Preparação de amostras para OPTIR-FISH para investigar o metabolismo da glicose em comunidades bacterianas

Para começar, pegue lâminas padronizadas de fluoreto de cálcio. Mergulhe-os em etanol 70% por 15 minutos e enxágue-os duas vezes com água deionizada. Transfira as lâminas limpas para uma solução de lisina a 0,1% de poli L e incube-as durante a noite a quatro graus Celsius.

Em seguida, enxágue as lâminas com água deionizada e deixe-as secar. Em seguida, descongele as amostras de células preparadas à temperatura ambiente, mantendo-as protegidas da luz. Para evitar cristais de sal excessivos de PBS durante a secagem da amostra, lave as células descongeladas duas vezes com água deionizada.

Centrifugar a 14 000 g durante 10 minutos e retirar o sobrenadante. Reintroduza o volume original de água deionizada nas células e subtraia-as suavemente. Após a lavagem, centrifugar as células a 14 000 G durante 10 minutos para concentrar as amostras de células bacterianas e remover o sobrenadante.

Agite suavemente a solução restante por aproximadamente 30 segundos e aplique um a dois microlitros desta solução na lâmina de fluoreto de cálcio preparada.