Name: chronic constriction injury of the rat's infraorbital nerve (ion-cci) to study trigeminal neuropathic pain
Uploaded: 2015-09-21T15:45:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve IoN-CCI to Study Trigeminal Neuropathic Pain at JoVE.com

The authors acknowledge the work that was done by the first author of the IoN-CCI model, Bart Vos&#8224;.

Declaração de ética: Os animais são tratados e cuidados de acordo com as orientações do Comité de Investigação e Questões Éticas da IASP 11. O protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética institucional. 1. Temas <ol><li> Utilizar ratos machos Sprague-Dawley (250-300 g, à chegada). </li><li> Casa ratos nas gaiolas de fundo sólido em uma sala de colônia com uma umidade de 40-60% e um IR de 21 ± 1 ° C. </li><li> Faça água e alimentos disponíveis no libitum. </li><li> Mantenha ratos sob uma invertida 00:12 hr escuro / ciclo de luz (luzes acesas às 20 h). </li></ol> 2. Cirurgia <ol><li> Por rato, preparar duas partes de ligadura intestino crómico (5-0) de aproximadamente 6 cm de comprimento e colocá-los em solução salina estéril para evitar a secagem e a tornar-se rígida e quebradiça. </li><li> Anestesiar os animais com pentobarbital (60 mg / kg, ip) e trata-se com atropina (0,1 mg / kg, ip). Monitorar o nível de anestesia, estendendo uma perna e pinching a teia de pele entre os dedos com uma unha para garantir a pressão adequada é aplicada. Certifique-se de que o animal não flexionar seu membro. Se necessário, administrar pentobarbital adicional. </li><li> Raspar a cabeça do rato de modo que uma linha média do couro cabeludo incisão pode ser feita de, aproximadamente, 25 mm, com distâncias iguais anterior e posterior para o centro dos olhos. </li><li> Fixe a cabeça do rato em um quadro estereotáxico ou não fixar a cabeça do rato. Colocar o rato em uma almofada aquecida para manter a temperatura corporal. </li><li> Aplicar pomada oftálmica em ambos os olhos para evitar danos causados ​​por secagem. </li><li> Esfregue a área cabeça raspada com álcool, em seguida, betadine. </li><li> Faça uma linha média do couro cabeludo incisão, expondo o crânio e do osso nasal. </li><li> Use um microscópio de operação para executar passos 2,9-2,16. </li><li> Dissecar a borda da órbita livre, formado pelo maxilar, frontal, lacrimal e ossos zigomática, utilizando um cotonete e um par de fórceps Dumont. Use o cotonete para assimak-se sangue de possíveis sangramentos. </li><li> Para dar acesso à ION, desviar suavemente o conteúdo orbital com um cotonete de algodão de precisão, tomando cuidado para não esticar o nervo etmoidal anterior, que atravessa superior ao íon. Dissecar o íon livre do tecido conjuntivo circundante, usando um cotonete precisão e um par de fórceps Dumont usando um movimento de propagação. Use o cotonete para absorver o sangue de possíveis sangramentos. </li><li> Para realizar uma ligação, empurrar uma extremidade de um único pedaço de intestino crômico para baixo ao longo do osso frontal, medial à ION e avançar alguns milímetros paralelo e inferior ao do íon. A ligadura é agora realizada no local entre o íon e do osso frontal. </li><li> Deslize a ponta de uma de 45 graus fórceps Dumont em ângulo sob o íon para colocá-lo em estreita proximidade com a ligadura. Suavemente retrair o ION lateralmente para revelar a ligadura e ponta da pinça. Segure a ligadura com a pinça e retirar a pinça lateralmente debaixo da ION. </li&gt; <li> Puxe a ligadura da cavidade orbital até que ambas as extremidades da ligadura são mais ou menos equidistantes da ION. </li><li> Faça um &quot;nó corrediço&quot; a partir das duas extremidades da ligadura para permitir o controle perfeito sobre o grau de constrição e deslize o nó contra o ION. Deslize o nó adicional para contrair o Ion de modo que o diâmetro do nervo é reduzido por uma quantidade apenas perceptível. Adicione um nó normais no topo do nó de deslizamento de modo a que a quantidade de constrição permanece constante (isto é, para impedir que o nó de deslizamento fenda). </li><li> Corte as ligaduras de deixar cerca de 2 mm de extremidades livres a partir do nó. </li><li> Repita o mesmo procedimento (etapas 2,11-2,15) para fazer uma segunda ligadura 2 de distância do primeiro. </li><li> Para a cirurgia sham, execute os passos 2,2-2,10. </li><li> Fechar a incisão no couro cabeludo utilizando suturas de poliéster (4-0) e permitir que o rato para recuperar numa almofada aquecida. Não deixe o animal sem supervisão até que ele recuperou contras suficientesciousness para manter decúbito esternal e não devolver o animal para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. </li><li> Para evitar efeitos analgésicos de preferência sobre o desenvolvimento da dor neuropática, não administrar analgesia para dor pós-cirúrgica. </li></ol> 3. Procedimento de Teste Comportamental <ol><li> Permitir ratos para se aclimatar por pelo menos 8 dias para as condições de habitação antes do teste pré-operatório. </li><li> Habituar ratos para o procedimento de teste pelo menos uma vez por dia durante três dias antes do teste pré-operatório. </li><li> Conduta testes numa sala escura, com luz fornecida por uma luz vermelha de 60 W suspensa lâmpada 1 m acima do centro da área de teste de iluminação do centro, mas deixando a circunferência fraca e o resto da sala escura. </li><li> Verifique se há ruído de fundo suficiente para diminuir a interferência de estimulação auditiva súbita. Se necessário, forneça ruído branco. </li><li> Observação de comportamento de limpeza rosto <ol><li> TRANSPORTES um único rato da colônia para a sala de teste em uma gaiola de plástico coberto, sem roupa de cama. Nota: O ideal é que esta deve ser uma curta viagem com estímulos externos mínimas. </li><li> Coloque o rato em uma coberta, gaiola de plástico transparente, sem roupa de cama (cxlxa: 24 cm x 14 cm x 17 cm) com um backup espelhado na frente de uma câmera de vídeo. </li><li> Adicione uma gravação de 10 minutos o comportamento do animal. Durante a gravação, verifique se o experimentador não está presente na sala de prova. </li><li> Limpar a gaiola de observação antes de colocar o próximo animal. </li><li> Certifique-se o comportamento registrado é analisada por um experimentador que é cego à condição experimental do rato. </li><li> Faça um registro de cada episódio rosto aliciamento durante os 10 min de gravação. Nota: aliciamento de rosto está definido como padrões de movimento em que as patas dianteiras são trazidos em contato com áreas faciais. </li><li> Faça uma distinção entre dois tipos de comportamento rosto grooming. Se uma sequência não é antecedida nem seguida decorpo aliciamento (ou seja, a preparação de uma área do corpo que não seja a face), classificar o episódio como isolado rosto grooming. Se aliciamento corpo é realizada imediatamente antes ou após rosto grooming, classificar o episódio como aliciamento rosto durante a preparação do corpo. </li><li> Determinar o número de episódios rosto grooming. <ol><li> Categorizar um período de tempo entre as acções cara aliciamento que não exceda 4 s como um espaço intra-episódio (ou seja, uma pausa entre as acções cara aliciamento dentro de um único episódio). </li><li> Categorizar um período de tempo entre preparação ações cara que exceda 4 s como um espaço inter-episódio (ou seja, uma interrupção completa de ações cara preparação entre dois episódios). </li></ol></li></ol></li><li> Testes de estimulação mecânica <ol><li> Ratos de transporte em grupos de até 6 animais da colónia para a sala de teste em uma gaiola coberta com roupa de cama. Certifique-se de que esta é uma viagem curta com estímulos externos mínimas. </li><li> Coloque oratos individualmente em gaiolas de plástico transparente com roupa de cama (CxLxA: 24 cm x 14 cm x 17 cm) com uma tampa articulada de modo que possa ser facilmente aberta e fechada. </li><li> Usar uma série graduada de cinco filamentos de von Frey. Nota: A força necessária para dobrar os cabelos é de 0,015 g, 0,127 g, 0,217 g, 0,745 g e 2.150 g. </li><li> Habituam os ratos para a gaiola de observação e movimentos que alcançam para 10 min. A cada 30 seg, abrir a tampa e suavemente tocar a parede da gaiola com uma vareta de plástico. </li><li> Quando o animal está em um sniffing / nenhum estado locomoção (ou seja, com quatro patas colocado no chão, nem em movimento nem congelação, mas exibindo sniffing comportamento), aplique a primeira cabelos von Frey no território Ion perto do centro da almofada de vibrissas , na pele peluda torno do vibrissas mystacial. </li><li> Conseguir a resposta do animal ao estímulo de pertencer a uma das seguintes categorias de resposta 4. <ol><li> Categorizar uma completa falta de resposta comoescore 0. </li><li> Categorizar um estímulo detecção (ou seja, o rato vira a cabeça em direção ao objeto estimulante eo objeto estímulo é, então, explorada) como uma pontuação. </li><li> Categorizar uma reação de retirada (ie., O rato vira a cabeça lentamente ou puxa-o rapidamente para trás quando o estímulo é aplicado, por vezes, um único rosto limpe ipsilateral à área estimulada ocorre) como marcador em 2. </li><li> Categorizar um escape / resposta ataque (ie., O rato evita ainda mais contato com o objeto de estímulo, de forma passiva, movendo seu corpo para longe do objeto estimular a assumir uma posição de agachamento contra a parede da jaula, ou ativamente, atacando o objeto estímulo, tornando- mordendo e agarrando movimentos) como marcador em 3. </li><li> Categorizar rosto assimétrico aliciamento (ou seja, o rato exibe uma série ininterrupta de pelo menos três acidentes vasculares cerebrais face-lavagem voltadas para a área facial estimulada) como nota 4. </li><li> Dentro de cada animal, aplicar Stimuli em uma ordem crescente de intensidade. Depois de uma intensidade do estímulo foi aplicado para um lado, aplicá-lo para o outro lado antes de passar para a próxima intensidade do estímulo. Aleatória a ordem em que os lados ipsilateral e contralateral são estimulados. Note-se que o animal deve estar em um sniffing / nenhum estado locomoção antes de cada estimulação. </li></ol></li></ol></li></ol>

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	<li>Jensen, T. S., Gottrup, H., Sindrup, S. H., Bach, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+picture+of+neuropathic+pain.">The clinical picture of neuropathic pain.</a> Eur J Pharmacol. 429 (1-3), 1-11 (2001).</li><li>Meyer Rosberg, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+a+multidimensional+burden+for+patients.">Neuropathic pain a multidimensional burden for patients.</a> Eur J Pain. 5 (4), 379-389 (2001).</li><li>Meyer Rosberg, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+SF+36+and+Nottingham+Health+Profile+in+patients+with+chronic+neuropathic+pain.">Comparison of the SF 36 and Nottingham Health Profile in patients with chronic neuropathic pain.</a> Eur J Pain. 5 (4), 391-403 (2001).</li><li>Vos, B. P., Strassman, A. M., Maciewicz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+evidence+of+trigeminal+neuropathic+pain+following+chronic+constriction+injury+to+the+rats+infraorbital+nerve.">Behavioral evidence of trigeminal neuropathic pain following chronic constriction injury to the rats infraorbital nerve.</a> J Neurosci. 14, 2708-2723 (1994).</li><li>Clavelou, P., Pajot, J., Dallel, R., Raboisson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+the+formalin+test+to+the+study+of+orofacial+pain.">Application of the formalin test to the study of orofacial pain.</a> Neurosci Lett. 103, 349-353 (1989).</li><li>Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+assessment+of+facial+pain+in+rats+face+grooming+patterns+after+painful+and+non-painful+sensory+disturbances+in+the+territory+of+the+rats+infraorbital+nerve.">Behavioral assessment of facial pain in rats face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rats infraorbital nerve.</a> Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).</li><li>Deseure, K. R., Adriaensen, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+two+types+of+behavioral+variables+of+non+evoked+facial+pain+after+chronic+constriction+injury+to+the+rat+infraorbital+nerve.">Comparison between two types of behavioral variables of non evoked facial pain after chronic constriction injury to the rat infraorbital nerve.</a> Comp Med. 52 (1), 44-49 (2002).</li><li>Deseure, K., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonevoked+facial+pain+in+rats+following+infraorbital+nerve+injury+a+parametric+analysis.">Nonevoked facial pain in rats following infraorbital nerve injury a parametric analysis.</a> Physiol Behav. 81 (4), 595-604 (2004).</li><li>Deseure, K., Hans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+study+of+non+evoked+orofacial+pain+following+different+types+of+infraorbital+nerve+injury+in+rats.">Behavioral study of non evoked orofacial pain following different types of infraorbital nerve injury in rats.</a> Physiol Behav. 138, 292-296 (2015).</li><li>Deseure, K., Koek, W., Adriaensen, H., Colpaert, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+administration+of+the+5+hydroxytryptamine1A+agonist+(3-Chloro-4-fluoro-phenyl)-[4-fluoro-4-[[(5-methyl-pyridin-2-ylmethyl)+-amino]-methyl]piperidin-1-yl]-methadone+(F+13640)+attenuates+allodynia+like+behavior+in+a+rat+model+of+trigeminal+neuropathic+pain.">Continuous administration of the 5 hydroxytryptamine1A agonist (3-Chloro-4-fluoro-phenyl)-[4-fluoro-4-[[(5-methyl-pyridin-2-ylmethyl) -amino]-methyl]piperidin-1-yl]-methadone (F 13640) attenuates allodynia like behavior in a rat model of trigeminal neuropathic pain.</a> J Pharmacol Exp Ther. 306 (2), 505-514 (2003).</li><li>Zimmerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethical+Guidelines+for+investigations+of+experimental+pain+in+conscious+animals.">Ethical Guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals.</a> Pain. 16, 109-110 (1983).</li><li>Mogil, J. S., Crager, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+should+we+be+measuring+in+behavioral+studies+of+chronic+pain+in+animals.">What should we be measuring in behavioral studies of chronic pain in animals.</a> Pain. 112 (1-2), 12-15 (2004).</li><li>Backonja, M. M., Stacey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+symptoms+relative+to+overall+pain+rating.">Neuropathic pain symptoms relative to overall pain rating.</a> J Pain. 5 (9), 491-497 (2004).</li><li>Imamura, Y., Kawamoto, H., Nakanishi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+heat+hyperalgesia+in+an+experimental+trigeminal+neuropathy+in+rats.">Characterization of heat hyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats.</a> Exp Brain Res. 116, 97-103 (1997).</li><li>Chichorro, J. G., Zampronio, A. R., Souza, G. E., Rae, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orofacial+cold+hyperalgesia+due+to+infraorbital+nerve+constriction+injury+in+rats+reversal+by+endothelin+receptor+antagonists+but+not+non+steroidal+anti+inflammatory+drugs.">Orofacial cold hyperalgesia due to infraorbital nerve constriction injury in rats reversal by endothelin receptor antagonists but not non steroidal anti inflammatory drugs.</a> Pain. 123 (1-2), 64-74 (2006).</li><li>Kramer, P. R., Bellinger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meal+Duration+as+a+Measure+of+Orofacial+Nociceptive+Responses+in+Rodents.">Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents.</a> J Vis Exp. (83), e50745 (2014).</li><li>Rossi, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+bilateral+trigeminal+constriction+injury+using+an+operant+facial+pain+assay.">Characterization of bilateral trigeminal constriction injury using an operant facial pain assay.</a> Neuroscience. 224, 294-306 (2012).</li><li>Anderson, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+Operant+Orofacial+Pain+Assessment+Device+(OPAD)+to+Measure+Changes+in+Nociceptive+Behavior.">Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to Measure Changes in Nociceptive Behavior.</a> J Vis Exp. (76), 50336 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

O aspecto mais interessante do modelo de íon-CCI é que ele fornece uma medida única de (neuropática) dor espontânea, não evocado. A maioria dos estudos com animais de dor neuropática, utilizando modelos do nervo espinhal, abordar exclusivamente comportamentos nocifensive (por exemplo., Vocalização e respostas de retirada), reflectindo a hipersensibilidade a estímulos mecânicos ou térmicos 12. No entanto, a queixa clínica principal em pacientes é dor em curso, não hiperalgesia ou alodin...

A lesão dos nervos somatossensoriais na maioria das vezes conduz à perda de sensibilidade. Ele não é muito bem compreendido por que e como, em alguns casos, danos nos nervos periféricos leva à dor crônica. Como resultado, neuropatias dolorosas continuam a ser um desafio para tratar a condição 1 e resultam em reduções substanciais na qualidade de vida dos pacientes 2-3. Os modelos animais são uma ferramenta importante para examinar a eficácia dos medicamentos existentes e recentemente desenvolvidas e identificar os mecanismos fisiopatológicos envolvidos no desenvolvimento e manutenção da dor neuropática. Entre os principais desafios para a investigação dor translacional é identificar e mensurar a dor espontânea em animais (ou seja, fisiológica, manifestações comportamentais ou de outros que indicam a presença de dor em animais que não estão sendo desafiados com estímulos que são agudamente sobrepostas na condição basal do sujeito sondando ). O objetivo geral deste procedimento é o de induzir uma cirurgicamenteA lesão do nervo infra-orbital em um rato que leva ao desenvolvimento de ambos espontânea e evocada nocifensive comportamento que pode ser usado para estudar os mecanismos envolvidos na dor neuropática trigeminal e o seu tratamento. Dirigido, isolado rosto aliciamento é uma medida única de dor neuropática espontânea em ratos. Após lesão crônica constrição (CCI) do nervo infra-orbital (Ion), os ratos apresentam alterações no comportamento espontâneo e em resposta à estimulação tátil que são indicativos de dor persistente e alodinia mecânica 4. Na sequência de íon-CCI, ratos mostram uma atividade aliciamento rosto aumentou e assimétrica, ou seja, com a lavagem da cara Strokes direcionado principalmente para o território Ion com lesão do nervo. Em contraste com a estimulação nociva da face (por exemplo, a injecção de formalina) 5, não dolorosa distúrbios sensoriais (isto é, corte vibrissas unilateral do nervo infra-orbital do bloqueio anestésico, a aplicação de óleo mineral em vibriSSAE) não, ou apenas muito brevemente (ou seja, os primeiros minutos após o início) induzir uma alteração significativa no comportamento de limpeza cara 6. Concluiu-se que esta preparação anormal depois de íon-CCI é uma manifestação comportamental de espontâneas, sensações fortemente aversivos no território do nervo lesionado. Esse comportamento em ratos íon-CCI carrega forte semelhança com dor espontânea observada em pacientes. Mais estudos identificaram uma diferença importante entre comportamento de limpeza rosto que faz parte de um comportamento de limpeza corpo mais geral (ou seja, &quot;aliciamento rosto durante corpo aliciamento&quot;), que permanece em grande parte afetada pelo íon-CCI, eo rosto nocifensive preparação que não é nem precedida nem seguida de corpo aliciamento (ie, &quot;isolado rosto aliciamento&quot;), que é significativamente aumentada após íon-CCI 7-9. Farmacologicamente, preparação do rosto durante a preparação do corpo constitui uma medição de controle excelente para efeitos não específicos de droga ( <em&gt; por exemplo, sedação) que pode prejudicar a função motora. Movimentos dos membros superiores durante os dois tipos de rosto aliciamento são exatamente os mesmos. Na sequência de íon-CCI, os ratos também apresentam mudanças em resposta à estimulação tátil que são indicativos de alodinia mecânica 4, 10. Durante a primeira semana (s) depois de íon-CCI, os ratos já não respondem ao tátil leve ou moderada (ie, von Frey estímulos). Este hiporeactividade é então substituído abruptamente por uma hiper-reatividade extrema em que até mesmo muito fracas intensidades de estímulo provocar comportamento nocifensive. O início da hiper-responsividade pode variar entre ratos, mas a maioria dos ratos se tornaram hiperresponsivas após três a quatro semanas de pós-operatório.

<table><tbody><tr><td>Chromic catgut</td><td>Dynek&amp;nbsp;</td><td>CG504</td><td></td></tr><tr><td>Nembutal&amp;nbsp; (pentobarbital)</td><td>Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atropine</td><td>Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clippers for small animals - Favorita II</td><td>Aesculap</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic instrument</td><td>Stoelting</td><td>51600</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment (Liposic)</td><td>Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homeothermic monitor system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PY8 50-7221-F</td><td></td></tr><tr><td>Cotton applicator</td><td>Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Precision cotton swab</td><td>Qosina</td><td>10225</td><td></td></tr><tr><td>Operation microscope</td><td>Kaps</td><td>SOM 62</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forceps - Micro-blunted tips (#5/45)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - blunt tips</td><td>Fine Science Tools</td><td>14574-09</td><td></td></tr><tr><td>Polyester sutures - Mersilene (4-0)</td><td>Ethicon</td><td>R871H</td><td></td></tr><tr><td>Digital video camera</td><td>Sony</td><td>HDR-CX330E</td><td></td></tr><tr><td>Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer kit</td><td>Stoelting</td><td>58011</td><td></td></tr></tbody></table>

chronic constriction injury of the rat's infraorbital nerve (ion-cci) to study trigeminal neuropathic pain

Os modelos animais são importantes ferramentas para estudar a fisiopatologia e farmacologia da dor neuropática. Este manuscrito descreve os procedimentos cirúrgicos e comportamentais para estudar a dor neuropática trigeminal em ratos. Para atender a especificidade de trigeminais síndromes de dor neuropática, o nervo infra-orbital (ION) é submetido a uma lesão por constrição crónica (CCI) do nervo do ligando frouxamente. Uma abordagem intra-orbital é apresentado aqui para expor e ligar o íon na cavidade orbital. Depois de íon de ligação, os ratos apresentam alterações no comportamento espontâneo e em resposta a von Frey cabelo estimulação que são indicativos de dor persistente e alodinia mecânica. Duas fases pode ser definida no desenvolvimento das mudanças de comportamento. Durante a primeira semana seguinte íon-CCI (fase 1), ratos mostram uma atividade aliciamento rosto aumentou e assimétrica, ou seja, com a lavagem da cara Strokes direcionado principalmente para o território Ion com lesão do nervo. É feita uma distinção entre o rosto grooming comportamento que faz parte de um comportamento corpo preparação mais geral, que permanece em grande parte afetada pelo íon-CCI, e cara preparação que não é antecedida nem seguida de aliciamento corpo, o que é significativamente aumentada após íon-CCI. Durante este período, a capacidade de resposta à estimulação mecânica do território de iões é reduzido. Este hiporeactividade é abruptamente substituído por uma hiper-reatividade extrema pela qual ainda muito fracas intensidades de estímulo provocar comportamento nocifensive (fase 2). As semelhanças fenomenológicas entre estas alterações comportamentais e relataram sinais de dor facial (ou seja, as respostas ao estímulo nocivo da face) sugerem a presença de disestesia / parestesia e alodinia mecânica no território Ion ligado.

Ratos íon-CCI mostram um forte aumento pós-operatório na quantidade de tempo gasto no rosto isolado aliciamento (Figura 1). O aumento picos no final da primeira semana de pós-operatório e em seguida, diminui durante as semanas seguintes. A maioria dos estudos recentes descobriram rosto aliciamento para ser significativamente aumentada por até três semanas. Cara comportamento de limpeza em ratos sujeitos a operação simulada é mais ou menos inalterados. Ratos íon-CC...

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Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve IoN-CCI to Study Trigeminal Neuropathic Pain

This manuscript describes a rodent model to study trigeminal neuropathic pain. The methods described include surgical procedures to perform a chronic constriction injury of the rat&#8217;s infraorbital nerve and the post-surgical behavioral tests to measure the changes in spontaneous and evoked behavior that are indicative of persistent pain and allodynia.

Crônica lesão por constrição de Infraorbital Nerve do Rato (Ion-CCI) para o Estudo do trigêmeo Dor neuropática

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral ...

chronic-constriction-injury-rat-s-infraorbital-nerve-ion-cci-to-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain

19.4K visualizações.  University of Antwerp. This manuscript describes a rodent model to study trigeminal neuropathic pain. The methods described include surgical procedures to perform a chronic constriction injury of the rat’s infraorbital nerve and the post-surgical behavioral tests to measure the changes in spontaneous and evoked behavior that are indicative of persistent pain and allodynia. 

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Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Medicina

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

Poupado da lesão do nervo Model (SNI) de alodinia mecânica induzida em camundongos

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim) for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. It has been extensively used in various clinical settings. Based upon recent discoveries related to the systemic effects of voluntary breathing and intrinsic physiological interactions among systems during voluntary breathing, a new EStim protocol, Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim), has been developed to augment the effects of electrical stimulation. In BreEStim, a single-pulse electrical stimulus is triggered and delivered to the target area when the airflow rate of an isolated voluntary inspiration reaches the threshold. BreEStim integrates intrinsic physiological interactions that are activated during voluntary breathing and has demonstrated excellent clinical efficacy. Two representative applications of BreEStim are reported with detailed protocols: management of post-stroke finger flexor spasticity and neuropathic pain in spinal cord injury.

Breathing-controlled Electrical Stimulation BreEStim for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

The purpose is to present a new method, breathing-control electrical stimulation (BreEStim) for management of neuropathic pain and spasticity.

Respiração controlada Estimulação Elétrica (BreEStim) para tratamento de dor neuropática e espasticidade

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. ...

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical condition. However, the underlying mechanisms of CRPS-I have yet to be revealed. It is known that ischemia/reperfusion is one of the leading factors that causes CRPS-I. By means of prolonged ischemia and reperfusion of the hind limb, the rat chronic post-ischemia pain (CPIP) model has been established to mimic CRPS-I. The CPIP model has become a well-recognized animal model for studying the mechanisms of CRPS-I. This protocol describes the detailed procedures involved in the establishment of the rat model of CPIP, including anesthesia, followed by ischemia/reperfusion of the hind limb. Characteristics of the rat CPIP model are further evaluated by measuring the mechanical and thermal hypersensitivities of the hind limb as well as the nocifensive responses to acute capsaicin injection. The rat CPIP model exhibits several CRPS-I-like manifestations, including hind limb edema and hyperemia in the early stage after establishment, persistent thermal and mechanical hypersensitivities, and increased nocifensive responses to acute capsaicin injection. These characteristics render it a suitable animal model for further investigation of the mechanisms involved in CRPS-I.

Provided here is a protocol that details steps to establish an animal model of chronic post-ischemia pain (CPIP). This is a well-recognized model mimicking human complex regional pain syndrome type-I. Mechanical and thermal hypersensitivities are further evaluated, as well as capsaicin-induced nocifensive behaviors observed in the CPIP rat model.

Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Comportamento

Assessment of Nerve Injury-Induced Mechanical Hypersensitivity in Rats Using an Orofacial Operant Pain Assay

Pain has sensory and affective components. Unlike traditional, reflex-based pain assays, operant pain assays can produce more clinically relevant results by addressing the cognitive and motivational aspects of pain in rodents. This paper presents a protocol for assessing mechanical hypersensitivity following chronic constriction injury of the infraorbital nerves (CCI-ION) in rats using an orofacial operant pain system. Before CCI-ION surgery, rats were trained in an orofacial pain assessment device (OPAD) to drink sweetened condensed milk while making facial contact with the metal spiked bars and lick-tube.
In this assay, rats can choose between receiving milk as a positive reinforcer or escaping an aversive mechanical stimulus that is produced by a vertical row of small pyramid-shaped spikes on each side of the reward access hole. Following 2 weeks of training in the OPAD and before the CCI-ION surgery, baseline mechanical sensitivity data were recorded for 5 days for each rat during a 10 min testing session. During a session, the operant system automatically records the number of reward bottle activations (licks) and facial contacts, contact duration, and latency to the first lick, among other measures.
Following baseline measurements, rats underwent either CCI-ION or sham surgery. In this protocol, mechanical hypersensitivity was quantified by measuring the number of licks, latency to the first lick, the number of contacts, and the ratio of licks to facial contacts (L/F). The data showed that CCI-ION resulted in a significant decrease in the number of licks and the L/F ratio and an increase in the latency to the first lick, indicating mechanical hypersensitivity. These data support the use of operant-based pain assays to assess mechanical pain sensitivity in preclinical pain research.

This protocol describes the assessment of mechanical hypersensitivity in a rat model of neuropathic orofacial pain using an operant-based orofacial pain assessment device.

Avaliação da hipersensibilidade mecânica induzida por lesão nervosa em ratos usando um ensaio de dor operante orofacial

Pain has sensory and affective components. Unlike traditional, reflex-based pain assays, operant pain assays can produce more clinically relevant results ...

Visualização in vivo do gânglio trigêmeo de ratos com indicadores de cálcio

In-Vivo Calcium Imaging of Sensory Neurons in the Rat Trigeminal Ganglion

Genetically encoded calcium indicators (GECIs) enable imaging techniques to monitor changes in intracellular calcium in targeted cell populations. Their large signal-to-noise ratio makes GECIs a powerful tool for detecting stimulus-evoked activity in sensory neurons. GECIs facilitate population-level analysis of stimulus encoding with the number of neurons that can be studied simultaneously. This population encoding is most appropriately done in vivo. Dorsal root ganglia (DRG), which house the soma of sensory neurons innervating somatic and visceral structures below the neck, are used most extensively for in vivo imaging because these structures are accessed relatively easily. More recently, this technique was used in mice to study sensory neurons in the trigeminal ganglion (TG) that innervate oral and craniofacial structures. There are many reasons to study TG in addition to DRG, including the long list of pain syndromes specific to oral and craniofacial structures that appear to reflect changes in sensory neuron activity, such as trigeminal neuralgia. Mice are used most extensively in the study of DRG and TG neurons because of the availability of genetic tools. However, with differences in size, ease of handling, and potentially important species differences, there are reasons to study rat rather than mouse TG neurons. Thus, we developed an approach for imaging rat TG neurons in vivo. We injected neonatal pups (p2) intraperitoneally with an AAV encoding GCaMP6s, resulting in &gt;90% infection of both TG and DRG neurons. TG was visualized in the adult following craniotomy and decortication, and changes in GCaMP6s fluorescence were monitored in TG neurons following stimulation of mandibular and maxillary regions of the face. We confirmed that increases in fluorescence were stimulus-evoked with peripheral nerve block. While this approach has many potential uses, we are using it to characterize the subpopulation(s) of TG neurons changed following peripheral nerve injury.

Autor em destaque: Explorando os mecanismos periféricos da dor neuropática na lesão do nervo trigêmeo 

Genetically encoded calcium indicators (GECI) enable a robust, population-level analysis of sensory neuron signaling. Here, we have developed a novel approach that allows for in vivo GECI visualization of rat trigeminal ganglia neuron activity.

In-Vivo Imagem de cálcio de neurônios sensoriais no gânglio trigeminal de ratos

Genetically encoded calcium indicators (GECIs) enable imaging techniques to monitor changes in intracellular calcium in targeted cell populations. Their ...

Neurociência

<meta charset="utf8"></head><body>Estabelecendo o modelo de camundongo para dor neuropática do trigêmeo

Chronic Constriction Injury of the Distal Infraorbital Nerve (DIoN-CCI) in Mice to Study Trigeminal Neuropathic Pain

Animal models remain necessary tools to study neuropathic pain. This manuscript describes the distal infraorbital nerve chronic constriction injury (DIoN-CCI) model to study trigeminal neuropathic pain in mice. This includes the surgical procedures to perform the chronic constriction injury and the postoperative behavioral tests to evaluate the changes in spontaneous and evoked behavior that are signs of ongoing pain and mechanical allodynia. The methods and behavioral readouts are similar to the infraorbital nerve chronic constriction injury (IoN-CCI) model in rats. However, important changes are necessary for the adaptation of the IoN-CCI model to mice. First, the intra-orbital approach is replaced by a more rostral approach with an incision between the eye and the whisker pad. The IoN is thus ligated distally outside the orbital cavity. Secondly, due to the higher locomotor activity in mice, allowing rats to move freely in small cages is replaced by placing mice in custom-designed and constructed restraining devices. After DIoN ligation, mice exhibit changes in spontaneous behavior and in response to von Frey hair stimulation that are similar to those in IoN-CCI rats, i.e., increased directed face grooming and hyperresponsiveness to von Frey hair stimulation of the IoN territory.

<meta charset="utf8"></head><body>Autor em destaque: Utilizando a ligadura do nervo infraorbital em camundongos para investigar a dor neuropática do trigêmeo e estratégias de tratamento

Chronic constriction injury of the distal infraorbital nerve in mice induces changes in spontaneous behavior (increased face grooming activity) and nocifensive behavior in response to tactile stimulation (hyperresponsiveness to von Frey hair stimulation) that are signs of ongoing pain and allodynia and serves as a model for trigeminal neuropathic pain.

Lesão por Constrição Crônica do Nervo Infraorbital Distal (DIoN-CCI) em Camundongos para Estudo da Dor Neuropática do Trigêmeo

Animal models remain necessary tools to study neuropathic pain. This manuscript describes the distal infraorbital nerve chronic constriction injury ...

Crônica lesão por constrição de Infraorbital Nerve do Rato (Ion-CCI) para o Estudo do trigêmeo Dor neuropática

Resumo

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Capítulos neste vídeo

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Poupado da lesão do nervo Model (SNI) de alodinia mecânica induzida em camundongos

Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

Respiração controlada Estimulação Elétrica (BreEStim) para tratamento de dor neuropática e espasticidade

Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Avaliação da hipersensibilidade mecânica induzida por lesão nervosa em ratos usando um ensaio de dor operante orofacial

In-Vivo Imagem de cálcio de neurônios sensoriais no gânglio trigeminal de ratos

In-Vivo Imagem de cálcio de neurônios sensoriais no gânglio trigeminal de ratos

In-Vivo Imagem de cálcio de neurônios sensoriais no gânglio trigeminal de ratos

Lesão por Constrição Crônica do Nervo Infraorbital Distal (DIoN-CCI) em Camundongos para Estudo da Dor Neuropática do Trigêmeo