Para começar, misture os componentes A e B do polidimetilsiloxano, ou PDMS, na proporção de 10 para um. Depois de mexer bem a mistura, despeje a mistura em um molde mestre. Coloque o molde PDMS sob uma pressão de uma libra por polegada quadrada por 15 minutos para remover as bolhas de ar.
Cure o molde PDMS a 60 graus Celsius por duas horas. Desmolde para obter o molde de produção da microagulha. Em seguida, limpe o molde de produção com água ultrapura antes de usar.
Quantificar o teor proteico da solução de exossoma preparada utilizando um kit de ensaio BCA. Adicione uma quantidade apropriada de DPBS à solução de exossomo. Agora, prepare uma solução de 200 miligramas por mililitro de trealose usando DPBS como solvente.
Mexa por 20 minutos para garantir a dissolução completa. Em seguida, prepare uma solução de ácido hialurônico e polivinilpirrolidona, ou PVP, usando DPBS e etanol como solvente, respectivamente. Mexa durante a noite para garantir a dissolução total.
Misturar a solução de exossoma e a solução de trealose numa proporção igual. Adicione um volume igual de solução de ácido hialurônico e misture bem para obter a solução da ponta. Usando um limpador de plasma, processe a superfície do molde PDMS por 30 segundos em um grau baixo para aumentar sua hidrofilicidade.
Adicione 40 microlitros da solução da ponta ao molde PDMS. Centrifugue a 3.000G por três minutos em temperatura ambiente para garantir que o líquido preencha a camada de agulha do molde. Retire o excesso de líquido do molde e seque em temperatura ambiente em forno de secagem a vácuo por um dia.
Em seguida, adicione 200 microlitros de solução PVP ao molde PDMS. Centrifugue a 3.000G por três minutos em temperatura ambiente para garantir que o líquido preencha a camada de suporte do molde. Depois de secar o molde por um dia, desenforme para obter o adesivo de microagulha carregado com exossomo.
