A análise automatizada da marcha é um método amplamente utilizado para avaliar modelos de matrícula de recuperação funcional de lesão, reparo e regeneração do nervo periférico. O método pode ser usado para estudar alterações na marcha após lesão nervosa periférica, relacionando-se tanto à função motora quanto sensorial do nervo. Pesquisadores novos no método podem ter dificuldades na aquisição de dados de alta qualidade.
Obstáculos típicos são treinamento animal adequado e calibração precisa de hardware e software. Durante as sessões de treinamento e no dia do teste, desligue todas as fontes de luz na sala de teste comportamental e enfrente a tela do computador para aquisição de dados longe da câmera para evitar que sua luz interfira com a câmera. Confirme que o dispositivo está instalado em posição estável de forma a evitar qualquer forma de vibração, e leve os ratos para a sala de teste comportamental em sua própria gaiola doméstica por pelo menos 30 minutos antes do teste, No primeiro dia de treinamento, segure suavemente um animal sob seu tronco e coloque-o cuidadosamente na entrada da passarela.
Deixe o rato explorar a abertura do corredor sem qualquer interferência, e esperar até que o animal cruze voluntariamente a passarela para chegar à sua gaiola sem qualquer estímulo externo ou motivação. No segundo dia de treinamento, permitem que os animais se acostumem a entrar na passarela e voltar para sua gaiola sem hesitação. No terceiro dia de treinamento, confirme que os animais aprenderam a atravessar a passarela a uma velocidade uniforme sem hesitação, cheiro ou outros movimentos exploratórios.
Na quarta e quinta, repita o treinamento para reforçar o procedimento de teste. No dia do experimento, use limpador de vidro comercial e um rodo para limpar a parte superior e inferior da passarela, tomando o cuidado de remover todo o fluido das extremidades da passarela. Coloque os ratos mais leves e pesados na passarela e selecione uma câmera registrada na aba de configuração para permitir que o ganho da câmera, luz vermelha do teto, luz verde da passarela e limiar de intensidade verde sejam ajustados para garantir uma detecção ideal de impressão da pata para todos os animais na análise.
Em seguida, clique em abrir a aquisição e adquirir um instantâneo da passarela limpa vazia para ser usada como referência durante todo o procedimento de aquisição de dados. O status mudará de esperar por instantâneo para pronto para aquisição. Clique em iniciar a aquisição.
O status mudará de pronto para aquisição para esperar a corrida começar. Quando a câmera estiver pronta, coloque um rato na passarela e siga o movimento do animal na tela do computador. Note, a mudança de status de esperar a execução para começar a gravar executada.
No final da análise, clique em classificar na guia explorador experimental do ensaio a ser classificado e reproduza a execução adquirida em velocidade normal para determinar se os dados estão em conformidade com os requisitos de classificação. Clique em classificar automaticamente para classificação automática das impressões da pata pelo software. Para o cálculo correto dos padrões normais de sequência de passos, certifique-se de que o algoritmo de classificação não seja confundido por impressões de pata não visíveis, levando a NSSP falho, e que apenas impressões de patas que são detectáveis enquanto a pata contralateral também é visível para cálculos NSSP estão incluídas.
Para análise estatística dos dados, clique em exibir estatísticas para obter uma visão geral abrangente das estatísticas de execução. Em seguida, selecione arquivo e exportação, para exportar as estatísticas de execução ou teste em um software de planilha. Após lesão no nervo ciático, os ratos usam o calcanhar da pata apenas para suporte de peso e o membro é movido em um movimento circundutor varrendo.
Portanto, as alterações locomotorizadas através da análise de marcha automatizada tornam-se aparentes por uma área de impressão significativamente reduzida e um tempo de oscilação significativamente aumentado. A ressecção do nervo femoral resulta na denervação do músculo quadríceps da coxa, prejudicando a extensão do joelho e induzindo a hiperflexão da articulação do tornozelo com elevação consecutiva do calcanhar correspondente. A partir da quarta semana pós-operatória, a reenervação do quadríceps pelo nervo femoral regenerador leva à reversão dessas alterações.
Como o músculo quadríceps da coxa também desempenha um papel na fase de oscilação da respectiva pata, o tempo de oscilação é muito prolongado em ratos com lesão no nervo femoral. A análise da marcha revela impressões de patas marcadamente alteradas após contusão na medula espinhal torácica. A contusão medular no nível torácico 11 também resulta em uma diminuição da razão da área de impressão, um incremento da razão de tempo de oscilação.
O índice de regularidade relacionado à coordenação também diminui na segunda semana pós-operatória, enquanto a base de apoio das patas traseiras apresenta um aumento acentuado. Ao usar a análise automatizada do portão para avaliar a recuperação funcional em roedores, certifique-se de treinar cuidadosamente os animais e ser meticuloso ao fazer qualquer ajuste de software ou hardware. Utilizando-se análise automatizada da marcha, a lesão e a regeneração do sistema nervoso central e periférico podem ser avaliadas em vários modelos de roedores, incluindo modelos de nervo formal ainda não estudados, como o nervo mediano.
