O objetivo geral deste procedimento é familiarizar a técnica única necessária na isolação do linfonodo mediastinal de camundongos. A operação foi realizada após a injeção de material imunoestimulante em seis rotas diferentes em camundongos. Neste estudo, utilizamos uma nova classe de material formando estruturas nano-dimensionadas.
Os surfactantes consistem em grupo chefe hidrofílico e cauda hidrofóbica. Esses formam micela esférica ou outra estrutura secundária devido à separação de microfagos. Nós usamos esta propriedade para uma bio macromolécula que é DNA.
Anfífilos de DNA, mostrados aqui, como nucleotídeos regulares como A, C, G, T, tem blocos hidrofílicos, enquanto as nucleobases neurocelulares modificadas lipídicas atuam como unidades hidrofóbicas. O oligo modificado foi sintetizado pelo sintetizador de DNA em octogramas em larga escala. Na mídia, os DNAs lipífilis anfílicos formam espontaneamente micelas esféricas nano-dimensionadas.
Quando a micela é formada, o DNA permanece sozinho como um portador vazio com cerca de 10 nanômetros de diâmetro. Para equipar o portador com estimulante imunológico, é simples a questão de estender a sequência de DNA com receptor de pedágio nove adjuvantes ou seja, eCpG. DNA lipídido e base eCpG aqui, portanto, a superfície externa da micela é degradada com sequência cpg.
Então nomeamos essa partícula nano estimulante imunológica como o INP. Para determinar a maneira adequada dos INPs para resposta imune, injetamos INPs em camundongos em 64 rotas de injeção e, consequentemente, um tecido linfático adequado foi analisado. Para instruções de injeção mais detalhadas, encontre um artigo JOB publicado por Charles River em 2012.
A principal vantagem deste vídeo é mostrar visualmente como obter linfonodos mediastinal. O vídeo mostra explicitamente a localização do linfonodo mediastinal que muitas pessoas encontram dificuldade em isolar os órgãos. Todos os experimentos foram realizados sob as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais no Centro Clínico de Saúde Pública de Xangai, ou Faculdade de Medicina da Universidade de Ulsan.
Esta parte mostrará a localização específica de órgãos ou tecidos, que são cruciais para a análise imunológica. Baço e dois linfonodos serão isolados. Em primeiro lugar, os camundongos foram sacrificados pela eutanásia de inalação de dióxido de carbono e todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento seguindo a orientação do Comitê Institucional de Cuidados e Uso animal.
De agora em diante vamos encontrar os órgãos e isolá-los. Primeiro, conserte corretamente o mouse na mesa de operação com quatro pinos na palma do mouse. Esterilize a área de dissecção com álcool.
Dissecar a tampa externa da parte inferior do abdômen do rato com uma tesoura de grande porte. Use fórceps para abrir os dois lados do acessório e fixá-lo com pinos na mesa de operação. A localização do linfonodo inguinal é exposta ao encontrar a conjunção da embarcação descendo em direção à perna esquerda.
A forma do vaso parece a letra do alfabeto inclinado Y.Descubra a camada com as fórceps e puxe-a da pele. Corte o peritônio com uma tesoura menor para expor órgãos internos. Mova o intestino para a direita usando fórceps e, em seguida, enrole em baço em forma, que mostram no lado esquerdo, superior esquerdo do abdômen.
É necessária atenção adicional durante o procedimento, uma vez que o baço é fácil de interromper. Finalmente, o ponto chave deste vídeo:coleta de linfonodo mediastinal. Está localizado sob a parte superior do pulmão, que é difícil de ver devido ao seu pequeno tamanho e localização um pouco escondida.
Exponha cuidadosamente a área usando pequenas tesouras e fórceps. Corte os dois lados das costelas e o diafragma também. Corte as costelas acima do peito.
Durante o procedimento evite danificar o coração e os vasos sanguíneos, pois pode cegar o local, encontrando o linfonodo mediastinal translúcido. Se por acidente o vaso sanguíneo estourou, limpe suavemente o sangue com gaze. Pegue o lado esquerdo do pulmão e vire-o suavemente para o outro lado para ver debaixo do pulmão.
Puxe o linfonodo mediastinal usando fórceps. Depois de colher o linfonodo mediastinal, certifique-se de remover perfeitamente toda a gordura e sangue ao redor do linfonodo, uma vez que o tecido indesejado pode influenciar a análise. Finalmente, todos os órgãos isolados em uma placa de petri cheia de mídia.
Foram analisadas 0,1 vezes 10 para a sexta célula nesta citometria de fluxo. Com base na população de leucócitos de getter de força e tamanho foi fechada e que as células foram excluídas pela coloração escura. 24 horas após a injeção inp por 64 rotas de injeção, baço, linfonodo inguinal e linfonodo mediastinal foram colhidos e analisados ativação dc por citometria de fluxo.
Com base na estratégia da população de citometria de fluxo DC foi definida como células negativas cd11C positivas e de linhagem no leucócito vivo. Notavelmente, a injeção intranasal do INP promoveu aumentos significativos na expressão CD40, 80, 86 no linfonodo mediastinal em comparação com a PBS para o controle. Portanto, esses dados sugeriram que a injeção intranasal de INP pode ser usada como adjuvante mucosa para o aprimoramento da imunidade no pulmão.
