O objetivo geral deste paradigma é avaliar a eficácia de uma potencial droga anti-álcool usando modelos de roedores de transtorno do uso de álcool. O transtorno do uso de álcool representa uma grande crise de saúde pública. Os tratamentos atuais são ineficazes e a pesquisa pré-clínica em curso é necessária.
Nosso protocolo nos permite avaliar a segurança e a utilidade de um tratamento potencial, bem como dar uma olhada na neurobiologia subjacente do próprio transtorno. Comece o procedimento aquecendo uma faca de utilidade no queimador Bunsen. Usando esta faca, corte cerca de uma polegada das extremidades superior e inferior de uma pipeta sorológica de 18 mililitros de plástico.
Em seguida, aqueça a pipeta sob uma arma de calor. Insira o tubo de sipper de rolamento de esferas na extremidade inferior da pipeta. Em seguida, usando uma pistola de envoltório de envoltório comercialmente disponível, sele o tubo de sipper no lugar com envoltório de envoltório de encolhimento.
Tampe a outra abertura com uma rolha de silicone. Para a habituação animal, na chegada, abrigam cada rato na gaiola padrão de policarbonato polisulfone com roupa de cama, comida e água e um topo de gaiola de grade metálica. Começando no quarto dia da única aclimatação de habitação de uma semana, meça e registre os pesos diários do corpo e dos alimentos do rato.
Meça a ingestão de água usando as gravuras ao lado da garrafa invertida, para registrar o ponto mais alto do menisco. Uma vez que a ingestão de água tenha estabilizado para mais ou menos 10% de variabilidade a partir da média dos últimos três dias, comece o acesso ao etanol com TBC ou DID. Para conduzir a TBS, prepare a solução de 10% de etanol em 1.000 mililitros adicionando 105,3 mililitros de 190 etanol de grão à prova de 894,7 mililitros de água, em seguida, sacudi-lo completamente.
Dado que o etanol evapora rapidamente, substitua a solução duas vezes por semana. No primeiro dia da TBC, em cada gaiola, esvazie uma das duas garrafas de água e encha-a até a borda com a solução de etanol recém-preparada. Dado que o etanol e a água são difíceis de serem distinguidos visualmente, rotule claramente as garrafas com seus conteúdos correspondentes.
Adicione mais solução à garrafa de água conforme necessário. Em seguida, coloque a garrafa de volta na gaiola, certificando-se de que a tampa está fechada com segurança e desprovida de quaisquer bolhas de ar ou vazamentos do bico. Remova quaisquer bolhas de ar simplesmente tocando na garrafa para que o ar possa escapar da garrafa.
Alternar a posição da garrafa a cada dois dias quanto a corrigir as influências relacionadas à preferência do local condicionado na atividade de beber. Recorde do nível de consumo de etanol e analise a taxa de consumo e preferência de 10% do etanol. Assim que a ingestão de etanol se estabilizar, administre uma única injeção intraperitoneal de controle em cada rato durante a rotina diária de medição, para acostumar o mouse à injeção.
Uma vez que uma linha de base de etanol com baixa variabilidade tenha se restabelecido, divida os camundongos em grupos de controle e experimentais usando os valores de consumo de etanol para que todos os grupos tenham valores médios de consumo de etanol aproximadamente semelhantes. Comece a dosagem diária de drogas, seja por uma duração aguda ou de vários dias. Para realizar o DID, em cada dia de acesso programado ao etanol, regise as medições para volume de água, ingestão de alimentos e peso corporal e realize a dosagem de medicamentos.
Realize isso durante um período pré-selecionado durante o ciclo de luz que é escolhido de acordo com a farmacocinética da droga para que o composto esteja se aproximando da concentração cerebral máxima durante o período de bebida. Em seguida, prepare a solução de 20% de etanol em 1.000 mililitros adicionando 210,5 mililitros de 190 etanol de grão à prova de 789,5 mililitros de água. Em seguida, agite-o completamente.
Encha a garrafa de etanol antes do início da sessão de bebida para que, assim que o DID começar, a garrafa de água possa ser simplesmente substituída pela garrafa de álcool. Durante toda a sessão DID, use um farol vermelho para não perturbar o animal. No início da sessão de bebida DID, que está programada para começar três horas no ciclo escuro antes do ciclo de luz, registo o volume de água para cada rato.
Em seguida, substitua cada garrafa de água por uma garrafa de solução de 20% de etanol e regise o volume inicial do etanol. Leia e regisse o volume final de etanol duas horas depois, no final da sessão de bebidas, nos dias um a três e quatro horas depois, no quarto dia. Em seguida, analise a ingestão de 20% de etanol.
Posteriormente, substitua a garrafa de etanol por garrafa de água e regise o volume de água. Este número mostra a avaliação dos efeitos de uma dose aguda de moxidectina a cinco miligramas por quilograma na ingestão e preferência do etanol. Uma única dose de moxidecina reduziu significativamente a ingestão de álcool superior a 45% em comparação com as injeções pré-moxidectina e a preferência superior a 30%10% de consumo de etanol e preferência permanecem significativamente inferiores ao soro fisiológico no dia imediatamente após o tratamento mox.
Aqui, a bebedeira foi modelada usando o procedimento DID. Os camundongos foram administrados o soro fisiológico nos dias 1 a 4 com linha de base 20% etanol estabelecida no quarto dia. Nos dias um a três do segundo ciclo semanal, todos os camundongos receberam mais uma injeção diária de soro fisiológico.
Os valores de ingestão de etanol a partir do terceiro dia foram então usados para dividir os camundongos em dois grupos que posteriormente receberam uma injeção de moxidectina a cinco miligramas por quilograma ou soro fisiológico no quarto dia. Na semana seguinte, todos os camundongos receberam injeções diárias de soro fisiológico nos dias um a quatro e a ingestão de etanol foi medida mais uma vez no quarto dia. A administração aguda de MOX foi analisada e constatou-se uma redução significativa do consumo de álcool em mais de 54% em comparação com as injeções pré-drogas.
Tenha em mente que futuros experimentos usando este protocolo devem ser feitos para avaliar o mecanismo, dosagem e toxicidade de uma droga potencial, bem como para avaliar sua eficácia em relação às opções de tratamento atuais.
