A análise de microscopia de vídeo de alta velocidade é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de primeira linha da discaquiesia ciliar primária. Esta técnica é relativamente fácil de executar, rápida, econômica, e em mãos experientes outra ferramenta muito confiável. E é aplicável para pacientes de todas as faixas etárias.
A microscopia de vídeo também revela função ciliária secundária. Como, por exemplo, devido a infecções bacterianas ou virais. Mas tem sido usado principalmente para diagnosticar a diskinesia ciliar primária.
Os cientistas usam esse método também para visualizar processos intracelulares ou funções biológicas em células vivas. Tina Peromaa, nossa técnica de laboratório.
Antes de coletar as células epiteliais respiratórias, peça ao paciente para assoar completamente o nariz. Quando o paciente estiver pronto, mantenha a cabeça do paciente fixada com uma mão e use uma escova interdental de 0,6 milímetros de tamanho na outra mão para escovar o turbinado inferior da narina para coletar tiras celulares epiteliais suficientes. Solte as tiras celulares colhidas em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro contendo o DMEM nutrido celular.
Depois de fechar a tampa do tubo de microcentrifuuge segure o tubo contra a fonte de luz e agite o tubo para descobrir tiras de células colhidas e conglomerados. Mais tarde, coloque os tubos de microcentrifuuge com as tampas devidamente fechadas em uma caixa de poliestireno. Antes de fechar a caixa, certifique-se de que os tubos estejam fixados dentro da caixa.
Em seguida, adicione uma embalagem fria à caixa, evitando congelar o espécime. Depois de remover os tubos de micro centrífugas contendo as amostras da caixa de poliestireno, coloque um tubo sob uma capa da unidade de aquecimento do microscópio para aquecer até 37 graus celsius para a análise de microscopia de vídeo de alta velocidade ou HSVMA. Em seguida, inicie a câmera e o software da unidade de vídeo no computador.
Use uma pipeta para colher uma pequena amostra e coloque duas gotas da amostra em uma cuvette. Cubra a cuvette com uma tampa antes de colocá-la sob o microscópio. Use uma lente de imersão em óleo com uma ampliação de 100x e coloque uma gota de óleo de imersão na superfície da óptica.
Ao se aproximar da parte inferior do prato com a lente do microscópio, procure os aglomerados celulares sem glóbulos vermelhos e com baixo teor de muco. Depois de encontrar uma região representativa de interesse, ou ROI, concentre-se em um grupo de cilia batendo com os maiores movimentos de cílios e grave uma sequência de vídeo. Grave as células com batidas cilia lado sábio e de cima.
A análise representativa mostra movimentos cilia normais vistos de lado sábio e de cima. A amostra de uma discnesia ciliar primária, ou paciente pcd, com uma mutação no gene DNAH11 demonstrou o padrão clássico rígido minimamente móvel da batida ciliar. Quando visto de lado e acima.
Em outro paciente pcd com a mesma mutação, observou-se um padrão hipercinético, mas ineficiente diferente da cília de espancamento. Um padrão patológico de batida ciliar e frequência de batida ciliar também foram observados em um paciente com infecções recorrentes nas vias aéreas superiores. Se o procedimento de escovação for realizado rigorosamente, a análise do HSVMA não poderá ser realizada, pois as células epiteliais ciliadas foram cobertas com um revestimento de glóbulos vermelhos.
O passo mais importante no procedimento é obter células respiratórias suficientes das escovas e manter esse material bem preservado para a análise de vídeo. O material restante pode ser usado para realizar microscopia eletrônica ou microscopia imunoflourescense para detectar possíveis defeitos estruturais em cílios ou para revelar defeitos e a síntese de proteínas ciliares.
