A coleta de tecidos para testes de raiva tem perigos óbvios e não aparentes. O técnico deve utilizar os métodos mais seguros disponíveis e usar equipamentos de proteção individual adequados. Esses protocolos fornecem técnicas seguras de necropsia sem o uso de ferramentas elétricas ou serras, minimizando a produção de aerossóis.
O protocolo animal de grande porte também pode ser realizado no campo. O uso do método de recuperação de amostras de animais de grande porte no campo elimina o desafio de transportar uma cabeça de animal pesando mais de 45 quilos para o laboratório. O método animal de grande porte é semelhante ao protocolo europeu para recuperação de amostras de encefalopatia espongiforme transmissível e pode ser usado para qualquer investigação usando o tronco cerebral e o cerebelo.
Para recuperar o cerebelo e o tronco cerebral pelo método ventral, posicione o lado ventral da amostra para cima com o nariz direcionado distally para a parte de trás do armário de biossegurança. Segurando um martelo ortopédico na mão dominante e um cinzel de vereador na outra mão, posicione o cinzel em um ângulo de 45 graus com o ponto de canto para o cinzel na abertura em forma de V entre o lado direito dos ossos temporais e occipital. Atinja o topo do cinzel com o martelo até que os dois ossos se separem.
E faça um corte adjacente ao osso basefenóide. Separe os ossos temporais e occipitais do lado esquerdo do espécime como apenas demonstrado. E use o cinzel para dobrar a região V do crânio para baixo para expor toda a área de rombenceon do cérebro.
Em seguida, use tesouras e fórceps para colher o tronco cerebral e o cerebelo, removendo quaisquer pedaços de tecido restantes do crânio, conforme necessário. Se a amostra não permitir a posição de recuperação ventral a amostra dorsalmente, com o nariz direcionado distally para a parte de trás do armário de biossegurança. E use um tumor tenacula para agarrar o músculo temporal esquerdo com os dentes do tenacula.
Aperte a alça para travar os dentes ao redor do tecido e use uma faca de escultura afiada para cortar o músculo temporal até o osso. Gire o espécime 180 graus com o tenacula e a faca e repita a incisão no músculo temporal oposto para expor o crânio. Retorne a cabeça à sua orientação original e coloque o cinzel em um ângulo de 45 graus com o ponto de canto para o cinzel no centro do crânio na conjuntura dos ossos parietal e intraparietal.
E golpeie o topo do cinzel com o martelo até que uma abertura horizontal seja feita na metade superior do crânio no osso parietal. Gire o espécime 180 graus e faça uma abertura no lado oposto do crânio como apenas demonstrado. Posicione a cabeça conforme necessário para inserir o ponto do cinzel no final do primeiro corte em um ângulo de 90 graus até a abertura horizontal e golpee o cinzel até que a abertura atinja o osso occipital.
Enrole o espécime para fazer uma abertura no osso occipital oposto da mesma maneira. As aberturas no crânio devem se assemelhar a um U.Insira os dentes do tenacula no crânio na parte inferior do você e puxe o osso para trás para expor a extremidade caudal do cerebrum e do cerebelo. Em seguida, use uma tesoura como uma colher para arrancar todo o cerebelo de dentro da cavidade.
E use fórceps de tecido para provocar o tronco cerebral do forame. Para a recuperação do cerebelo e do tronco cerebral, posicione a amostra para que a parte dorsal do crânio esteja em contato com a superfície da necropsia. Com a parte caudal do crânio e foie magnum de frente para a frente do armário de biossegurança.
Segure o tronco cerebral com fórceps. Insira uma faca de estilete modificada no foie magnum entre a medula espinhal e as meninges espinhais o mais longe possível e vasculhe ao redor da medula espinhal para separar o cerebelo e o tronco cerebral das meninges espinhais. Então, puxe a haste para fora do forame com fórceps.
Quando a faca tiver sido inserida através do foie magnum, gire suavemente a lâmina para seguir ao longo do crânio o máximo possível e insira uma espátula de metal ou faca com uma alça longa o suficiente para alcançar sob o cérebro no espaço entre o tecido neural e as meninges espinhais. Sonda ao redor do cerebelo para garantir que as conexões com as meninges espinhais tenham sido cortadas. Quando as meninges tiverem sido completamente cortadas, avancem a espátula rostrally e dorsal para colher o cerebelo.
Em seguida, colher o cerebelo com a espátula. Todas as amostras terrestres submetidas com crânios entre 31 de janeiro de 2019 e 28 de fevereiro de 2019 tiveram informações sobre a presença de um pescoço e o método de necropsia coletados. Durante esse período, 170 cabeças foram necropsiadas com 18 espécies representadas.
52% foram devidamente decapitados. O restante tinha pelo menos uma vértebra anexada, incluindo três espécimes do corpo inteiro. Utilizou-se o método ventral em 75% das vezes.
Desses, os pescoços estavam presentes em 49. Três animais de grande porte foram submetidos e, em dois casos, foi utilizado o protocolo animal de grande porte. Um esquilo foi submetido com um crânio esmagado e simplesmente cortar a pele expôs o tecido cerebral para que nenhum dos métodos demonstrados fosse usado.
Os tecidos utilizados para fazer slides de microscopia e ou extraídos de métodos moleculares ao processar vários animais evitam contaminação cruzada usando novos instrumentos de luvas e uma área de trabalho limpa. Tenha cuidado ao realizar esses protocolos, pois os espécimes podem estar infectados com vírus da raiva ou outras doenças zoonóticas. Observe que objetos pontiagudos também podem estar presentes dentro dos espécimes.
