Para começar, prepare uma agulha borboleta 23G cortando sua proteção de manga plástica, de modo que a extremidade da agulha nua fique exposta em 7 milímetros. Em seguida, conecte a agulha borboleta com tubo de polímero a uma seringa de 1 mililitro. Coloque um rato anestesiado em uma estrutura estereotáxica e mantenha a anestesia através de uma máscara facial.
Em seguida, remova o pelo na parte traseira da cabeça e pescoço do rato. Fixe a cabeça do rato com barras auriculares. Mova a barra do nariz da estrutura estereotáxica para abaixar a cabeça do animal em aproximadamente 45 graus verticalmente.
Encontre uma superfície ligeiramente deprimida na cabeça traseira com o aspecto de um losango entre a protuberância occipital e a coluna do atlas. Esfregue a superfície com etanol 70%. Para a coleta do LCR, insira a agulha borboleta verticalmente no centro da superfície deprimida em forma de losango na cisterna magna até que o movimento seja bloqueado pela proteção da manga plástica da agulha.
Desenhe suavemente o pistão da seringa para deixar o líquor fluir lentamente através da agulha. Coletar cerca de 100 microlitros do LCR em tubos de polímero. Aperte o tubo de polímero muito perto da agulha borboleta e corte o tubo neste ponto.
Desenhe a amostra transparente para a seringa. Despeje a amostra no microtubo estéril de 0,2 mililitro e armazene no gelo por até uma hora. Desinfetar o local de retirada do líquor na cabeça do animal.
Retire o rato da estrutura estereotáxica e coloque-o de volta em sua gaiola. Separe 2 microlitros da amostra para controle de qualidade e armazene o restante a 80 graus Celsius para análise posterior. A retirada repetida do LCR foi realizada ao longo de cinco dias em três grupos experimentais de ratos e expressa como uma porcentagem de retiradas bem-sucedidas que resultaram em líquor claro.
Nos ratos dotados de duplo cabeçote canulados para retirada do LCR, a taxa de sucesso foi de 71,1%, indicando que a cânula na cabeça do animal pode interferir na repetição da amostragem do LCR. Por outro lado, quando a coleta do LCR foi realizada por punção da cisterna magna em apenas eletrodos cativos ou de telemetria implantados, a taxa de sucesso foi de 86,7% e 88,9%Esses resultados sugerem que a técnica de punção é mais adequada para múltiplas retiradas liquóricas em animais implantados com eletrodos.
