Os autores gostariam de agradecer Lynne Spencer, pelo seu apoio durante a parte espectroscopia de RMN do experimento. Este trabalho foi financiado por subvenções dos Institutos Nacionais de Saúde HL059246 fundo R01, R01 HL067970, R01 HL088634 (para Dr. Tian) e F32 HL096284 (para Dr. Kolwicz).

<ol><li> Para estes experimentos, dois sistemas separados são utilizados simultaneamente. Para aquisição de 31 espectros de P, um ímã Bruker 14T é a interface com o III Avance console e um computador equipado com software TopSpin V2.1. Para avaliação da função cardíaca, um sistema de perfusão personalizado construído coração está conectado com o PowerLab 30/04 aquisição de dados, equipada com os 6 LabChartPro software para análise de dados. </li><li> No dia do experimento, 1 litro de Krebs-Henseleit tampão é preparado da seguinte forma: 0,5 mM EDTA, 5,3 mm KCl, 1,2 mm MgSO 4, 118mm NaCl e 25mM NaHCO 3. A mistura é então borbulhado com 5% de CO 2 / O 2 95% por 10-15 minutos antes da adição de 2mM CaCl 2. Finalmente, substratos, na forma de glicose 10 mM e 0,5 mM de piruvato, são adicionados. </li><li> Regulação da temperatura durante a experiência é fundamental. Circuladores aquecida são usados ​​para manter a temperatura entre 37,0-37,5 ° C, enquanto o coração está dentro do ímã. A temperatura é monitorada para a duração do experimento usando uma sonda de temperatura de fibra óptica. </li><li> Pressão de perfusão ea pressão ventricular esquerda são monitorados através de transdutores de pressão ligados a um sistema de aquisição de dados e exibidos utilizando o software incluído. Estes são calibrados com um esfigmomanômetro padrão antes do experimento. Além disso, linhas de pressão são liberadas de forma adequada, a fim de remover todas as bolhas de ar. </li><li> A amostra padrão de 150 mM fosfato de sódio (que é equivalente à força iônica do tampão KH) é usado para &quot;calibrar&quot; a sonda antes da inserção do coração. Isso facilita o sinal e diminui o tempo necessário para começar o período de aquisição uma vez que o coração está posicionado dentro da sonda. </li><li> Para reduzir a coagulação, o mouse é injetado com 200 unidades de heparina IP Depois de 5 minutos, sódio IP (175 mg / kg) pentobarbital é dado. </li><li> O coração é rapidamente retirado (com os pulmões eo timo intacta) e preso no gelo frio KH buffer. </li><li> Enquanto mantidos em gelo, os pulmões são rapidamente removidas. Os lobos do timo são identificados e delicadamente descascadas volta para expor a aorta. O timo é removido. A aorta é então isolado pela remoção cuidadosa de qualquer tecido circundante. </li><li> Forceps Micro sutura são usados ​​para segurar delicadamente ambas as paredes da aorta para expor o lúmen. A aorta é cuidadosamente colocada sobre a cânula feita de tubo de polietileno 0,965 mm de diâmetro externo (PE50). A aorta é mantida no lugar com uma braçadeira navio micro, enquanto as suturas são rapidamente amarrado ao redor da aorta. O clipe é removido e as pinças são usadas para verificar cuidadosamente que a cânula está acima da raiz da aorta. Vínculos adicionais são adicionados como necessário para manter o coração no lugar. </li><li> Qualquer tecido extra é removida com fórceps e microtesoura. Uma pequena incisão é feita na aurícula esquerda. A tubulação de polietileno de 0,61 milímetros OD (PI10) é cuidadosamente inserido através do átrio esquerdo, cavidade do VE, e para fora através do ápice, enquanto delicadamente segurando o coração. A tubulação em excesso é aparado. </li><li> A deflacionado balão cheio de água é introduzido através do átrio para o LV e é mantida no lugar usando fita adesiva ou suturas. A velocidade da bomba peristáltica é gradualmente aumentada para fornecer fluxo suficiente para o coração. Até que o coração é lugar para a sonda de RMN, o coração vai continuar a ser perfundidos com fluxo constante equivalente a aproximadamente 2 ml / min. O balão é inflado LV com um pequeno volume, utilizando uma seringa micrométrica para verificar se o transdutor de pressão LV está funcionando. </li><li> O coração é cuidadosamente inserido em um tubo de RMN 10 mm. Uma ampla furo &quot;giratório&quot; é usado para ajudar a orientar o tubo na posição adequada dentro da sonda. Todo o aparato é, então, firmemente ligado ao &quot;cordão umbilical&quot; com fita adesiva. </li><li> O cordão umbilical é lentamente abaixado no furo superior do ímã até o tubo de coração / NMR está dentro da bobina da sonda 10 milímetros de RMN. </li><li> Uma vez que o coração está na posição adequada dentro da sonda, a vazão da bomba peristáltica é ajustado de forma a atingir uma pressão de perfusão de 80mmHg. (Lembre-se que até este ponto, o coração foi perfundido com um fluxo constante de aproximadamente 2 ml / min). A pressão de perfusão é então mantida, permitindo que o &quot;hold&quot; mecanismo no controlador de bomba. O coração é então permitido um período de equilíbrio 15-20 minutos. Durante esse tempo, o volume do balão LV é ajustada para atingir uma pressão final diastólica de 8-10 mmHg. </li><li> Durante o período de equilíbrio, é necessário otimizar os parâmetros espectrômetro a fim de obter o sinal de fósforo melhor possível. Isto é conseguido através da criação do pulso de rádio na frequência a qual o núcleo de fósforo ressoa (&quot;tuning&quot;) e fazendo o campo magnético homogêneo (&quot;calços&quot;). </li><li> Após o período de equilíbrio, vários espectros de RMN 31 P pode ser obtida. O período de aquisição de cada espectro é dependente de tele força do campo do ímã, do tamanho da amostra, ea relação sinal-ruído requerida para um experimento específico. Espectros são obtidos utilizando um ímã 14 Telsa pela média do sinal obtido a partir de 256 pulsos de rádio freqüência de 20 mS com um ângulo de 60 graus flip e atrasos de 2,0 segundos. Esta experiência vai exigir cerca de 10 min. </li></ol> Resultados representante Do hardware de aquisição de dados eo software LabChart, vários parâmetros da função cardíaca pode ser medido ao longo do protocolo experimental. A medida típica da função cardíaca, a pressão ventricular esquerda desenvolvidos (LVDevP), é obtida pela subtração da pressão diastólica final (EDP) a partir da pressão sistólica (Figura 1). Esta medida pode variar dependendo da estirpe do mouse ea condição do coração (ou seja, a sobrecarga de pressão). No entanto, em um normal LVDevP coração C57BL6 mouse é normalmente entre 100-110 mmHg na pressão diastólica final fixo de 10/08 mmHg. Além disso, o programa permite LabChart para a medição da freqüência cardíaca baseada nas medidas cíclica das ondas de pressão do VE. Novamente, esta medida pode variar, mas valores típicos são 350-400 bpm quando os corações estão autorizados a bater a taxas intrínsecas. No entanto, o coração pode ser padronizado utilizando um sistema de estimulação onde a freqüência cardíaca é mantida a 420 bpm. Além disso, medidas de contratilidade (+ dP / dt) e relaxamento (-dP/dt) pode ser estimada utilizando a primeira derivada da onda de pressão do VE. Durante o protocolo experimental é fácil avaliar o mecanismo de Starling, incorporando uma relação pressão-volume. Isto é conseguido através de aumentos graduais no balão LV e observando o LVDevP, bem como a EDP. Estes valores podem ser representados como mostrado na Figura 2. Enquanto a curva de Starling é o ideal, observando o volume necessário para atingir uma EDP de 8-10 mmHg pode dar uma idéia indireta de LV dimensão câmara. Isto pode ser usado em modelos de bandagem aórtica como corações hipertrofiados normalmente exigirá um volume menor balão enquanto corações dilatados requerem um volume maior quando comparados aos controles. A Tabela 1 apresenta dados representativos função cardíaca como adquiridos durante o protocolo de perfusão. O espectrômetro de RMN 31 P irá fornecer sinais de fosfocreatina (PCr) e os três fosfatos do ATP (ATP-γ, α-ATP, e β-ATP), bem como fosfato inorgânico (Pi), conforme mostrado na Figura 2. Análise de cada um desses picos fornece um valor para a área sob a curva. A quantidade de ATP é estimada pela média das γ-ATP e β-ATP áreas. (O α-ATP não é utilizada porque as moléculas de NAD contribuir para uma parte desconhecida do sinal total). O status energético do coração é determinado pelo quociente da PCr e áreas ATP (PCr: relação ATP). Esse valor é normalmente 1,5-1,7 em um coração de rato fornecido com a glicose como substrato primário. Embora 31 P NMR não fornece medidas diretas de ATP ou PCr, a área dos picos é proporcional à quantidade de fósforo contendo compostos na amostra. Valores para esses sinais podem ser estimados por outros métodos. Por exemplo, medidas diretas de ATP por cromatografia líquida (HPLC) em uma coorte de coração pode produzir uma concentração média. Este valor pode então ser usada para calibrar o ATP áreas médias observadas nos espectros. A concentração de PCr pode ser calculada com base na área PCr relativa à área de ATP. Também é possível estimar pH, analisando o deslocamento químico relativa do fosfato inorgânico (Pi) de sinal para o sinal de PCr. 1 Usando seqüências de pulsos de rádio diferentes, a velocidade de reação da creatina quinase ATP ou a velocidade de reação de síntese também pode ser medido. 2 <img src="/files/ftp_upload/2069/2069tab1.jpg" alt="Tabela 1" /> Tabela de funções da linha de base 1. Cardíaca de corações isolados perfundidos. LVDevP: pressão ventricular esquerda desenvolvidos; PDFVE: final do ventrículo esquerdo pressão diastólica; FC: freqüência cardíaca; RPP: produto pressão taxa; + dP / dt: primeiro LV pressão derivada positiva; -dP/dt: primeiro LV pressão derivada negativa; PP : pressão de perfusão; CF: fluxo coronariano. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Representante LV ondas de pressão de LabChart software Pro. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Curvas de Starling Representante do controle (linha sólida) e em faixas aórtica (linha pontilhada) camundongos. A) função sistólica, representado por mais de LVDevP volumes crescentes LV, conforme determinado pelo volume do balão LV. B) A função diastólica como representado pela EDP sobre volumes crescentes LV, conforme determinado pelo volume do balão LV. LVDevP: pressão do ventrículo esquerdo desenvolveu (sistólica menos p diastólicaressure); EDP: pressão diastólica final. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Representante 31 P espectros de RMN de coração de rato isolado perfundido. Observe o relativamente pequeno pico Pi. Em um coração aerobicamente perfundidos fornecido com ácidos graxos ou piruvato, além de glicose, o pico deve ser mínima. Durante os períodos de isquemia, o que aumenta de pico, enquanto o pico PCr diminui. Observe o ombro para a direita do pico de α-ATP. Esta é a contribuição de moléculas de NAD. Pi: fosfato inorgânico; PCr: fosfocreatina; ATP: adenosina trifosfato.

<ol>
	<li>Nascimben, L., Ingwall, J. S., Lorell, B. H., Pinz, I., Schultz, V., Tornheim, K., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+for+increased+glycolysis+in+the+hypertrophied+rat+heart.">Mechanisms for increased glycolysis in the hypertrophied rat heart.</a> Hypertension. 44, 662-667 (2004).</li><li>Spindler, M., Saupe, K. W., Tian, R., Ahmed, S., Matlib, M. A., Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+creatine+kinase+enzyme+kinetics+in+diabetic+cardiomyopathy.+A(31)P+NMR+magnetization+transfer+study+of+the+intact+beating+rat+heart.">Altered creatine kinase enzyme kinetics in diabetic cardiomyopathy. A(31)P NMR magnetization transfer study of the intact beating rat heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 31, 2175-2189 (1999).</li><li>Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphorus+nuclear+magnetic+resonance+spectroscopy+of+cardiac+and+skeletal+muscles.">Phosphorus nuclear magnetic resonance spectroscopy of cardiac and skeletal muscles.</a> Am J Physiol. 242, H729-H744 (1982).</li><li>Ingwall, J. S., Javadpour, M. M., Miao, W., Hoit, B. D., Walsh, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=31P+NMR+spectroscopy+of+the+mouse+heart.">31P NMR spectroscopy of the mouse heart.</a> Cardiovascular physiology in the genetically engineered. , 151-163 (2002).</li><li>Luptak, I., Balschi, J. A., Xing, Y., Leone, T. C., Kelly, D. P., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+contractile+and+metabolic+reserve+in+peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha-null+hearts+can+be+rescued+by+increasing+glucose+transport+and+utilization.">Decreased contractile and metabolic reserve in peroxisome proliferator-activated receptor-alpha-null hearts can be rescued by increasing glucose transport and utilization.</a> Circulation. 112, 2339-2346 (2005).</li><li>Yan, J., Young, M. E., Cui, L., Lopaschuk, G. D., Liao, R., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glucose+uptake+and+oxidation+in+mouse+hearts+prevent+high+fatty+acid+oxidation+but+cause+cardiac+dysfunction+in+diet-induced+obesity.">Increased glucose uptake and oxidation in mouse hearts prevent high fatty acid oxidation but cause cardiac dysfunction in diet-induced obesity.</a> Circulation. 119, 2818-2828 (2009).</li><li>Luptak, I., Shen, M., He, H., Hirshman, M. F., Musi, N., Goodyear, L. J., Yan, J., Wakimoto, H., Morita, H., Arad, M., Seidman, C. E., Seidman, J. G., Ingwall, J. S., Balschi, J. A., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+activation+of+AMP-activated+protein+kinase+remodels+metabolic+network+in+favor+of+cardiac+glycogen+storage.">Aberrant activation of AMP-activated protein kinase remodels metabolic network in favor of cardiac glycogen storage.</a> J Clin Invest. 117, 1432-1439 (2007).</li><li>Xing, Y., Musi, N., Fujii, N., Zou, L., Luptak, I., Hirshman, M. F., Goodyear, L. J., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+and+energy+homeostasis+in+mouse+hearts+overexpressing+dominant+negative+alpha2+subunit+of+AMP-activated+protein+kinase.">Glucose metabolism and energy homeostasis in mouse hearts overexpressing dominant negative alpha2 subunit of AMP-activated protein kinase.</a> J Biol Chem. 278, 28372-28377 (2003).</li><li>Luptak, I., Yan, J., Cui, L., Jain, M., Liao, R., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+effects+of+increased+glucose+entry+on+mouse+hearts+during+normal+aging+and+ischemic+stress.">Long-term effects of increased glucose entry on mouse hearts during normal aging and ischemic stress.</a> Circulation. 116, 901-909 (2007).</li><li>Tian, R., Abel, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+GLUT4-deficient+hearts+to+ischemia+underscore+the+importance+of+glycolysis.">Responses of GLUT4-deficient hearts to ischemia underscore the importance of glycolysis.</a> Circulation. 103, 2961-2966 (2001).</li><li>Liao, R., Jain, M., Cui, L., D'Agostino, J., Aiello, F., Luptak, I., Ngoy, S., Mortensen, R. M., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac-specific+overexpression+of+GLUT1+prevents+the+development+of+heart+failure+attributable+to+pressure+overload+in+mice.">Cardiac-specific overexpression of GLUT1 prevents the development of heart failure attributable to pressure overload in mice.</a> Circulation. 106, 2125-2131 (2002).</li><li>Tian, R., Musi, N., D'Agostino, J., Hirshman, M. F., Goodyear, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+adenosine+monophosphate-activated+protein+kinase+activity+in+rat+hearts+with+pressure-overload+hypertrophy.">Increased adenosine monophosphate-activated protein kinase activity in rat hearts with pressure-overload hypertrophy.</a> Circulation. 104, 1664-1669 (2001).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

31 P espectroscopia de RMN no coração do mouse Langendorff-perfundidos isolados fornece dados confiáveis ​​e reprodutíveis. 3, 4 No entanto, é imperativo que a canulação da aorta ea inserção do balão LV são feitas adequadamente tais para permitir o desempenho cardíaco estável, enquanto no interior do NMR tubo. Além disso, a regulação da temperatura é fundamental para alcançar a função de referência apropriada. Um fator importante na obtenção de bons, espectros de RMN analisável é o aumento da relação sinal-ruído. Isto pode ser conseguido através da garantia &quot;tuning&quot; ótimo e &quot;calços&quot; na amostra. Como mencionado no texto do protocolo, o uso de uma amostra padrão antes da inserção do coração pode facilitar este processo. Também é útil ter uma adequada &quot;amostra&quot; de tamanho. Corações com peso inferior a 100 mg normalmente fornecem PCr mais baixos e sinais de ATP para aumento do tempo de aquisição será necessário para obter espectros de fósforo bom. Existem várias maneiras de modificar o protocolo existente para angariar informações adicionais sobre a função cardíaca e energética. Em nosso laboratório, temos perfundidos corações com buffers substrato misto, que pode incluir a presença de diferentes combinações de ácidos graxos (em concentrações baixa e alta), lactato, cetonas e insulina. Com o uso de isótopos estáveis ​​no buffer de perfusão (ou seja, 13 C rotulados substratos), possuímos a capacidade de estimar utilização do substrato pela contribuição relativa da rotulados acetil CoA para o ciclo TCA. 5-7 Para esta aplicação, realizamos isotopomer análise de 13 e 13 de C3-C4-glutamato com 13 C espectroscopia de RMN. Isso exige congelamento de aperto no coração no final do protocolo de perfusão e realizar uma extração do tecido congelado. Este será um experimento adicional como a análise requer o uso de uma sonda com diferentes parâmetros de configuração separado. Outras aplicações incluem a substituição de glicose com deoxiglicose no buffer enquanto monitora a acumulação dependente do tempo de 2-fosfato deoxiglicose no coração usando espectroscopia de RMN 31 P. Este método permite a medição da absorção de glicose do miocárdio. 7, 8 Além disso, nosso laboratório analisou a função cardíaca e energética em protocolos de perfusão consiste de isquemia / reperfusão e desafio alta carga de trabalho. 6, 80-10 Em resumo, 31 P espectroscopia de RMN no coração de rato isolado é um procedimento tecnicamente desafiador exigindo o uso de equipamentos sofisticados. No entanto, os dados que ele produz é inestimável para o pesquisador que pretende analisar a função e energética dos modelos do rato de bioengenharia. Para o nosso laboratório, estas técnicas têm sido vitais em nossa compreensão das conseqüências de uma variedade de fatores de estresse sobre a função cardíaca, energética e metabolismo. 1, 11, 12

<table border="1">
<tbody>
<tr>
<td>Material Name</td>
<td>Type</td>
<td>Company</td>
<td>Catalogue Number</td>
</tr>
<tr>
<td>Magnesium Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>M7506</td>
</tr>
<tr>
<td>EDTA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>E1644</td>
</tr>
<tr>
<td>Potassium chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>P4505</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium bicarbonate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>S6297</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>S7653</td>
</tr>
<tr>
<td>Calcium chloride dihydrate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>C5080</td>
</tr><tr>
<td>D-Glucose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>G7528</td>
</tr><tr>
<td>Sodium Pyruvate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>P2256</td>
</tr><tr>
<td>Bruker Ultrashield 600WB Plus</td>
<td>Equipment</td>
<td>Bruker</td>
<td>&nbsp;</td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank">PowerLab 4/30</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank">ML866/P</a></td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank">LabChart 6 Pro</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank">MLS260/6</a></td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/FE224/" target="_blank">Quad Bridge Amp</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/FE224/" target="_blank">ML224</a></td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/research/product/ML175/" target="_blank">STH Pump Controller</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/research/product/ML175/" target="_blank">ML175</a></td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML172/" target="_blank">Minipuls 3 Peristaltic Pump</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML172/" target="_blank">ML172</a></td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT0699/" target="_blank">Disposable BP Transducer</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT0699/" target="_blank">MLT0699</a></td>
</tr><tr>
<td>10mm NMR Sample Tube</td>
<td>Equipment</td>
<td>Wilmad LabGlass</td>
<td>513-7PP-7</td>
</tr><tr>
<td>Polyethylene tubing PE10</td>
<td>Equipment</td>
<td>Becton-Dickinson</td>
<td>427401</td>
</tr><tr>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT844/" target="_blank">Physiological Pressure Transducer</a></td>
<td>Equipment</td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank">ADInstruments</a></td>
<td><a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT844/" target="_blank">MLT844</a></td>
</tr><tr>
<td>Polyethylene tubing PE50</td>
<td>Equipment</td>
<td>Becton-Dickinson</td>
<td>427411</td>
</tr><tr>
<td>Micrometer syringe</td>
<td>Equipment</td>
<td>Gilmont Instruments</td>
<td>GS-1101</td>
</tr><tr>
<td>McPherson Forceps</td>
<td>Equipment</td>
<td>Miltex Inc.</td>
<td>18-949</td>
</tr><tr>
<td>Castraviejo microscissors</td>
<td>Equipment</td>
<td>Roboz Surgical Instruments</td>
<td>RS-5650</td>
</tr><tr>
<td>Neoptix Signal Conditioner</td>
<td>Equipment</td>
<td>Neoptix, Inc.</td>
<td>Reflex - 1</td>
</tr>	
</tbody>
</table>

assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31p nmr spectroscopy

Modelos de ratos bioengenharia tornaram-se ferramentas de pesquisa poderosa para determinar relações causais entre as alterações moleculares e modelos de doença cardiovascular. Embora a biologia molecular é necessário na identificação das alterações-chave na via de sinalização, não é um substituto para o significado funcional. Enquanto fisiologia pode fornecer respostas para a questão da função, fisiologia combinando com a avaliação bioquímica dos metabólitos na intacto, coração batendo permite uma visão completa da função cardíaca e energética. Durante anos, nosso laboratório tem utilizado perfusões coração isolado combinada com espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) para realizar essa tarefa. Função ventricular esquerda é avaliado por Langendorff modo perfusões coração isolado enquanto energética cardíaca é medida através da realização de<sup&gt; 31</sup&gt; P espectroscopia por ressonância magnética dos corações perfundidos. Com essas técnicas, os índices da função cardíaca em combinação com os níveis de fosfocreatina e ATP podem ser medidos simultaneamente em corações batendo. Além disso, estes parâmetros podem ser monitorados enquanto estressores fisiológicos ou patológicos são instituídos. Por exemplo, a isquemia / reperfusão ou protocolos de alto desafio carga de trabalho pode ser adotada. O uso de bandagem aórtica ou outros modelos de patologia cardíaca estão aptos também. Independentemente das variantes dentro do protocolo, o significado funcional e energética de modificações moleculares de modelos de ratos transgênicos pode ser descrito adequadamente, levando a novos insights sobre os caminhos associados enzimática e metabólica. Portanto,<sup&gt; 31</sup&gt; P espectroscopia de RMN no coração isolado perfundido é uma técnica de pesquisa valiosa em modelos animais de doenças cardiovasculares.

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Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Langendorff modo de perfusão do coração isolado, em conjunto com<sup&gt; 31</sup&gt; P espectroscopia de RMN, combina os campos da bioquímica e fisiologia em um experimento. O protocolo permite a medição dinâmica de conteúdo de alta energia de fosfato e volume de negócios no coração ao mesmo tempo em monitorização da função fisiológica. Quando realizada corretamente, esta é uma técnica valiosa na avaliação da energética cardíaca.

Avaliação da função cardíaca e Energetics em Corações Isolados rato Usando 31 P NMR Spectroscopy

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of ...

assessment-cardiac-function-energetics-isolated-mouse-hearts-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

26.0K visualizações.  University of Washington School of Medicine. Langendorff modo de perfusão do coração isolado, em conjunto com 31 P espectroscopia de RMN, combina os campos da bioquímica e fisiologia em um experimento. O protocolo permite a medição dinâmica de conteúdo de alta energia de fosfato e volume de negócios no coração ao mesmo tempo em monitorização da função fisiológica. Quando realizada corretamente, esta é uma técnica valiosa na avaliação da energética cardíaca.

Vídeo: Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

NADH Fluorescence Imaging of Isolated Biventricular Working Rabbit Hearts

Since its inception by Langendorff1, the isolated perfused heart remains a prominent tool for studying cardiac physiology2. However, it is not well-suited for studies of cardiac metabolism, which require the heart to perform work within the context of physiologic preload and afterload pressures. Neely introduced modifications to the Langendorff technique to establish appropriate left ventricular (LV) preload and afterload pressures3. The model is known as the isolated LV working heart model and has been used extensively to study LV performance and metabolism4-6. This model, however, does not provide a properly loaded right ventricle (RV). Demmy et al. first reported a biventricular model as a modification of the LV working heart model7, 8. They found that stroke volume, cardiac output, and pressure development improved in hearts converted from working LV mode to biventricular working mode8. A properly loaded RV also diminishes abnormal pressure gradients across the septum to improve septal function. Biventricular working hearts have been shown to maintain aortic output, pulmonary flow, mean aortic pressure, heart rate, and myocardial ATP levels for up to 3 hours8.
When studying the metabolic effects of myocardial injury, such as ischemia, it is often necessary to identify the location of the affected tissue. This can be done by imaging the fluorescence of NADH (the reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide)9-11, a coenzyme found in large quantities in the mitochondria. NADH fluorescence (fNADH) displays a near linearly inverse relationship with local oxygen concentration12 and provides a measure of mitochondrial redox state13. fNADH imaging during hypoxic and ischemic conditions has been used as a dye-free method to identify hypoxic regions14, 15 and to monitor the progression of hypoxic conditions over time10.
The objective of the method is to monitor the mitochondrial redox state of biventricular working hearts during protocols that alter the rate of myocyte metabolism or induce hypoxia or create a combination of the two. Hearts from New Zealand white rabbits were connected to a biventricular working heart system (Hugo Sachs Elektronik) and perfused with modified Krebs-Henseleit solution16 at 37 &deg;C. Aortic, LV, pulmonary artery, and left &amp; right atrial pressures were recorded. Electrical activity was measured using a monophasic action potential electrode. To image fNADH, light from a mercury lamp was filtered (350&plusmn;25 nm) and used to illuminate the epicardium. Emitted light was filtered (460&plusmn;20 nm) and imaged using a CCD camera. Changes in the epicardial fNADH of biventricular working hearts during different pacing rates are presented. The combination of the heart model and fNADH imaging provides a new and valuable experimental tool for studying acute cardiac pathologies within the context of realistic physiological conditions.

The objective is to monitor the mitochondrial redox state of isolated hearts within the context of physiologic preload and afterload pressures. A biventricular working rabbit heart model is presented. High spatiotemporal resolution fluorescence imaging of NADH is used to monitor the mitochondrial redox state of epicardial tissue.

NADH Fluorescência de Imagem biventricular isolado de coelho

Since its inception by Langendorff1, the isolated perfused heart remains a prominent tool for studying cardiac physiology2. However, it is not well-suited ...

Medicina

Reduction in Left Ventricular Wall Stress and Improvement in Function in Failing Hearts using Algisyl-LVR

Injection of Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently used for the first time in patients who had symptomatic heart failure. In all patients, cardiac function of the left ventricle (LV) improved significantly, as manifested by consistent reduction of the LV volume and wall stress. Here we describe this novel treatment procedure and the methods used to quantify its effects on LV wall stress and function.
Algisyl-LVR is a biopolymer gel consisting of Na+-Alginate and Ca2+-Alginate. The treatment procedure was carried out by mixing these two components and then combining them into one syringe for intramyocardial injections. This mixture was injected at 10 to 19 locations mid-way between the base and apex of the LV free wall in patients.
Magnetic resonance imaging (MRI), together with mathematical modeling, was used to quantify the effects of this treatment in patients before treatment and at various time points during recovery. The epicardial and endocardial surfaces were first digitized from the MR images to reconstruct the LV geometry at end-systole and at end-diastole. Left ventricular cavity volumes were then measured from these reconstructed surfaces.
Mathematical models of the LV were created from these MRI-reconstructed surfaces to calculate regional myofiber stress. Each LV model was constructed so that 1) it deforms according to a previously validated stress-strain relationship of the myocardium, and 2) the predicted LV cavity volume from these models matches the corresponding MRI-measured volume at end-diastole and end-systole. Diastolic filling was simulated by loading the LV endocardial surface with a prescribed end-diastolic pressure. Systolic contraction was simulated by concurrently loading the endocardial surface with a prescribed end-systolic pressure and adding active contraction in the myofiber direction. Regional myofiber stress at end-diastole and end-systole was computed from the deformed LV based on the stress-strain relationship.

This article describes procedures for implanting a novel hydrogel in failing hearts and quantifying its effect on left ventricular wall stress and function. These procedures have been successfully applied in dogs and humans.

Redução do Ventrículo Esquerdo de parede Estresse e Melhoria na função em falta Corações usando Algisyl-LVR

Injection of  Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat  patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently ...

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery (SALLI) MRI in Rats

Small animal magnetic resonance imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial tissue. The high heart rates of small animals (200 to 600 beats/min) have previously limited the role of CMR imaging. Small animal Look-Locker inversion recovery (SALLI) is a T1 mapping sequence for small animals to overcome this problem 1. T1 maps provide quantitative information about tissue alterations and contrast agent kinetics. It is also possible to detect diffuse myocardial processes such as interstitial fibrosis or edema 1-6. Furthermore, from a single set of image data, it is possible to examine heart function and myocardial scarring by generating cine and inversion recovery-prepared late gadolinium enhancement-type MR images 1.
	The presented video shows step-by-step the procedures to perform small animal CMR imaging. Here it is presented with a healthy Sprague-Dawley rat, however naturally it can be extended to different cardiac small animal models.

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery SALLI MRI in Rats

Contrast enhanced cardiac magnetic resonance (CMR) imaging allows comprehensive in vivo assessment of the heart in small animal models of cardiovascular disease. Here we detail the procedures to perform CMR imaging, reconstruction and analysis using Small Animal Lock-Locker Inversion Recovery (SALLI) in rats.

Avaliação da função cardíaca e Morfologia do miocárdio Usando Pequenos Animais Inversion Recovery Olha-locker (SALLI) MRI em ratos

Small animal magnetic resonance  imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial  tissue. The high heart rates of small ...

Assessment of Right Ventricular Structure and Function in Mouse Model of Pulmonary Artery Constriction by Transthoracic Echocardiography

Emerging clinical data support the notion that RV dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease and heart failure1-3. Moreover, the RV is significantly affected in pulmonary diseases such as pulmonary artery hypertension (PAH). In addition, the RV is remarkably sensitive to cardiac pathologies, including left ventricular (LV) dysfunction, valvular disease or RV infarction4. To understand the role of RV in the pathogenesis of cardiac diseases, a reliable and noninvasive method to access the RV structurally and functionally is essential.
A noninvasive trans-thoracic echocardiography (TTE) based methodology was established and validated for monitoring dynamic changes in RV structure and function in adult mice. To impose RV stress, we employed a surgical model of pulmonary artery constriction (PAC) and measured the RV response over a 7-day period using a high-frequency ultrasound microimaging system. Sham operated mice were used as controls. Images were acquired in lightly anesthetized mice at baseline (before surgery), day 0 (immediately post-surgery), day 3, and day 7 (post-surgery). Data was analyzed offline using software.
Several acoustic windows (B, M, and Color Doppler modes), which can be consistently obtained in mice, allowed for reliable and reproducible measurement of RV structure (including RV wall thickness, end-diastolic&#160;and end-systolic dimensions), and function (fractional area change, fractional shortening, PA peak velocity, and peak pressure gradient) in normal mice and following PAC.
Using this method, the pressure-gradient resulting from PAC was accurately measured in real-time using Color Doppler mode and was comparable to direct pressure measurements performed with a Millar high-fidelity microtip catheter. Taken together, these data demonstrate that RV measurements obtained from various complimentary views using echocardiography are reliable, reproducible and can provide insights regarding RV structure and function. This method will enable a better understanding of the role of RV cardiac dysfunction.

Right ventricle (RV) dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease, yet limited methodologies are available for its evaluation. Recent advances in ultrasound imaging provide a noninvasive and accurate option for longitudinal RV study. Herein, we detail a step-by-step echocardiographic method using a murine model of RV pressure overload.

Avaliação da Estrutura e Função do Ventrículo Direito em modelo de camundongo Pulmonary Artery constrição por Ecocardiografia transtorácica

Emerging clinical data support the notion that RV dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease and heart failure1-3. Moreover, ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

Indução e Avaliação de isquemia-reperfusão em Langendorff-perfundidos Rato Corações

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

Avaliação da função renal em modelos do rato da doença Glomerular

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation time and increases the risk of adverse post-transplantation outcomes. Moreover, the static nature of CS does not allow for organ evaluation or intervention during the preservation interval. Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP) is a novel method for preservation of the donated heart that minimizes cold ischemia by providing oxygenated, nutrient-rich perfusate to the heart. ESHP has been shown to be non-inferior to CS in the preservation of standard-criteria donor hearts and has also facilitated the clinical transplantation of the hearts donated after the circulatory determination of death. Currently, the only available clinical ESHP device perfuses the heart in an unloaded, non-working state, limiting assessments of myocardial performance. Conversely, ESHP in working mode provides the opportunity for comprehensive evaluation of cardiac performance by assessment of functional and metabolic parameters under physiologic conditions. Moreover, earlier experimental studies have suggested that ESHP in working mode may result in improved functional preservation. Here, we describe the protocol for ex situ perfusion of the heart in a large mammal (porcine) model, which is reproducible for different animal models and heart sizes. The software program in this ESHP apparatus allows for real-time and automated control of the pump speed to maintain desired aortic and left atrial pressure and evaluates a variety of functional and electrophysiological parameters with minimal need for supervision/manipulation.

Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP), preserves the heart in a beating, semi-physiologic state. When performed in a working mode, ESHP provides the opportunity to perform sophisticated assessments of donor heart function and organ viability. Here, we describe our method for myocardial performance evaluation during ESHP.

Normotérmica Ex Situ coração perfusão na modalidade de trabalho: avaliação da função cardíaca e metabolismo

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Echocardiographic Assessment of Cardiac Anatomy and Function in Adult Rats

The use of experimental animal models has become crucial in cardiovascular science. Most studies using rodent models are focused on two-dimensional imaging to study the cardiac anatomy of the left ventricle and M-mode echo to assess its dimensions. However, this could limit a comprehensive study. Herein, we describe a protocol that allows an assessment of the heart chamber size, left ventricular function (systolic and diastolic) and valvular function. A conventional medical ultrasound machine was used in this protocol and different echo views were obtained through left parasternal, apical and suprasternal windows. In the left parasternal window, the long and short axis were acquired to analyze left chamber dimensions, right ventricle and pulmonary artery dimensions, and mitral, pulmonary and aortic valve function. The apical window allows the measurement of heart chamber dimensions and evaluation of systolic and diastolic parameters. It also allows Doppler assessment with detection and quantification of heart valve disturbances (regurgitation or stenosis). Different segments and walls of the left ventricle are visualized throughout all views. Finally, the ascending aorta, aortic arch, and descending aorta can be imaged through the suprasternal window. A combination of ultrasound imaging, Doppler flow and tissue Doppler assessment have been obtained to study cardiac morphology and function. This represents an important contribution to improve the assessment of cardiac function in adult rats with impact for research using these animal models.

A non-invasive protocol for transthoracic echocardiography assessment of cardiac anatomy and function for adult rats is presented in the current study. The heart valves, all four cardiac chambers and the ascending aorta, aortic arch and descending aorta are studied in detail.

Avaliação ecocardiográfica da anatomia e função cardíaca em ratos adultos

The use of experimental animal models has become crucial in cardiovascular science. Most studies using rodent models are focused on two-dimensional ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring apparatus and a motor to perform functional studies. These studies will allow measurement of cardiomyocyte stiffness (passive force) and its activation with different calcium (Ca2+)-containing solutions to determine, amongst others: maximum force development, myofilament Ca2+-sensitivity (pCa50), cooperativity (nHill) and the rate of force redevelopment (ktr). This method also enables determination of the effects of drugs acting directly on myofilaments and of the expression of exogenous recombinant proteins on both active and passive properties of cardiomyocytes. Clinically, skinned cardiomyocyte studies highlight the pathophysiology of many myocardial diseases and allow in vitro assessment of the impact of therapeutic interventions targeting the myofilaments. Altogether, this technique enables the clarification of cardiac pathophysiology by investigating correlations between in vitro and in vivo parameters in animal models and human tissue obtained during open heart or transplant surgery.

This protocol aims to describe step-by-step the technique of extraction and assessment of cardiac function using skinned cardiomyocytes. This methodology allows measurement and acutemodulation of myofilament function using small frozen biopsies that can be collected from different cardiac locations, from mice to men.

Avaliação in vitro da função cardíaca usando cardiomócitos esfolados

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...