Para começar, misture a quantidade calculada de cada cepa bacteriana para totalizar aproximadamente 5 milhões de unidades formadoras de colônias por mililitro. Centrifugar a mistura a 7 000 G durante sete minutos a quatro graus Celsius. Em seguida, pipete cuidadosamente o sobrenadante.
Ressuspenda o pellet na solução salina balanceada de Hank com baixa capacidade tampão e glicose. Agora, separe os chips de órgãos contendo as células epiteliais vaginais humanas diferenciadas das vagens. Conecte a saída do canal basal do chip com uma ponta de pipeta.
Adicione 200 microlitros de meio de diferenciação sem antibióticos à entrada do canal basal sem empurrar o êmbolo da pipeta para baixo. Solte a ponta da pipeta da pipeta, permitindo que o meio flua livremente pelo canal. Em seguida, pipete 37 microlitros do inóculo bacteriano para a entrada do canal apical do chip enquanto aspira da saída.
Puxe a ponta. Em seguida, conecte a entrada e a saída do canal apical com pontas de pipeta. Para os chips de controle, pipete 37 microlitros de solução salina balanceada de Hank com baixa capacidade tampão e glicose na entrada do canal apical.
Depois de aspirar qualquer meio na superfície do chip, coloque os chips em uma placa de Petri de 150 milímetros. Colônias de L.crispatus e G.vaginalis foram detectadas dentro de 48 horas após o plaqueamento, confirmando que bactérias saudáveis e disbióticas foram enxertadas nos chips da vagina. O pH dos chips vaginais inoculados com L. crispatus foi semelhante ao dos chips de controle não inoculados e, quando co-cultivados com G. vaginalis, eles experimentaram um aumento significativo do pH.
