Este método pode ajudar a responder a questões-chave relacionadas ao desenvolvimento, tratamento e diagnóstico do mesotelioma pleural humano. A principal vantagem desse modelo ortotópico pré-clínico confiável é que ele replica a progressão da doença humana e a patologia em um microambiente próximo ao encontrado em pacientes com mesotelioma pleural. Portanto, este modelo inestimável é de alto significado e o uso de imagens moleculares não invasivas permite o monitoramento longitudinal em consonância com o conceito de três R.
Antes de começar a preparar o sistema de anestesia e a área cirúrgica em uma coifa de fluxo laminar, pulverizando todas as superfícies com desinfetante. Coloque as gaiolas de FPS micro-isoladas na coifa desinfetada. Coloque uma almofada de aquecimento, solução povidone-iodo 30 medidor de seringa Hamilton, instrumentos de cirurgia de gaze e cotonetes e micropipettos e pontas na capa de fluxo laminar.
Uma vez que o mouse esteja devidamente anestesiado subcutâneo injete 0,05 miligramas por quilo de Buprinorphine para alívio da panela pós-operatória. Em seguida, coloque o mouse no lado direito em cima da almofada de aquecimento e limpe a área cirúrgica com solução povidone-iodo e faça uma incisão de 5 milímetros da pele. Limpe a gordura ao redor e os músculos com uma tesoura cega para expor as costelas.
Homogeneize a suspensão celular e carregue 50 microliters na seringa Hamilton certificando-se de evitar bolhas de ar. Limpe a agulha com 70% de álcool antes de cada injeção. Injete lentamente as células na cavidade pleural entre a sexta e a sétima costelas segurando a agulha em um ângulo de 30 graus e dois a três milímetros sob os músculos intercostais.
Mantenha a agulha debaixo das costelas para evitar injetar nos pulmões. Deve ser visível através dos músculos. Quando terminar, feche a ferida com três a quatro suturas absorvíveis e armazene o mouse em um ambiente aquecido até acordar.
Ao realizar a implantação é muito importante posicionar corretamente a agulha para limitar a profundidade da penetração da agulha. Use uma almofada de aquecimento de câmara de aquecimento, ou lâmpada infravermelha para pré-aquecer os camundongos a 30 graus celsius por 30 minutos antes da injeção de fluor-18(FDG)Usando uma calculadora de dose prepare três a quatro doses de fluor-18(FDG)em 150 a 200 microliters de soro fisiológico em 1 mililitro de insulina siring. Certifique-se de gravar todas as vezes das injeções de dose de radioatividade e tomografias pet, a fim de calcular valores de absorção padrão ou SUVs.
Pese os camundongos e injete intravenosamente o fluor-18(FDG)Após a injeção deixar os ratos acordados em condições quentes por 45 minutos. Em seguida, carregue os ratos na cama do scanner transfira a cama para um scanner e submita os animais para uma tomografia centrada nos pulmões. Mova a cama para o subsistema PET insira a aquisição uma hora após a injeção de fluor-18 (FDG) por uma duração de 15 minutos.
Em seguida, remova os ratos da câmara de imagem e permita que eles se recuperem em sua gaiola mantendo-os em uma área dedicada à decomposição radioativa. Antes da análise da imagem reconstruir tomografias computadorizadas e pet, conforme descrito no manuscrito. Calibrar as imagens escaneando um cilindro fantasma e co-registrar automaticamente as varreduras de acordo com a solução de software incorporada.
Para analisar as imagens, carregue os dados ct como referência clicando no ícone de dados abertos. Em seguida, carregue os dados PET como entrada clicando no ícone de dados do anexo. Ajuste a escala de cores para ct e PET para contrastar imagens para inspeção visual.
Selecione a ferramenta ROI 3D no menu suspenso clique em adicionar ROI e nomeie os pulmões do arquivo. Clique em algoritmos de segmentação e limiarização de bairro e, em seguida, defina a entrada como plano de fundo e imagem como árbitro. Digite min e max de acordo com os valores de densidade pulmonar do rato.
Inspecione os pulmões renderizados 3D clicando no ícone VTK. Em seguida, clique em mostrar o ícone da tabela e recupere o volume na tabela gerada. Para analisar o fluor-18(FDG)em tumores, converta imagens PET em SUV, selecionando aritméticas do menu suspenso.
Selecione a multiplicidade escalar e use NP um como selecionado e defina o becquerel por mililitro como fator SUV como escalar. Por fim, selecione a ferramenta ROI 3D no menu suspenso e clique em adicionar ROI e nomear os tumores de arquivo. Clique no modo de pintura 3D e na esfera desmarcar apenas 2D e ajustar o tamanho da forma para cercar os tumores.
Clique no ícone da tabela de exibição e recupere o valor máximo do SUV da tabela gerada. As renderizações 3D das tomografias dão uma visão geral da localização do tumor mpm e permitem o cálculo dos volumes pulmonares. As medidas de volume pulmonar diminuem significativamente ao longo do tempo após a injeção de tumores intrapleurais.
O PET scan fornece informações valiosas sobre o estado metabólico dos tumores MPM. Os tumores foram distinguíveis duas semanas após o enxerto e a absorção de fluor-18 (FDG) foi quantificada pela extração de SUVs que estavam positivamente correlacionados com o número de dias após a injeção. Além disso, os volumes pulmonares e a avidez do fluor-18 (FDG) se correlacionam entre si com um R quadrado de 0,6 que suporta a força dessas medidas para monitorar o desenvolvimento de tumores ortotópicos mpm.
Após esse procedimento, outros métodos como histologia, imunohistoquímica e citometria de fluxo podem ser realizados a fim de responder a questões ortobiológicas, como o estado de proliferação e característica fenotípica dos tumores e do microambiente. Para concluir, essas técnicas pré-clínicas abrem caminho para os pesquisadores explorarem novas estratégias de diagnóstico e tratamento do mesotelioma pleural. Além disso, o uso de imagens moleculares garante a rápida tradução de novos achados para a clínica.
