor médio de absorbância de 0,647 quando se utilizou a técnica a vácuo. Da mesma forma, a técnica de ordenha de cauda resultou em plasma cor-de-rosa com absorbância média de 0,620.
Em contraste, com o sistema de retirada de gotas habilitado por gravidade, amostras de plasma claro foram obtidas com valores médios de absorbância de plasma significativamente reduzidos, sugerindo que este procedimento é ideal para obter amostras de alta qualidade para análises.
