Quais eventos ocorrem dentro das meninges que contribuem para a dor de cabeça na ausência de lesão tecidual? Ao contrário do uso prévio de modelos de estimulação dural em ratos, permite o uso do extenso catálogo de camundongos geneticamente modificados. A luta primária seria localizar a intersecção das suturas lambdoidal e sagital, palpando o crânio com o injetor.
Para começar, crie os infusores do mouse modificando uma cânula interna e infusor disponíveis comercialmente com uma tampa de plástico de sílica fundida que é ajustável e insere em uma cânula guia de 28 bitola. Use uma pinça para ajustar a tampa de plástico de sílica fundida no infusor sem dobrar o infusor. Ajuste o infusor a um comprimento de 6 milímetros medidos desde a ponta do infusor até a borda da tampa plástica de sílica.
Realize injeções piloto para outras cepas do mouse e ajuste o comprimento para injetar precisamente na dura mater. Em seguida, conecte a extremidade longa do infusor ao tubo plástico de oito polegadas ou mais para conter o volume de cinco microliters. Insira o tubo, garantindo a cobertura completa da parte metálica e da parte superior da rolha plástica localizada no infusor para evitar que as bolhas de ar se acumulem na linha.
Em seguida, encha a microsinga e conecte a outra extremidade da tubulação a uma microsinga de vidro de 10 microliteres, garantindo a vedação apertada sobre a parte metálica da seringa. Em seguida, enchimento da seringa com cinco microlitres de PBS ou fluido intersticial sintético ou outros veículos de escolha para evitar a formação de bolhas de ar. Se necessário, inunde a linha com o veículo para dissipar bolhas pré-formadas.
Alternativamente, pré-encha a seringa e, após a conexão, empurre o fluido através da linha conectada. Uma vez que a linha cheia de veículos esteja funcionando eficientemente, carregue cinco microliters da solução na seringa Hamilton. Uma vez que o rato esteja completamente anestesiado, aplique pomada oftalmica estéril nos olhos e raspe a cabeça do animal, em seguida, desinfete a pele com iodo de povidona e etanol.
Estante a cabeça do animal com uma mão e segure o infusor com a seringa carregada de drogas na outra. Em seguida, usando um infusor, teste cuidadosamente, localize e verifique a junção das suturas sagital e lambdoidal no crânio do rato. Uma vez que a sutura esteja localizada e o infusor esteja no lugar, devagar e suavemente mexa o infundador para frente e para trás até que o infusor in piercee através da pele e cai para baixo na junção todo o caminho até a rolha de plástico, garantindo a inserção de toda a ponta infusora de 6 milímetros na junção.
Em seguida, empurre lentamente o êmbolo da seringa para expulsar os cinco microliters de fluido para dentro da dura-mater. No dia do teste, pós-aclimatação para a sala, remova um rato junto com o copo da respectiva câmara. Mantenha o copo na posição horizontal para o peso corporal distribuído uniformemente, pois a distribuição desigual de peso pode alterar ou impedir a resposta dos animais.
Coloque o copo com o mouse em uma almofada absorvente mantida na mesa abaixo do rack de teste. Então, para testes periorbitais von Frey, coloque o filamento von Frey de 07 gramas no centro do rosto entre os olhos e aplique pressão suficiente sobre o filamento para fazer com que o cabelo von Frey se curve em uma formação em forma de C. Mantenha o contato com filamentos por cerca de três a cinco segundos ou até que o mouse deslize o filamento usando a cabeça ou as patas.
Para seguir o método de up-down de Dixon, aplique o próximo filamento de peso mais baixo se o mouse responder ao filamento, caso contrário, aplique filamento de peso mais alto. O procedimento foi utilizado para examinar os efeitos da prolactina dural na hipersensibilidade facial mecanicamente evocada. Os resultados do estudo demonstraram redução significativa dos limiares de abstinência facial em camundongos ICR femininos em resposta a cinco microgramas de prolactina dural.
Uma dose dez vezes menor de 5 microgramas de prolactina também mostrou limiares reduzidos de abstinência facial, semelhante a uma alta dose de prolactina. As injeções de prolactina produziram comportamentos espontâneos relacionados à dor, que foram avaliados via careta. Dural 5 microgramas de prolactina causaram uma grimacing significativa em camundongos fêmeas e demonstraram ainda um papel claro para a prolactina dural em comportamentos femininos semelhantes à enxaqueca Testes comportamentais usando filamentos von Frey ou careta facial para determinar se o estímulo, na ausência de lesão, causa uma resposta à dor de cabeça.
Esta técnica agora pode ser usada para investigar mecanismos de base inflamatória nas meninges sem preocupação com ressalvas causadas por craniotomias e inflamação subsequente.
