Esta técnica replica testes de estiramento biomecânico in vivo do plexo braquial em um leitão, servindo como um modelo animal clínico de grande porte altamente relevante. Esses métodos podem não apenas ajudar na compreensão dos mecanismos de lesão estuada, mas também podem relatar os valores do limiar de lesão para déficits funcionais e estruturais dentro do plexo braquial neonatal. Demonstrando o procedimento será Rachel Magee, uma estudante de pós-graduação do meu laboratório.
Após a confirmação da falta de reflexos palpebrais e de abstinência, coloque o porco anestesiado na posição supina na mesa de operação, com o membro superior em abdução para expor à região axilar. Coloque uma cortina sobre o animal e use uma lâmina de bisturi número 10 para fazer incisões sobre a pele marcada. A incisão midline está sobrepondo a traqueia até o terço superior do esterno, expondo o complexo de plexo braquial em ambos os lados da coluna.
Para expor um lado do plexo braquial do animal, uma incisão superior é feita da extremidade superior da incisão da linha média, correspondente ao C3, ao braço superior, e uma incisão inferior é feita a partir da extremidade inferior da incisão da linha média, correspondente ao T3, até o braço superior. Use fórceps em cada lado da incisão para separar o tecido do entalhe suprasternal ao longo da borda da clavícula para o braço superior enquanto poupa as veias cefálicas e maníacos. Utilizando tesoura, fórceps e dissecção contundente, solte o retalho superior para acessar a região cervical do plexo braquial, e a aba inferior para acessar a região torácica do plexo braquial.
Realize dissecção contundente em músculos superficiais para expor o plexo braquial. Em seguida, examine o plexo cuidadosamente para localizar bifurcações das divisões e identificar as regiões do plexo braquial abaixo das bifurcações, mais próximas do braço, como o cordão e o nervo e as regiões acima das bifurcações, mais próximas da coluna vertebral, como a raiz ou tronco. Para configurar o dispositivo de teste biomecânico, conecte a base do dispositivo a um carrinho e use grandes grampos C para anexar o atuador eletromecânico à base.
Conecte uma célula de carga de 200 newtons ao atuador e enrosque em um grampo com plexiglass acolchoado para evitar a concentração de estresse no local da fixação. Usando um tripé, conecte uma câmera que pode gravar até 100 quadros por segundo em uma resolução de 658 por 492 pixels e anexar cabos USB da câmera, atuador e célula de carga ao computador para integrar e sincronizar todos os componentes da configuração. Em seguida, conecte o computador, o atuador e carregue a célula em uma fonte de energia.
Para calibrar a célula de carga antes de gravar as cargas aplicadas, use a alça ajustável para definir o atuador em um ângulo de 90 graus, de modo que esteja alinhado verticalmente e verifique o ângulo com um prolongador. Abra o software da célula de carga e clique em Iniciar para mostrar uma leitura ao vivo da tensão. Em seguida, pendure pesos de zero a 1.000 gramas do grampo em incrementos de 100 gramas, registrando as tensões medidas em cada carga.
Quando as tensões tiverem sido registradas para todos os 10 pesos, calcule a inclinação e intercepte para determinar a equação linear das tensões e pesos. Para testes biomecânicos do nervo plexo braquial isolado, use uma tesoura fina para cortar o nervo e use um grampo personalizado para fixar o lado do corte do nervo. Rotule o segmento nervoso preso com tinta acrílica preta e coloque uma régua de um centímetro plana dentro do animal para definir a escala para a análise dos dados.
No software da câmera, coloque o campo de visão da câmera diretamente sobre os segmentos testados para permitir o monitoramento do movimento e/ou deslocamento dos marcadores e determinar a tensão real do tecido em um ponto de tempo específico. Regissore as medidas da linha de base, como a altura em que o nervo se insere no corpo a partir da mesa, a altura do grampo da mesa, o ângulo do atuador e o comprimento total do tecido. Abra o software de programação e clique em Executar.
Digite o nome do arquivo e o deslocamento e clique em Initialize e TARE. Clique em Iniciar para esticar o segmento plexo braquial. O tecido será puxado a uma taxa atribuída de 500 milímetros por minuto até que ocorra uma falha completa em qualquer segmento do tecido nervoso.
Em seguida, salve um arquivo de vídeo, a carga de tração aplicada, o deslocamento do tecido e a duração do teste, e registe o local de falha como o segmento em que o tecido se rompe. Neste teste representativo de quatro segmentos do plexo braquial, a carga de falha obtida foi de 8,3 newtons e a falha média da tensão foi de 35% para as amostras de tecido nervoso neonatal quando submetidas ao alongamento. Algumas regiões do nervo sofreram uma tensão maior do que outras, indicando uma lesão não uniforme ao longo do comprimento do nervo.
Os dados da câmera permitiram a identificação da localização da falha neste experimento como proximal ao foramen. É importante garantir que primeiro, o animal esteja profundamente anestesiado e não mostre sinais de dor ou desconforto, segundo, para calibrar a célula de carga, e terceiro, para fixar o tecido firmemente. Este modelo animal in vivo pode ser usado para estudar alterações funcionais e histológicas no tecido plexo braquial após diferentes graus de alongamentos e estudar cenários complicados de nascimento.
