Apesar das melhorias significativas na terapia, o número de pacientes que desenvolvem insuficiência cardíaca após infarto agudo do miocárdio ainda está aumentando. Para observar a transição de MI aguda para insuficiência cardíaca, precisamos de modelos animais reprodutíveis. Demonstramos um modelo de MI que é relativamente fácil, reproduzível e causa um mínimo de desconforto aos animais.
Além disso, o aparelho cardíaco isolado proporciona uma preparação altamente reprodutível que pode ser estudada de forma econômica e econômica. Em colaboração com outros grupos de pesquisa em todo o mundo, estamos usando essa técnica para esclarecer a segurança e eficácia de novas drogas e abordagens terapêuticas que melhoram o reparo e a função do miocárdio após o MI.Demonstração visual das etapas mais críticas deste protocolo, como a intubação ou o nível de oclusão lad pode ajudar a prevenir armadilhas comuns. A descrição passo a passo permite resultados reprodutíveis, mesmo que realizados por pesquisadores não treinados.
Milat Inci, técnico de laboratório, está realizando as medições cardíacas de trabalho, e Michael Koch, matemático e engenheiro eletrônico, está contribuindo na análise computacional. Depois de anestesiar o rato, entuba-o com um tubo de calibre 14 e ventilação controlada por volume com uma mistura de oxigênio, ar e isoflurano. Coloque o rato em uma mesa de operação aquecida em uma posição supina e fixe os membros dianteiros com fita.
Em seguida, coloque as sondas ECG subcutâneas nas extremidades do animal. Use um bisturi para fazer uma incisão iniciando dois milímetros parasternal no tórax esquerdo ao nível do terceiro espaço intercostal e continuando à linha axilar anterior ao nível do quinto espaço intercostal. Mova suavemente os músculos superficiais para que as costelas possam ser vistas.
Realize a toracotomia ao nível do quarto espaço intercostal e insira um retrátil para ganhar visibilidade do coração e do pulmão. Em seguida, abra cuidadosamente o pericárdio para evitar sangramento. Para induzir a reperfusão da isquemia durante um tempo definido, oclui a artéria descendente anterior esquerda com um torniquete.
Depois de romper o miocárdio, identifique a artéria esquerda e coloque a sutura de dois a três milímetros sob sua borda na margem ventral do coração. Reabra a artéria removendo o torniquete após 30 minutos. Alternativamente, a artéria pode ser permanentemente ocluída fazendo de seis a sete nós com uma sutura de 6-0 para fechar a ligadura.
Use uma sutura monofilament simples 4-0 para fechar o tórax com três suturas de botão único. Antes de apertar a última sutura, remova qualquer ar residual do tórax com uma seringa de 10 milímetros para evitar um pneumotórax. Substitua os músculos e desligue a anestesia volátil.
Em seguida, suturar a pele com uma sutura contínua 4-0. Administre um spray antisséptico para proteger contra infecção e mordida da sutura. Para anestesia profunda, administre uma mistura de xilazina quatro miligramas por quilograma de peso corporal e cetamina 100 miligramas por quilograma de peso corporal intraperitonealmente antes da ecocardiografia ou medidas cardíacas em funcionamento.
Para a ecocardiografia, coloque o rato em uma posição supina na bandeja de aquecimento e obtenha vistas parasterais de eixo curto da cavidade ventricular esquerda ao nível do músculo papilar. Em seguida, realize a ecocardiografia do modo M para medir a fração de ejeção ventricular esquerda e a morfologia. Para colher os órgãos, realize uma injeção de heparina intravenosa.
Em seguida, use um bisturi para fazer uma incisão de pele sob o xifoide e estendido paralelo às costelas de ambos os lados com uma tesoura. Corte as costelas na linha axilar dianteira e pegue o xifoide para levantar o peito. Remova as aderências dos tecidos anatômicos ou fibrosos rompendo cuidadosamente o tecido com dois pares de fórceps.
Pegue amostras de sangue da veia cava com uma seringa de cinco mililitros. Em seguida, realize a excisão de todo o coração no nível de entrada e saída. Mergulhe o coração no tampão krebs-henseleit gelado e monte-o no sistema cardíaco isolado eritrócito, cânulando a aorta.
Comece com o modo Langendorff. E depois de 15 minutos, mude para o modo coração de trabalho. Cannulate o átrio esquerdo através de uma veia pulmonar.
Em seguida, mude a direção do fluxo abrindo o clipe que oclui a cânula atrial que resulta em uma perfusão ao átrio esquerdo e um fluxo sanguíneo fisiológico no coração esquerdo. Registações hemodinâmicas por 20 minutos no modo cardíaco de trabalho, coletando gotas de sangue das coronárias com uma seringa de dois mililitros para medir o fluxo coronário a cada cinco minutos. Realize medições contínuas do fluxo atrial esquerdo e fluxo aórtico com uma sonda.
Se necessário, insira um cateter de alta fidelidade retrógradamente através da válvula aórtica no ventrículo esquerdo e meça a pressão sistólica ventricular esquerda. Conclua a análise calculando o volume do curso e o trabalho cardíaco externo, conforme descrito no manuscrito do texto. Foram realizados cortes histológicos e manchas para comprovar a reprodutibilidade do procedimento.
A cicatriz fibrosa em ANIMAIS MIR e tratados foi comparável com a formação de cicatrizes dos animais falsos, enquanto a diferença na fibrose entre os grupos sham e MIR foi significativa. Além disso, os animais tratados com ISQUêmicos remotos por condicionamento apresentaram significativa redução da fibrose em comparação com os animais tratados com MIR. A echografia in vivo foi utilizada para medir a fração de ejeção, diâmetros lv end-diastólicos e sistólicos finais.
A análise mostrou uma redução significativa da função cardíaca devido ao tratamento de MIR, mas os parâmetros hemodinâmicos foram preservados pelo RIPerc. Os dados hemodinâmicos ex vivo mostraram a eficácia do procedimento, pois o grupo MIR apresentou quedas significativas na pressão sistólica da LV, saída cardíaca, volume de derrame e trabalho cardíaco externo. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que o posicionamento adequado da sutura oclusante e a montagem do coração para o aparelho cardíaco isolado aumentam significativamente a chance de obter resultados reprodutíveis.
Existem muitas maneiras de avaliar a função cardíaca no animal intacto através de instrumentação aguda ou crônica ou mesmo não invasivamente por ecocardiografia ou ressonância magnética. No entanto, o coração isolado reperfused continua sendo uma ferramenta investigativa proeminente e oferece uma série de vantagens únicas.
