Preparação, montagem e imagem de folhas de luz de larvas de peixe-zebra para estudos de desenvolvimento cardíaco

Para começar, ligue o microscópio estéreo para registrar o desenvolvimento das larvas de peixe-zebra entre zero e sete dias pós-fertilização. Prepare agarose 0,8% de baixo derretimento com 150 miligramas por litro de tricaína. Uma vez que a agarose é resfriada à temperatura ambiente, usando uma pipeta de transferência, mova o peixe-zebra anestesiado para a agarose.

Usando outra pipeta de transferência, monte o peixe com agarose em um tubo de etilenopropileno fluorado. Conecte o tubo com a larva de peixe-zebra montada ao estágio de amostra de microscópio de folha de luz motorizado de seis eixos. Submergir o tubo na câmara de amostra preenchida com água E3.

Gire as larvas do peixe-zebra do lado ventral para melhor visualização do coração. Conecte o estágio de amostra motorizado à estação de trabalho. E configure todos os parâmetros necessários, incluindo o modo de movimentação desejado.

Estabeleça uma conexão entre a câmera CMOS e a estação de trabalho. Defina o tamanho do passo para 1 micrômetro, o número total de quadros para 300 e o tempo de exposição para 5 milissegundos. Em seguida, defina a região de interesse desejada.

Ligue o laser e inicie a imagem do microscópio de folha de luz das larvas. Grave 300 quadros como uma sequência de imagens 2D para cobrir de três a cinco ciclos cardíacos das larvas. Grave outra sequência de imagens da nova fatia de amostra até que todo o coração esteja coberto.