Para começar, transfira 70 mililitros de Dulbecco's Modified Eagle Medium pré-aquecido para uma placa de Petri em um armário de biossegurança estéril e adicione dexametasona a uma concentração de 100 nano molares. Montar as ferramentas cirúrgicas necessárias para a dissecção, que inclui pinças lisas, retas e de ponta fina. Pinça reta de ponta fina com dentes serrilhados e tesoura fina reta e afiada.
Dissecar explantes de membros posteriores. Localize a articulação do quadril de um mouse eutanasiado posicionado em decúbito dorsal na bancada forrada com absorvente sob as almofadas. Use uma tesoura fina para criar uma pequena incisão na pele cobrindo os aspectos proximal e anterior da perna.
Em seguida, use os dedos para afastar a incisão para expandir e apertar a perna exposta. Puxe cuidadosamente a pele distalmente para desenluvar o membro posterior até o nível do tornozelo. Insira uma lâmina de tesoura suavemente sob a pele ao longo da face dorsal do pé.
Em seguida, faça uma incisão que se estenda em direção aos dedos dos pés e continue puxando a pele distalmente até que ela seja completamente removida. Posicione o mouse para ter uma visão clara da inserção do tendão de Aquiles na face posterior do calcâneo, próximo ao tornozelo. Para remover o tendão do terraço da planta, insira uma ponta da pinça de ponta fina lisa entre os dois tendões.
Passe a ponta medialmente sob o tendão plantar. Em seguida, puxe-o proximalmente para rasgar o músculo plantar. Em seguida, usando pinça serrilhada de ponta fina, segure a extremidade proximal descolada do tendão plantar e puxe-a distalmente para removê-la completamente.
Na articulação do quadril, utilize uma tesoura fina para cortar precisamente a pelve, isolando o membro posterior. Use a tesoura para remover suavemente o restante da pelve, revelando a cabeça femoral. No gabinete de biossegurança, transferir o explante do membro posterior para a placa contendo meio de cultura celular e dexametasona.
Deslocar o prato para a incubadora e submetê-lo a pré-tratamento por 48 horas.
