Este trabalho foi apoiado por uma Universidade do Texas em subvenção do programa de pesquisa interdisciplinar de Arlington.

Este protocolo segue as diretrizes do Conselho de revisão institucional da Universidade do Texas em Arlington e está em conformidade com as normas estabelecidas pela versão mais recente da declaração de Helsinque. Nesse sentido, escrito consentimento informado foi (e deve ser) obtidos antes do início dos procedimentos de investigação.
1. instrumentação
Nota: A seguinte descrição de instrumentação baseia-se no infravermelho próximo (NIR) espectrômetro e dados aquisição sistema usado no nosso laboratório (ver Tabela de materiais). Assim, as instruções seguintes etapas que são necessárias para o funcionamento ideal destes dispositivos. Estas etapas incluem a calibração da sonda NIR usando o software que acompanha e calibração fantasma e a aplicação de um pano escuro para eliminar a luz ambiente. Caso o hardware de coleta de dados diferentes e/ou o software é utilizado, os investigadores devem consultar seus próprios manuais de usuário específico para calibração e considerações de luz ambientes. A Figura 1 ilustra a montagem experimental e instrumentação descrito imediatamente abaixo.
<ol><li>Instrua o assunto se encontram em decúbito dorsal com as pernas dentro de uma câmara de pressão negativa (LBNP) inferior do corpo (figura 1A), para que a sua linha de cintura é aproximadamente mesmo com a abertura para a caixa do LBNP. Para obter instruções sobre como construir uma câmara LBNP, consulte referências17.
</li>
	<li>Coloque três eletrodos de eletrocardiograma sobre o assunto: um sobre o assunto e dois em uma posição inferior, médio-clavicular do lado esquerdo medial à crista ilíaca. Essa configuração fornece os melhores resultados devido ao acesso limitado aos membros inferiores, instrumentação dos membros superiores e movimento do braço durante o exercício de aperto de mão.</li>
	<li>Coloque um módulo de monitor de pressão arterial não-invasiva no pulso dominante do sujeito. Coloque as algemas de pressão arterial de dedo em cada dedo e conectá-los ao módulo (figura 1B). Certifique-se que o dedo de trapo de pressão arterial é devidamente calibrado de acordo com o manual que acompanha seu dispositivo.</li>
	<li>Instrua o sujeito a compreender um dinamômetro de aperto de mão (HGD) com seu braço não-dominante em uma posição ligeiramente abduzido. O braço deve ser posicionado confortavelmente em uma mesa de cabeceira. A distância e o ângulo da HGD devem ser ajustados para permitir a força de preensão ideal com movimento mínimo do braço (Figura 1).</li>
	<li>Fixe o HGD para uma mesa de cabeceira.</li>
	<li>Medir a contração voluntária máxima (MVC) do participante. Diga-o participante que, quando solicitado, eles devem apertar o HGD tão duro quanto possível utilizando apenas os músculos na mão e antebraço. Instrua o assunto que eles devem abster-se de recrutar sua parte superior do braço, peito, ombro ou músculos abdominais ao realizar a máxima aderência.</li>
	<li>Repita etapa 1.6 três vezes, separados pelo menos 60 s. Record a força máxima alcançada (melhor de 3). Esta força máxima será usada para calcular a intensidade do exercício para a capacidade oxidativa do músculo esquelético e neurovasculares de acoplamento (abaixo).</li>
	<li>Coloque uma braçadeira rápida inflação ao redor do braço superior da mão exercitar. Conectar-se a companhia aérea do controlador de inflação rápida à braçadeira.</li>
	<li>Identifica dos dedos flexor profundo. Use um marcador de pele para demarcar as fronteiras do músculo palpável.</li>
	<li>Certifique-se de que o espectrômetro NIR é devidamente calibrado de acordo com o manual do usuário incluído com seu dispositivo. Limpe a pele sobre a qual se posicionará a sonda NIR com uma compressa com álcool prep.</li>
	<li>Coloque a sonda NIR sobre o centro da barriga do músculo (dos dedos flexor profundo) e afixá-lo de forma segura para o antebraço.</li>
	<li>Embrulhe a sonda e antebraço com pano escuro, minimizando a interferência de luz ambiente (Figura 1, Figura 1).</li>
	<li>Quando estiver pronto para executar a parte funcional sympatholysis do estudo, sele o assunto na câmara LBNP.</li>
</ol>2. capacidade oxidativa do músculo
Nota: Um rastreamento de dados representativos, ilustrando o procedimento experimental para medir a capacidade oxidativa do músculo esquelético é representado na Figura 2. Esta abordagem experimental anteriormente foi validada contra na vivo fósforo MRS18 e em situ músculo respirometria19e está ganhando aceitação generalizada20.
<ol><li>Instrumentar o assunto como indicado acima (Instrumentação).</li>
	<li>Instrua o sujeito a mentir ainda por 2 min enquanto monitoramento deoxyhemoglobin (HHb) e da oxihemoglobina (HbO2) através da sonda NIR. Nota: Este período de descanso permite que o sujeito para se recuperar de qualquer artefato de movimento associado com o processo de instrumentação e garante medições de linha de base estável. Se depois de 2 min sem flutuações significativas ocorreram, o assunto pode ser considerado em um estado estacionário, ou de base de descanso.</li>
	<li>Antes da oclusão do manguito, informe o seu assunto que você irá insuflar a braçadeira. Infle o braço superior do manguito pelo menos 30 mmHg acima da pressão arterial sistólica por 5 min (i.e., suprasystolic). Instrua o assunto para manter o seu braço mais ainda e relaxada possível durante a insuflação do manguito e seguir deflação do manguito. Nota: Este 5 min protocolo de oclusão artéria braquial manguito reflete intimamente que o padrão clínico atualmente aceito para oclusão vascular testa21,22,23,24,25.</li>
	<li>Registre o valor inicial/linha de base (antes da oclusão do manguito) e o valor do nadir de saturação de tecido (StO2) durante a oclusão do manguito e determinar o ponto médio entre estes dois valores. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57317/57317eq1.jpg">
</li>
	<li>Permitir que o assunto recuperar a oclusão do manguito e retornar aos valores de base de descanso. Uma vez que o assunto tem mantido uma linha de base de descanso pelo menos 1 min completa, continue para a próxima etapa.</li>
	<li>Instruir o sujeito a apertar e manter um aperto de mão isométrico a 50% de seu MVC. Incentive o assunto para manter a sua contração isométrica até o tecido elimina a saturação em 50%. Após atingir esse valor, diz o assunto para relaxar a sua mão e informá-los que não há mais exercício ou movimento é necessária.</li>
	<li>Dentro de 3-5 s seguinte exercício cessação, administrar a seguinte série de oclusão de braçadeira rápida (uma série = 1 inflação + 1 deflação), como previamente estabelecido18: Série #1 - 6: 5 s na/5 s fora Série #7 - 10: 7 s na/10 s fora Série #11-14:10 s na/15 s fora Série #15-18:10 s na/20 s fora</li>
	<li>Depois de completar a série de inflação/deflação 18th , instrua o assunto para descansar, permitindo que a saturação de tecido retornar aos valores de base inicial. Depois esses valores permaneceram consistentes pelo menos 2 min, repita as etapas de 2.4 e 2.5.</li>
	<li>
Calcular a capacidade oxidativa do músculo esquelético
	<ol>
<li>Calcule a inclinação da mudança no StO2para cada uma das oclusões do 18 manguito individuais, formando os pontos de recuperação monoexponential ilustrados na Figura 2.</li>
		<li>Ajustar os dados calculados de 2.7 para a seguinte curva de19,monoexponential18,26 y = fim - Δ x e-kt Nota: 'y' é a taxa de consumo de oxigênio muscular relativo (mV̇O2) durante a insuflação do manguito, 'End' representa o mV̇O2 , imediatamente após a cessação do exercício; Delta ('Δ') significa a mudança no mV̇O2 de descanso ao final do exercício; 'k' é o ajuste constante de velocidade; ' t ' é tempo. Tau é calculada como 1/k.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. reativa hiperemia
Nota: Um rastreamento de dados representativos, ilustrando o procedimento experimental para medir a hiperemia reativa é retratado na Figura 3.
<ol><li>Com o assunto deitado em decúbito dorsal e instrumentado como descrito acima (Instrumentação), instrua o assunto para que fique o mais imóvel possível.</li>
	<li>Uma vez que o assunto tem alcançado um estado de repouso consistente, continue a gravar pelo menos 1 min de dados de base e em seguida rapidamente insuflar um manguito de pressão arterial na parte superior do braço a uma pressão de suprasystolic (30 mmHg acima da pressão arterial sistólica).</li>
	<li>A marca de 5 min, rapidamente, esvazie a braçadeira enquanto gravava a resposta hiperemiada.</li>
	<li>Continue gravando para pelo menos de 3 min para capturar a recuperação do sujeito.</li>
	<li>
Cálculo de hiperemia reativa Nota: Os parâmetros NIRS calculados são representados na Figura 3.<ol>
<li>Calcule a linha de base StO2 como o StO média2 por 1 min completo prévio ao aparecimento de oclusão arterial do manguito.</li>
		<li>Determine a taxa metabólica do músculo esquelético descanso como a taxa de dessaturação (i.e., inclinação média) durante o manguito oclusão (definido como inclinação 1)27,28.</li>
		<li>Calcule a hiperemia reativa como segue: a) a média ascendente após lançamento do manguito (i.e., reperfusão taxa, definida como inclinação 2), calculado a partir do momento da liberação do manguito pela fase linearmente crescente do rastreamento rebote; b) StO2 valor máximo alcançado após liberação do manguito (denotada como StO2máx); c) a área de hiperemia reativa sob a curva (AUC); calculado a partir na época do lançamento do manguito para 1-, 2 - e 3-min postar manguito-oclusão (AUC AUC 1-min, min 2 e 3 AUC-min, respectivamente); e d) o hiperemiada reserva, calculado como a mudança na StO2 acima da linha de base e relatado como uma mudança de % (por cento). Este valor é calculado como a mais alta saturação alcançada durante o pós-oclusiva rebote menos a saturação média calculada no passo 3.5.1 (veja acima). Nota: Grandes diferenças nos dados de base afetará grandemente a interpretação da reserva hiperemiada.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. funcional Sympatholysis
Nota: Um rastreamento de dados representativos, ilustrando o procedimento experimental para medir sympatholysis funcional é representado na Figura 4.
<ol><li>Instrumentar o assunto como indicado acima (Instrumentação).</li>
	<li>Certifique-se de um selo hermético na câmara LBNP.</li>
	<li>Com o assunto deitado ainda e em repouso, colete 3 min de dados de base.</li>
	<li>A marca de 3 min, ligue o aspirador. Ajuste o vácuo para que a pressão no interior da câmara LBNP está entre-20 e -30 mmHg. Permita o vácuo concorrer a 2 min enquanto monitora a resposta do sujeito.</li>
	<li>A marca de 5 min, desligue o aspirador e permitir que o assunto descansar por 3 min.</li>
	<li>A marca de 8 min, iniciar o prompt de voz guiando o assunto através do exercício de aperto de mão rítmica (20% MVC).</li>
	<li>Confirme que o assunto é manter seu aperto em toda a totalidade de cada fase emocionante e relaxar completamente durante entre cada repetição. Monitorar a sua saída de força e confirmar que eles estão conseguindo 20% MVC com cada aperto. Continue o exercício até a marca de 11 min.</li>
	<li>A marca de 11 min, ligue o vácuo incentivando o assunto para continuar o exercício rítmico. Permita o vácuo executar a partir de 11-13 min e, em seguida, desligá-lo.</li>
	<li>Com o assunto continuar realizando exercício de aperto de mão rítmica em 20% dos seu MVC para um adicional 2 min. Após a cessação do exercício, tem o resto do assunto tranquilamente e fica quieto.</li>
	<li>
Cálculo funcional Sympatholysis
	<ol>
<li>Normalize a mudança na oxihemoglobina com LBNP ao total sinal lábil (TLS), determinada durante a oclusão de braçadeira 5 min: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57317/57317eq2.jpg"> <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/57317/57317eq3.jpg">
</li>
		<li>Calcule cada evento como a média final de 20 min de cada evento.</li>
		<li>Calcule a atenuação induzida pelo exercício da redução da oxihemoglobina: <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/57317/57317eq4.jpg">
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Huang, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+value+of+reactive+hyperemia+for+cardiovascular+events+in+patients+with+peripheral+arterial+disease+undergoing+vascular+surgery.">Predictive value of reactive hyperemia for cardiovascular events in patients with peripheral arterial disease undergoing vascular surgery.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27 (10), 2113-2119 (2007).</li><li>Suryapranata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+value+of+reactive+hyperemic+response+on+reperfusion+on+recovery+of+regional+myocardial+function+after+coronary+angioplasty+in+acute+myocardial+infarction.">Predictive value of reactive hyperemic response on reperfusion on recovery of regional myocardial function after coronary angioplasty in acute myocardial infarction.</a> Circulation. 89 (3), 1109-1117 (1994).</li><li>Richardson, R. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+four+different+vascular+occlusion+tests+for+assessing+reactive+hyperemia+using+near-infrared+spectroscopy.">Comparison of four different vascular occlusion tests for assessing reactive hyperemia using near-infrared spectroscopy.</a> Crit Care Med. 39 (4), 695-701 (2011).</li><li>McLay, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+responsiveness+determined+by+near-infrared+spectroscopy+measures+of+oxygen+saturation.">Vascular responsiveness determined by near-infrared spectroscopy measures of oxygen saturation.</a> Exp Physiol. 101 (1), 34-40 (2016).</li><li>McLay, K. M., Nederveen, J. P., Pogliaghi, S., Paterson, D. H., Murias, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability+of+vascular+responsiveness+measures+derived+from+near-infrared+spectroscopy.">Repeatability of vascular responsiveness measures derived from near-infrared spectroscopy.</a> Physiol Rep. 4 (9), (2016).</li><li>Ryan, T. E., Southern, W. M., Brizendine, J. T., McCully, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-induced+changes+in+skeletal+muscle+metabolism+measured+with+optical+spectroscopy.">Activity-induced changes in skeletal muscle metabolism measured with optical spectroscopy.</a> Med Sci Sports Exerc. 45 (12), 2346-2352 (2013).</li><li>Southern, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+skeletal+muscle+oxidative+capacity+and+impaired+training+adaptations+in+heart+failure.">Reduced skeletal muscle oxidative capacity and impaired training adaptations in heart failure.</a> Physiol Rep. 3 (4), (2015).</li><li>Ryan, T. E., Brizendine, J. T., McCully, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+exercise+type+and+intensity+on+the+noninvasive+assessment+of+skeletal+muscle+mitochondrial+function+using+near-infrared+spectroscopy.">A comparison of exercise type and intensity on the noninvasive assessment of skeletal muscle mitochondrial function using near-infrared spectroscopy.</a> J Appl Physiol. 114 (2), 230-237 (2013).</li><li>Adami, A., Cao, R., Porszasz, J., Casaburi, R., Rossiter, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+NIRS+assessment+of+muscle+oxidative+capacity+in+smokers+with+and+without+COPD.">Reproducibility of NIRS assessment of muscle oxidative capacity in smokers with and without COPD.</a> Respir Physiol Neurobiol. 235, 18-26 (2017).</li><li>Lacroix, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+near-infrared+spectroscopy+parameters+measured+during+brachial+artery+occlusion+and+reactive+hyperemia+in+healthy+men.">Reproducibility of near-infrared spectroscopy parameters measured during brachial artery occlusion and reactive hyperemia in healthy men.</a> J Biomed Opt. 17 (7), 077010 (2012).</li><li>Bopp, C. M., Townsend, D. K., Warren, S., Barstow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+brachial+artery+blood+flow+and+total+[hemoglobin+myoglobin]+during+post-occlusive+reactive+hyperemia.">Relationship between brachial artery blood flow and total [hemoglobin+myoglobin] during post-occlusive reactive hyperemia.</a> Microvasc Res. 91, 37-43 (2014).</li><li>Willingham, T. B., Southern, W. M., McCully, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reactive+hyperemia+in+the+lower+limb+using+near-infrared+spectroscopy.">Measuring reactive hyperemia in the lower limb using near-infrared spectroscopy.</a> J Biomed Opt. 21 (9), 091302 (2016).</li><li>Kragelj, R., Jarm, T., Erjavec, T., Presern-Strukelj, M., Miklavcic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+of+postocclusive+reactive+hyperemia+measured+by+near+infrared+spectroscopy+in+patients+with+peripheral+vascular+disease+and+in+healthy+volunteers.">Parameters of postocclusive reactive hyperemia measured by near infrared spectroscopy in patients with peripheral vascular disease and in healthy volunteers.</a> Ann Biomed Eng. 29 (4), 311-320 (2001).</li><li>Gurley, K., Shang, Y., Yu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+optical+quantification+of+absolute+blood+flow,+blood+oxygenation,+and+oxygen+consumption+rate+in+exercising+skeletal+muscle.">Noninvasive optical quantification of absolute blood flow, blood oxygenation, and oxygen consumption rate in exercising skeletal muscle.</a> J Biomed Opt. 17 (7), 075010 (2012).</li></ol>

Os autores declaram que eles têm não tem interesses financeiro concorrente.

Os métodos aqui descritos permitem avaliação não-invasiva, clínica de hiperemia reativa, acoplamento neurovascular e capacidade oxidativa do músculo esquelético em uma única visita clínica ou laboratório.
Considerações críticas
Embora NIRS é relativamente robusto e fácil de usar, recolha destes dados exige cuidadosa colocação do optodes diretamente sobre o ventre muscular, preso firmemente no lugar para evitar artefato de m...

A resposta hiperemiada para um breve período de isquemia do tecido tem emergido como uma medida-chave não-invasiva da função vascular (micro). Durante a oclusão de uma artéria de canalização, a jusante arteríolas dilatar-se em um esforço para compensar o insulto isquêmico. Após a liberação da oclusão, a diminuição da resistência vascular resulta em hiperemia, a magnitude do que é ditada pela capacidade de dilatar a microvasculatura a jusante. Enquanto a hiperemia reativa é um forte preditor independente de eventos cardiovasculares1,2 e, portanto, um ponto de extremidade clinicamente significativo, seu significado funcional para exercer tolerância e qualidade de vida é menos claro.
Com efeito, o exercício dinâmico representa um grande estresse cardiovascular que exige uma resposta altamente coordenada neurovascular para coincidir com a entrega de oxigênio a demanda metabólica. Por exemplo, fluxo de sangue do músculo esquelético pode aumentar quase 100-fold durante o músculo isolado contrações3, que iria sobrecarregar a capacidade de bombeamento do coração se tal resposta hemodinâmica foram extrapolada para o exercício de todo o corpo. Nesse sentido, para evitar hipotensão severa, simpático (i.e., vasoconstritor) aumenta a atividade nervosa para redistribuir o débito cardíaco de tecidos inativos e viscerais e para o músculo esquelético ativo4. Efluxo simpático também é direcionado para o músculo esquelético exercício5; no entanto, sinalização metabólica local atenua a resposta vasoconstritora para assegurar adequada de tecido oxigênio entrega6,7,8,9,10, 11. coletivamente, este processo é denominado funcional sympatholysis12e é imperativo para o regulamento normal do fluxo de sangue do músculo esquelético durante o exercício. Desde que o fluxo de sangue do músculo esquelético é um determinante-chave da capacidade aeróbia — um preditor independente de qualidade de vida e doença cardiovascular morbidade e mortalidade13— noções básicas sobre o controle de oxigênio de tecido e fluxo de sangue muscular esquelético entrega durante o exercício é de grande importância clínica.
Entrega de oxigênio é apenas metade da equação de Fick, no entanto, com utilização de oxigênio satisfaça a outra metade da equação. Entre os principais determinates da utilização de oxigênio, a fosforilação oxidativa mitocondrial desempenha um papel essencial no fornecimento de energia adequada para processos celulares em repouso e durante o exercício. Com efeito, deficiências na capacidade oxidativa do músculo podem limitar funcional capacidade e qualidade de vida de14,15,16. Várias medidas são comumente usadas para fornecer um índice da capacidade oxidativa muscular, incluindo biópsias de músculo invasivo e caro e demorado de ressonância magnética espectroscopia (MRS) técnicas.
Aqui, propomos uma abordagem não-invasiva, romance, usando espectroscopia de infravermelho próximo (NIR), para avaliar cada um desses três principais clínicos pontos de extremidade (hiperemia reativa, sympatholysis e capacidade oxidativa do músculo) em uma única visita clínica ou laboratório. As principais vantagens desta abordagem são triplo: primeiro, esta técnica é facilmente transportável, custo relativamente baixo e fácil de executar. As abordagens atuais do ultra-som Doppler para medir a hiperemia reativa são altamente dependente do operador — que requer grande habilidade e treinamento — e requer software de hardware e pós-processamento de aquisição de dados sofisticados, de alto custo,. Além disso, este poderia concebivelmente ser introduzido a clínica e/ou grandes ensaios clínicos para cabeceira de monitoramento ou testes de eficácia terapêutica. Em segundo lugar, em virtude da metodologia, esta técnica incide especificamente sobre a microvasculatura do músculo esquelético, aumentando a especificidade global da técnica. Abordagens alternativas usando ultra-som Doppler concentrar inteiramente em navios de conduíte upstream e inferir alterações a jusante, que podem umedecer o sinal. Em terceiro lugar, esta técnica é completamente não-invasivo. Capacidade oxidativa do músculo esquelético é tradicionalmente avaliada com invasiva e biópsias musculares dolorosas e sympatholysis funcionais podem ser avaliadas com injeção intra-arterial de simpaticomiméticos e sympatholytic. Essa abordagem evita esses requisitos todos juntos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="836">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:328px;">Dual-channel OxiplexTS Near-infrared spectroscopy machine</td>
			<td style="width:223px;">Iss Medical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">NIRS muscle sensor</td>
			<td style="width:223px;">Iss Medical</td>
			<td align="right" style="width:119px;">201.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">E20 Rapid cuff inflation system</td>
			<td style="width:223px;">Hokanson</td>
			<td style="width:119px;">E20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">AG101 Air Source</td>
			<td style="width:223px;">Hokanson</td>
			<td style="width:119px;">AG101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Smedley Handgrip dynometer (recording)</td>
			<td style="width:223px;">Stolting</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Powerlab 16/35, 16 Channel Recorder</td>
			<td style="width:223px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:119px;">PL3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Human NIBP Set</td>
			<td style="width:223px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:119px;">ML282-SM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Bio Amp</td>
			<td style="width:223px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:119px;">FE132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Quad Bridge Amp</td>
			<td style="width:223px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:119px;">FE224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Connex Spot Monitor</td>
			<td style="width:223px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:119px;">71WX-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:328px;">Origin(Pro) graphing software</td>
			<td style="width:223px;">OrignPro</td>
			<td style="width:119px;">Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:328px;">Lower body negative pressure chamber</td>
			<td style="width:223px;">Physiology Research Instruments</td>
			<td style="width:119px;">standard unit</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

skeletal muscle neurovascular coupling, oxidative capacity, and microvascular function with 'one stop shop' near-infrared spectroscopy

Exercício representa um grande estresse hemodinâmico que exige uma resposta altamente coordenada neurovascular para coincidir com a entrega de oxigênio a demanda metabólica. Hiperemia reativa (em resposta a um breve período de isquemia do tecido) é um preditor independente de eventos cardiovasculares e fornece dicas importantes para a saúde vascular e vasodilatador capacidade. Capacidade oxidativa do músculo esquelético é igualmente importante na saúde e na doença, como determina o fornecimento de energia para processos de myocellular. Aqui, descrevemos uma abordagem simples e não-invasiva usando espectroscopia de infravermelho próximo para avaliar cada um desses grandes clínicos pontos de extremidade (hiperemia reativa, acoplamento neurovascular e capacidade oxidativa muscular) durante uma única visita clínica ou laboratório. Ao contrário de ultra-som Doppler, imagens/espectroscopia de ressonância magnética, ou medições de fluxo baseado em cateter invasivo ou biópsias de músculo, nossa abordagem é menos operador-dependente, baixo custo e completamente não-invasivo. Dados representativos do nosso laboratório juntamente com dados de Resumo de literatura publicada anteriormente ilustram a utilidade de cada um desses pontos de extremidade. Uma vez que esta técnica é dominada, aplicativo para populações clínicas irá fornecer uma visão mecanicista importante exercício intolerância e disfunção cardiovascular.

Capacidade oxidativa do músculo esquelético
A Figura 2 ilustra uma resposta participante representante durante uma avaliação de capacidade oxidativa do músculo esquelético NIRS-derivado. Painel A mostra a saturação do tecido perfil durante um 5 min arterial algemá-protocolo de oclusão, exercício de empunhadura e oclusão arterial intermitente durante a recuperaç...

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Skeletal Muscle Neurovascular Coupling, Oxidative Capacity, and Microvascular Function with 'One Stop Shop' Near-infrared Spectroscopy

Acoplamento de Neurovascular do músculo esquelético, capacidade oxidativa e função Microvascular com 'Balcão único' espectroscopia de infravermelho próximo

Aqui, descrevemos uma abordagem simples e não-invasiva usando espectroscopia de infravermelho próximo para avaliar hiperemia reativa, acoplamento neurovascular e capacidade oxidativa do músculo esquelético em uma única visita clínica ou laboratório.

Exercise represents a major hemodynamic stress that demands a highly coordinated neurovascular response in order to match oxygen delivery to metabolic ...

skeletal-muscle-neurovascular-coupling-oxidative-capacity

Research

JoVE Journal

Medicine

12.4K visualizações.  University of Texas at Arlington. Aqui, descrevemos uma abordagem simples e não-invasiva usando espectroscopia de infravermelho próximo para avaliar hiperemia reativa, acoplamento neurovascular e capacidade oxidativa do músculo esquelético em uma única visita clínica ou laboratório.

Vídeo: Skeletal Muscle Neurovascular Coupling, Oxidative Capacity, and Microvascular Function with 'One Stop Shop' Near-infrared Spectroscopy

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

Myo-mecânico Análise do músculo esquelético isolado

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Medicina

In Vivo Canine Muscle Function Assay

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
contractions. The pelvic limb of an anesthetized dog is immobilized in a stereotactic frame to align the tibia at a right angle to the femur. Adhesive wrap affixes the 
paw to a pedal mounted on the shaft of a servomotor to measure torque. Percutaneous nerve stimulation activates pelvic limb muscles of the paw to either push (extend) or 
pull (flex) against the pedal to generate isometric torque. Percutaneous tibial nerve stimulation activates tibiotarsal extensor muscles. Repeated eccentric (lengthening) 
contractions are induced in the tibiotarsal flexor muscles by percutaneous peroneal nerve stimulation. The eccentric protocol consists of an initial isometric contraction 
followed by a forced stretch imposed by the servomotor. The rotation effectively lengthens the muscle while it contracts, e.g., an eccentric contraction. During 
stimulation flexor muscles are subjected to an 800 msec isometric and 200 msec eccentric contraction. This procedure is repeated every 5 sec. To avoid fatigue, 4 min rest 
follows every 10 contractions with a total of 30 contractions performed.

In Vivo Canine Muscle Function Assay

We describe a minimally-invasive and painless method to measure canine hindlimb muscle strength and muscle response to repeated eccentric contractions.

Em função Assay Canine Muscle Vivo

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably adaptable to environmental factors1 such as hypertrophy by resistance exercise and atrophy by disuse. It thereby exhibits remodeling and adaptations to stressors (heat, ischemia, heavy metals, etc.)2,3. Damage can occur to muscle by a muscle exerting force while lengthening, the so-called eccentric contraction4. The contractile proteins can be damaged in such exertions and need to be repaired, degraded and/or resynthesized; these functions are not part of the contractile proteins, but of other much less abundant proteins in the cell. To determine what subset of proteins is involved in the amelioration of this type of damage, a global proteome must be established prior to exercise5 and then followed subsequent to the exercise to determine the differential protein expression and thereby highlight candidate proteins in the adaptations to damage and its repair. Furthermore, most studies of skeletal muscle have been conducted on the male of the species and hence may not be representative of female muscle. 
In this article we present a method for extracting proteins reproducibly from male and female muscles, and separating them by two-dimensional gel electrophoresis followed by high resolution digital imaging6. This provides a protocol for spots (and subsequently identified proteins) that show a statistically significant (p &lt; 0.05) two-fold increase or decrease, appear or disappear from the control state. These are then excised, digested with trypsin and separated by high-pressure liquid chromatography coupled to a mass spectrometer (LC/MS) for protein identification (LC/MS/MS)5. This methodology (Figure 1) can be used on many tissues with little to no modification (liver, brain, heart etc.).

A straight-forward set of methods to isolate and determine the identity of the most abundant proteins expressed in skeletal muscle. About 800 spots are discerned on a two-dimensional gel from 10 mg muscle; this allows for the determination of gender-specific protein expression. These methods will give equivalent results in most tissues.

Dimorfismo Sexo músculo esquelético de Proteomics

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Avaliação não invasiva da função microvascular e endotelial

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Quantitative Magnetic Resonance Imaging of Skeletal Muscle Disease

Quantitative magnetic resonance imaging (qMRI) describes the development and use of MRI to quantify physical, chemical, and/or biological properties of living systems. Neuromuscular diseases often exhibit a temporally varying, spatially heterogeneous, and multi-faceted pathology. The goal of this protocol is to characterize this pathology using qMRI methods. The MRI acquisition protocol begins with localizer images (used to locate the position of the body and tissue of interest within the MRI system), quality control measurements of relevant magnetic field distributions, and structural imaging for general anatomical characterization. The qMRI portion of the protocol includes measurements of the longitudinal and transverse relaxation time constants (T1 and T2, respectively). Also acquired are diffusion-tensor MRI data, in which water diffusivity is measured and used to infer pathological processes such as edema. Quantitative magnetization transfer imaging is used to characterize the relative tissue content of macromolecular and free water protons. Lastly, fat-water MRI methods are used to characterize fibro-adipose tissue replacement of muscle. In addition to describing the data acquisition and analysis procedures, this paper also discusses the potential problems associated with these methods, the analysis and interpretation of the data, MRI safety, and strategies for artifact reduction and protocol optimization.

Neuromuscular diseases often exhibit a temporally varying, spatially heterogeneous, and multi-faceted pathology. The goal of this protocol is to characterize this pathology using non-invasive magnetic resonance imaging methods.

Quantitativa Ressonância Magnética da doença do músculo esquelético

Quantitative magnetic resonance imaging (qMRI) describes the development and use of MRI to quantify physical, chemical, and/or biological properties of ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of stroke than relying on indirect measurements, and will be a potent and robust vascular research tool. We use an optical imaging approach that labels thrombi with a molecular imaging thrombus marker&#160;&#8212; a Cy5.5 near-infrared fluorescent (NIRF) probe that is covalently linked to the fibrin strands of the thrombus by the fibrin-crosslinking enzymatic action of activated coagulation factor XIIIa during the process of clot maturation. A micro-computed tomography (microCT)-based approach uses thrombus-seeking gold nanoparticles (AuNPs) functionalized to target the major component of the clot: fibrin. This paper describes a detailed protocol for the combined in vivo microCT and ex vivo NIRF imaging of thromboemboli in a mouse model of embolic stroke. We show that in vivo microCT and fibrin-targeted glycol-chitosan AuNPs (fib-GC-AuNPs) can be used for visualizing both in situ thrombi and cerebral embolic thrombi. We also describe the use of in vivo microCT-based direct thrombus imaging to serially monitor the therapeutic effects of tissue plasminogen activator-mediated thrombolysis. After the last imaging session, we demonstrate by ex vivo NIRF imaging the extent and the distribution of residual thromboemboli in the brain. Finally, we describe quantitative image analyses of microCT and NIRF imaging data. The combined technique of direct thrombus imaging allows two independent methods of thrombus visualization to be compared: the area of thrombus-related fluorescent signal on ex vivo NIRF imaging vs. the volume of hyperdense microCT thrombi in vivo.

This protocol describes the application of combined near-infrared fluorescent (NIRF) imaging and micro-computed tomography (microCT) for visualizing cerebral thromboemboli. This technique allows the quantification of thrombus burden and evolution. The NIRF imaging technique visualizes fluorescently labeled thrombus in excised brain, while the microCT technique visualizes thrombus inside living animals using gold-nanoparticles.

Combinada Near-infrared imagens fluorescentes e tomografia Micro-computado para Diretamente Visualizando Cerebral tromboêmbolos

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Fósforo-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: uma ferramenta para medir<em&gt; In Vivo</em&gt; Capacidade mitocondrial fosforilação oxidativo no músculo esquelético humano

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Nova prática recomendada para validar a cauda veia injeções no rato com agentes próximo-infravermelho-rotulado

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated hemoglobin molecules. A probe placed on the skin emits light that is absorbed, scattered, and reflected by the underlying tissue. Detectors in the probe sense the amount of reflected light: this reflects the organ-specific ratio of oxygen supply and consumption - independent of pulsatile flow. Modern devices enable the simultaneous monitoring at different body sites. A rise or dip in the rSO2 curve visualizes changes in oxygen supply or demand before vital signs indicate them. The evolution of rSO2 values in relation to the starting point is more important for interpretation than are absolute values.
A routine clinical application of NIRS is the surveillance of somatic and cerebral oxygenation during and after cardiac surgery. It is also administered in preterm infants at risk for necrotizing enterocolitis, newborns with hypoxic ischemic encephalopathy and a potential risk of impaired tissue oxygenation. In the future, NIRS could be increasingly used in multimodal neuromonitoring, or applied to monitor patients with other conditions (e.g., after resuscitation or traumatic brain injury).

This protocol is designed to assist clinicians to measure regional tissue oxygenation at different body sites in infants and children. It can be used in situations where tissue oxygenation is potentially compromised, particularly during cardiopulmonary bypass, when using non-pulsatile cardiac-assist devices, and in critically ill neonates, infants and children.

Como administrar espectroscopia infravermelha em recém-nascidos, bebês e crianças em estado crítico

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...