Para começar, prepare os nanocompósitos de óxido de grafeno/cobre. No primeiro dia, inocule uma colônia da bactéria da placa de ágar em 10 mililitros de caldo usando um laço. Incube o caldo a 37 graus Celsius usando uma incubadora agitada a 200 RPM por 24 horas.
No segundo dia, diluir a mistura de nanocompósitos usando DPBS para obter três concentrações diferentes e preparar as soluções de controle para o experimento. Em seguida, dispense 100 microlitros da suspensão nanocomposta e soluções de controle em placas de 96 poços. Com base nas UFCs, diluir a suspensão bacteriana para uma vez 10 elevado a seis UFC por mililitro em Caldo de Soja Tríptico.
Inocular 100 microlitros da suspensão bacteriana diluída nos poços de amostra na placa de 96 poços e incubar a placa a 37 graus Celsius em uma incubadora agitada a 200 RPM por 24 horas. No terceiro dia, misture vigorosamente a amostra e as suspensões bacterianas com uma micropipeta de 200 microlitros antes de diluir em série a mistura de bactérias da amostra dez vezes com água destilada estéril. Em seguida, espalhe 100 microlitros da suspensão bacteriana diluída em uma placa de ágar com um espalhador e incube a placa a 37 graus Celsius por 24 horas.
No quarto dia, conte as colônias bacterianas e determine os valores de UFC para confirmar a atividade antibacteriana dos nanocompósitos usando a equação. Os nanocompósitos demonstraram eficácia antibacteriana significativa contra Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa resistentes à meticilina, erradicando 99,8% e 84,7% dessas bactérias, respectivamente, na concentração de 500 microgramas por mililitro.