Colheita e semeadura de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) para o modelo de intestino humano em chip

Para começar, prepare uma diluição de 1 a 100 de uma solução estoque de colágeno em DPBS com magnésio e cálcio. Adicione 350 microlitros da solução estoque diluída à respectiva câmara e incube por cinco minutos em temperatura ambiente. Lave todas as câmaras duas vezes usando 350 microlitros de DPBS com magnésio e cálcio para lavar o colágeno e o ácido acético restantes.

Remova os plugues de um local e mude-os para o outro lado. Depois de lavar a câmara novamente, adicione 350 microlitros de meio de crescimento de células endoteliais. Remova os plugues de um local e mude-os para o outro lado.

Em seguida, adicione 350 microlitros de meio de crescimento de células endoteliais a cada câmara. Tome os HUVECs cultivados nas passagens de um a três com 80% a 90% de confluência celular no meio de crescimento de células endoteliais. Em seguida, remova o meio de cultura de células de um frasco de cultura de células T25 e lave as células suavemente com três a cinco mililitros de DPBS sem magnésio e cálcio.

Uma vez removida a solução, adicione um mililitro de reagente de dissociação de tripsina e incube por cinco minutos a 37 graus Celsius até que as células se desprendam do frasco. Transfira as células destacadas para um tubo usando nove mililitros de 5% FBS em PBS sem magnésio e cálcio. Centrifugue a 350G por cinco minutos em temperatura ambiente.

Depois de mover o sobrenadante, ressuspenda o pellet celular em um mililitro de meio de crescimento de células endoteliais. Adicione o respectivo volume de células à câmara e incube os biochips em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Realizar uma troca média da câmara contendo HUVECs com 350 microlitros de meio de crescimento de células endoteliais após 24 horas.

Se aparecerem bolhas de ar nos biochips microfluídicos, feche todas as portas do biochip, exceto as portas da câmara afetada. Incline o chip para mover a bolha de ar para perto de uma extremidade da cavidade. Da porta da outra extremidade, empurre 700 microlitros de meio de cultura de células através da câmara enquanto segura os plugues opostos.