SW1222 Fabricação de organoides de câncer colorretal derivado de linha celular em matriz peptídica de automontagem ultracurta

Para começar, pipete gotículas de 10 microlitros de solução peptídica 2X nos centros dos poços em uma placa de 24 poços. Após a incubação, pipete 10 microlitros de 2X PBS em cada poço. Use a ponta da pipeta para misturar a solução suavemente, deixe as gotículas de gel estabilizarem por pelo menos 20 minutos, garantindo que as gotículas estejam intactas.

Em seguida, pipete 2,5 mililitros de 0,0125% de tripsina EDTA em um frasco contendo 2 milhões de células de adenocarcinoma colorretal humano SW1222. Incube as células com tripsina a 37 graus Celsius por cinco a 10 minutos até que se desprendam do frasco. Adicione cinco mililitros de meio completo para inativar a tripsina.

Em seguida, filtrar a suspensão celular com um filtro de células de 30 micrómetros. Com uma micropipeta de 10 microlitros, injete dois microlitros da suspensão celular em cada gota peptídica. Semeie 800 células da linhagem celular SW1222 em cada poço por quatro dias.

Incube as gotículas por 30 minutos a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono. Em seguida, adicione 0,5 mililitros de meio suplementado a cada poço. Para preparar o controle, diluir o estoque do controle da matriz da membrana basal com meio suplementado.

Carregue a suspensão celular na solução basal da membrana diluída. Pipete 20 microlitros de matriz de membrana basal diluída em cada poço com as células. Incube as células por 20 minutos a 37 graus Celsius.

Depois que as gotículas solidificarem, adicione 0,5 mililitros de meio completo. Visualize as células usando um microscópio de campo claro nos dias um, quatro e sete para avaliar o crescimento do organoide. Uma semana de imagens de campo claro das células mostrou que os pequenos aglomerados de células estavam se montando em organoides.

Os organoides derivados de SW1222 cultivados em hidrogéis peptídicos tinham uma morfologia arredondada com aparência leve. Uma aparência mais escura indicou maior densidade indesejável, como visto nas colônias do Peptídeo P no sétimo dia.