Para começar, confirme a anestesia do camundongo avaliando a ausência de resposta a um beliscão do dedo do pé. Prenda o camundongo no suporte interno do animal com a cabeça e os ombros traseiros superiores expostos através da abertura retangular enquanto o dorso e os membros posteriores inferiores permanecem protegidos. Aplique fita cirúrgica na parte superior dos ombros traseiros para prender o mouse.
Insira o suporte interno para animais no suporte externo. Depois de abrir a linha de anestesia secundária dentro do porta-animais, sele a extremidade do porta-animais para evitar que o anestésico vaze para fora do tubo e o camundongo se mova durante o experimento. Alinhe a abertura circular de quatro milímetros do suporte externo do animal diretamente sobre o olho esquerdo do mouse.
Posicione o suporte de animais na mesa XY usando os botões de controle, de modo que sua abertura se alinhe com o cano da pistola de paintball e a superfície externa fique a cinco milímetros da extremidade do cano. Após a calibração, inicie a sequência de ar de sobrepressão para fornecer duas rajadas de 15 PSI em um intervalo de 0.5 segundos. Para o rato de grupo falso, afaste o suporte do animal do cano, bloqueie o ar com um escudo de papelão e exponha-o ao ruído do ar de sobrepressão.
Axônios densamente compactados saudáveis foram observados no grupo simulado. Em contraste, o grupo ITON exibiu sinais de degeneração do axônio, incluindo irregularidades na forma do axônio e quebra da bainha de mielina. O número total de axônios diminuiu significativamente no grupo ITON em comparação com o grupo simulado.
Um aumento significativo nos perfis degenerativos foi detectado no grupo ITON em comparação com o grupo sham. Aumento da proliferação da microglia foi observado na retina de camundongos ITON, com a microglia se estendendo para a camada nuclear externa. Em comparação com o grupo simulado, onde a microglia permaneceu em suas camadas retinianas típicas.
Conexões sinápticas intactas entre células bipolares de bastonetes e fotorreceptores foram observadas em camundongos ITON e simulados, sem sinaptopatia detectada.
