Para preparar a solução de biotinta, misture uma quantidade adequada de suspensão de células C3A com a solução de gelMA esterilizada. Prestain os esferoides de células C3A com duas soluções de rastreador de células micromolares a 37 graus por 20 minutos. Para lavar as células, primeiro, remova a sobrenatina por centrifugação e, em seguida, adicione meio de cultura celular fresco.
Adicione pelo menos dois mililitros de tinta biológica na câmara do dispositivo acústico esterilizado. Ligue o gerador de função e o amplificador de potência para iniciar o acionamento de cada transdutor PZT para gerar uma matriz 3D de agregados celulares. Crosslink a biotinta usando luz azul por 30 segundos para criar arcabouços de hidrogel 3D, encapsulando acusticamente os agregados celulares montados.
Em seguida, transfira cuidadosamente o arcabouço de hidrogel 3D da câmara para uma placa de Petri. Corte-o em pequenos pedaços usando uma navalha limpa e, em seguida, adicione o meio de cultura celular na placa de Petri. Incubar os esferoides celulares C3A em diferentes momentos de cultura em um mililitro de PBS contendo um microlitro de cálcio e dois microlitros de iodeto de propídio por 15 minutos a 37 graus Celsius.
Enxaguar a amostra embebida em andaimes de hidrogel duas vezes com PBS. Para os esferoides recuperados, realizar centrifugação a 200 G por cinco minutos e lavar duas vezes com PBS. Usando um microscópio de fluorescência, observe os esferoides e capture as imagens.
Os agregados celulares foram arranjados no padrão 3D dot array regular com um sinal fluorescente verde. Os agregados de gelMA C3A montados gradualmente se integraram e formaram esferoides apertados até o terceiro dia, acompanhados por um aumento no diâmetro esferoide. A viabilidade dos esferoides celulares manteve-se boa antes do terceiro dia, mas diminuiu ligeiramente após uma semana de cultura.
Os esferoides liberados mantiveram uma boa morfologia esférica com uma distribuição de tamanho estreita, juntamente com a desejável viabilidade e expressão de albumina.
