Imunocoloração e contagem automatizada de células ganglionares da retina de camundongos usando um programa baseado em IA

Depois de isolar toda a retina do mouse, lave a retina em PBS com agitação suave por cinco minutos. Mergulhe a retina lavada em um tampão de bloqueio por 30 minutos. Após a incubação, substitua o tampão de bloqueio pelo anticorpo primário BRN3A.

Incube a retina durante a noite a quatro graus Celsius para permitir a ligação de anticorpos antigénios específicos. No dia seguinte, lave a retina três vezes com PBS por cinco minutos cada antes de incubar com anticorpo secundário anti-coelho conjugado Alexa 594 ou Alexa 488 por duas horas para visualizar os antígenos alvo. Depois de lavar a retina imunocorada com PBS, transfira-a suavemente para uma lâmina de microscópio de vidro.

Achate a retina para minimizar dobras ou distorções. Posicione uma lamínula sobre a retina montada, garantindo que não se formem bolhas de ar. Baixe o código no link do GitHub.

Em seguida, baixe os arquivos necessários do disco da nuvem e descompacte-os. Localize a configuração. ini e modifique seu conteúdo para apontar para o caminho yolov5_cpu.

Em seguida, clique em Userinterface. exe para abrir a interface gráfica. Verifique se o pmse_plus.

pt model está no diretório raiz da unidade C.Caso contrário, copie-o da pasta weights da pasta yolov5. Abra o software de contagem de células. Clique em Abrir imagem para importar a imagem e, em seguida, clique em Executar para permitir que o software conte automaticamente as células.

O software de contagem automatizada de células identificou com precisão 15.231 células ganglionares da retina no modelo de camundongo com glaucoma induzido por N-metil-D-aspartato, mostrando perda celular significativa em comparação com aproximadamente 45.000 a 50.000 RGCs em uma retina normal.