Este protocolo fornece um modelo animal confiável de uma hemiseção lateral da medula espinhal que imita a síndrome de Brown-Sequard em humanos, e uma nova escala de comportamento combinada para avaliar déficits de comportamento assimétricos. Este modelo de hemiseção de camundongos pode promover nossa compreensão dos prejuízos neurológicos que ocorrem na síndrome de Brown-Sequard em humanos. Ao contrário de suas avaliações mencionadas, nossa nova escala de comportamento combinada pode ser aplicada a qualquer molde que exorça avaliação assimétrica, locomotiva e déficits em laboratório.
O uso deste modelo de hemi-seção consistente e natural pode facilitar a comparação do resultado experimental entre pesquisas básicas e de tradução. Usar um resultado consistente com este modelo pode ser difícil para iniciantes. O passo crítico é colocar a agulha verticalmente na linha média, como orientação para induzir a lesão.
Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar os procedimentos cirúrgicos e comportamentais. No dia do procedimento, limpe a mesa cirúrgica com 70% de etanol e coloque uma almofada de aquecimento pré-aquecida sobre a mesa. Depois de cobrir a área cirúrgica com uma cortina cirúrgica estéril, confirme a falta de resposta ao dedo do pé-pinch em um rato anestesiado.
Aplique pomada nos olhos do animal para evitar a secagem da córnea e raspe os cabelos sobreoleculando as vértebras torácicas. Em seguida, limpe a pele exposta com três esfoliantes alternados à base de iodo e etanol. Quando o animal estiver pronto, localize a décima terceira costela e siga a costela dorsalmente para identificar sua conexão com a vértebra T-13.
Conte até para identificar a vértebra T-9, e use uma lâmina de bisturi número quinze para fazer uma incisão de pele média de três a quatro centímetros sobre os processos espinhosos vertebrais de oito a onze minutos. Mova o rato sob um microscópio cirúrgico, e disseque sem rodeios e separe os músculos paraspinais lateralmente dos processos espinhosos em direção às facetas das vértebras T-9 e T-10 em ambos os lados. Desabilitar a coluna vertebral com um suporte estabilizador modificado, fazer uma fenda em ambos os lados do osso vertebral lateral e deslizar os braços de aço inoxidável do suporte sob as facetas do processo transversal exposto.
Aperte os parafusos para fixar o suporte e use um prolongador para expor os processos laminais e spinous T-8 a 11 vertebrais. Usando um rongeur, corte o processo espimosso T-9, e remova uma pequena porção da lâmina, esquerda para a linha média e toda a parte direita da lâmina, o mais lateralmente possível. Em seguida, insira o ronguer suavemente sob a lâmina, e corte um pequeno pedaço de osso de cada vez, até que a região desejada da laminectomia seja concluída.
Em seguida, identifique a linha média dorsal da corda espinhal, e insira uma agulha de calibre 30 verticalmente através da linha média, na corda espinhal, até a parede ventral do canal vertebral, com o bisel voltado para a direita. Pare qualquer sangramento com um pequeno pedaço de espuma de gel estéril, e insira uma ponta de um par de tesouras de microcirurgia iridectomia através da linha média da pista da agulha, e a outra ponta ao longo da superfície lateral do hemichord direito, para fazer um corte completo no hemichordo direito. Use a borda lateral da mesma agulha que uma faca, para cortar a abertura da lesão para confirmar uma hemiseção completa direita.
E visualize a parte inferior do canal vertebral, para verificar a completude da hemiseção certa. Use a mistura de cimento para construir a ponte estreita sobre a esponja, e os processos giranssos T-8 e T-10. Em seguida, suturar as camadas musculares e de pele separadamente com fio de seda 4/0 e injetar 0,9% salina estéril subcutânea para manter a hidratação.
Pressionando a bexiga urinária duas a três vezes por dia durante a primeira semana, e de uma a duas vezes nas semanas seguintes, até que a bexiga espontânea desapontamento retorne. Nos pontos de tempo experimentais apropriados após o procedimento, coloque o rato adulto em um experimento de campo aberto, e examine a locomoção do animal por quatro minutos. Usando a tabela, atribua um valor de 1 para sim'e 0 para não para cada categoria de comportamento, e soma o valor total para dar uma pontuação final unilateral de 0-8.
Para análise de acoplamento de portão, registo o animal experimental andando em um dispositivo de pista estreita, e atribua uma pontuação de 0 para no'1 para regular e/ou desajeitado'' e 2 para o normal'para cada categoria de acoplamento. Para avaliação de colocação de contato, mantenha o animal em posição vertical, de modo que ambos os membros traseiros estejam disponíveis para a resposta de colocação, e escove a superfície dorsal de um membro traseiro levemente para a frente em direção à borda de uma superfície. Observe a colocação do pé na superfície e atribua uma pontuação de malha de malha de fio com 3 cm de entrada e 1 para colocação'Para avaliação de caminhada na grade, coloque o rato em uma grade elevada de 36 por 38 centímetros de malha de arame revestido de plástico com aberturas quadradas de 3 cm e registro de vídeo o rato andando livremente pela plataforma por 30 passos para permitir a quantificação do número de erros de pé para cada membro para determinar a gravidade do déficit do motor.
A coloração fluorescente de Amino de uma seção transversal no epicentro da lesão mostra uma perda completa do hemichord direito. E a preservação do hemichord esquerdo contralateral à lesão. Escores das medidas individuais de avaliação do portão podem ser analisadas separadamente, ou podem ser combinadas em um comportamento combinado composto após o escore de hemiseção.
Nos primeiros três dias após a lesão, os ratos perdem a capacidade de pisar, com movimentos semelhantes a passos começando a reaparecer no lado ipsilesional em 7 10 dias após a lesão. E com a maioria dos passos sendo passos dorsais. 28 dias após a hemiseção T-9, os ratos podem tomar medidas plantar com coordenação praticamente normal.
Em comparação, o membro traseiro contralesional é menos interrompido com o escore unilateral de hemiseção caindo nos primeiros cinco dias após a lesão, e retornando à linha de base no dia 10, pós-lesão. Para o teste total de acoplamento do portão, tanto a estabilidade quanto a adaptabilidade da coordenação após a hemiseção, são significativamente reduzidas durante os primeiros cinco dias após a lesão. A colocação de contato e a caminhada da grade do membro traseiro ipsilateral também são afetadas, geralmente se recuperando quando o animal começa a tomar passos plantar.
Pode ser difícil produzir uma lesão de corte limpo. Colocar uma agulha no meio pode ser uma orientação útil para garantir uma separação completa do tecido.
