1. Lise e Espalhando um Núcleo de uma biópsia de blastômeros <ol><li> Tampão de lise celular para as células se espalhando (0,2% Tween20 em 0,01 M HCl, pH 2.0) deve ser preparada 24 horas de antecedência e armazenado a -20 ° C. Prepare 100 mL e 20 mL de filtro para um recipiente estéril 30 mL universal, utilizando uma seringa estéril 20 ml e filtrar seringa. Dispense um alíquotas mL em 10-15 1,7 mL tubos de microcentrífuga estéril, fechar e rotular os tubos antes do congelamento. É recomendável ter dois lotes diferentes é o uso, o novo lote eo lote anterior, que foi testado e pode ser usado se o novo lote é insatisfatória. </li><li> Descongelar o tampão de lise em temperatura ambiente 30 minutos antes do procedimento de biópsia. Para fins práticos, a temperatura de trabalho será entre temperatura ambiente e temperatura da mão. </li><li> Marcar um círculo pequeno (aproximadamente 5 mm de diâmetro) na parte de baixo um slide amina revestido (por exemplo, Genetix), utilizando uma caneta de diamante e pré-label o slide com o número do processo, número do slide único, e data da biópsia. Use um slide separado para cada blastômero em ordem numérica, e etiqueta com o número de embriões. As lâminas devem ser rotulados com um lápis duro, tais como 4H, e &quot;apagados&quot;, com uma luva de látex para remover qualquer poeira de grafite. </li><li> Coloque um pequeno volume de tampão de lise dentro do círculo. </li><li> Transferir os blastômeros biopsiados no tampão de lise. Se necessário, adicionar tampão de lise dentro do círculo até que a célula começa a lise, a célula deve lisar completamente e citoplasma dispersar antes da seca buffer. </li><li> Observe o núcleo para assegurar que ela permaneça dentro do círculo e não é perdida; se a célula não tem um núcleo ou tem múltiplos núcleos, a biópsia outra célula. </li><li> Deixe o slide para ar seco em temperatura ambiente. </li></ol> 2. Hibridização In Situ de um único núcleo de blastômeros <ol><li> Prepare uma série de etanol (70, 90 e 100%) feita em água destilada estéril. </li><li> Ligue e definir o bloco quente (por exemplo Hybaid Omnislide ou Vysis Hybrite) a 75 ° C. </li><li> Sondas de descongelar, vortex, e centrifugar. Os reagentes devem ser testemunhado e verificou-se correta antes de fazer a mistura da sonda. Volumes da pipeta, conforme especificado pelo fabricante para fazer a mistura em uma sonda de 0,65 mL tubo de microcentrífuga estéril e vortex e centrifugar antes de usar. O volume total da mistura de sonda deve ser suficiente para permitir que 2 mL por núcleo a ser testado e arredondado para aproximação de 10 mL para permitir uma margem de segurança. </li><li> Pré-lavagem das lâminas em frascos coplin usando tampão fosfato (PBS) (pH 7,0: 0,14 M NaCl, 3 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4) por 5 min à temperatura ambiente. </li><li> Enxaguar as lâminas duas vezes em água destilada estéril. </li><li> Desidratar as lâminas com a série de etanol (70, 90 e 100%) para cada 2 min à temperatura ambiente e ar seco. Garantir slides são totalmente imerso e se todo o pó de grafite flutua à superfície, banhe-se com um tecido limpo. </li><li> Registrar a posição do núcleo dentro do círculo, visualizando com um microscópio de contraste de fase. </li><li> Desidratam com etanol 100% por 2 min à temperatura ambiente e ar seco. </li><li> Aplicar 2 mL da mistura de sonda, e cubra com um 9 x 9 mm lamela (um quarto de um jovem de 18 x 18 mm no.1 lamela). </li><li> Selar as bordas da lamínula com borracha de cimento (por exemplo, Gum Cow; Proofing Cow). </li><li> Codenature as lâminas sobre um bloco quente a 75 ° C por 5 min, e depois hibridizam os slides durante a noite (16-20 h) em câmara úmida a 37 ° C. Mistura sonda que consistem inteiramente de sondas centrômero (ou seja, para casos ligados ao sexo) vai dar um resultado satisfatório após 60 min de hibridização. </li><li> Prepare um banho de água com jarros suficiente coplin e calor a 71 ° C. </li><li> Preparar um padrão de citrato 0.4x salina (SSC) solução de lavagem rigorosa (pH 7,0 a 71 ° C, 0,06 M NaCl, 6 mM C 6 H 5 Na 3 O 7 .2 H 2 O) e calor em banho-maria. </li><li> Pipetar 50 mL de lavagem rigorosa por coplin jar requeridos e verificar se a temperatura é de 71 ° C imediatamente antes de usar usando um termômetro limpo. </li><li> Remova cuidadosamente o cimento de borracha de cada slide e enxaguar a lamela usando% SSC/0.05 4x Tween20 (pH 7,0) em temperatura ambiente. </li><li> Lavar as lâminas na lavagem SSC 0.4x rigorosas a 71 ° C por 5 min. Lavar não mais de 6 slides por frasco coplin. </li><li> Lavar as lâminas em Tween20 SSC/0.05% 4x em temperatura ambiente por 2 min. </li><li> Se a mistura contém sonda sonda indiretamente rotulado (s), drenar o excesso de líquido de slides e aplicar 20 mL de anticorpo fluorescente conjugado com um quadrado 20 mm x 20 de Parafilm. </li><li> Incubar em câmara úmida a 37 ° C por 15 min. </li><li> Remover o Parafilm e lavar uma vez em Tween20 SSC/0.05% 4x em temperatura ambiente por 2 min. </li><li> Lavar duas vezes por 2 min em PBS umt temperatura ambiente e drenar os slides. </li><li> Aplicar 6 mL de DAPI / Vectashield (160 ng de 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole dicloridrato em 1 mL de Vectashield meio de montagem, Vector Laboratories) para a 22 x 22 mm não. 0 lamela e inverter a deslizar sobre a lamínula. </li><li> Blot e selar as bordas da lamínula com esmalte de unha clara. </li></ol> 3. Análise, usando um microscópio de fluorescência devidamente equipados com filtros adequados para a sondas utilizadas. <ol><li> Sinais de pontuação através da visualização direta utilizando um microscópio de fluorescência e única filtros passa-banda para cada fluorocromo no ensaio. Cada núcleo deverá ser marcado por dois analistas. A orientação geral deve levar a pontuação de um único sinal, onde dois sinais espaçados são menos do que um domínio (sinal de largura), para além, no entanto, o julgamento baseado na experiência precisa ser exercido para interpretar os sinais de intensidade variável, tamanho, e separação. </li><li> Use software de imagem (por exemplo, Isis, MetaSystems, Altlussheim, Alemanha; Cytovision, Genetix) para capturar uma imagem do núcleo para confirmação do diagnóstico visual, e para arquivamento de imagens como parte de um plano de garantia de qualidade laboratorial. </li></ol> 4. Resultados representativos: Metáfase e interfase núcleos de cultura de linfócitos do sangue periférico deve ser examinada para confirmar que as sondas selecionados são específicos para os cromossomos translocação, informativo para os pontos de interrupção (as sondas subtelomere deve hibridizar apenas para os segmentos translocados ea sonda centromérica (s) à centric segmento (s)) e os sinais em núcleos interfásicos deve ser brilhante e discreta. Marcar o número de sinais para cada sonda em 100 núcleos interfásicos de cada parceiro é recomendado para avaliar a eficiência do ensaio. Neste caso, dois sinais foram marcados em 95% -99% de núcleos para cada sonda. A Figura 1 mostra uma metáfase e núcleo interfásico de uma preparação para uma translocação recíproca entre os braços curtos dos cromossomos 5 e 9. Sinais em núcleos interfásicos de blastômeros de embriões deve ser brilhante e discreta e marcou usando filtros de banda separada para passar as cores usadas. A Figura 2 mostra um núcleo blastômero com um padrão de sinal normal (2 cópias para todos os loci testados) consistente com um complemento cromossômico normal ou equilibrado para o cromossomo 5 e 9, e um núcleo com um padrão anormal de sinal consistente com um produto desequilibrado da translocação que tem monossomia (uma cópia) para o segmento translocado do cromossomo 5 e trissomia (três cópias) para o segmento translocado do cromossomo 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1 A disseminação metáfase e um núcleo interfásico preparados a partir de cultura de linfócitos do sangue periférico de um portador de uma translocação recíproca entre os braços curtos dos cromossomos 5 e 9, com pontos de interrupção em 5p14.3 e 9p24.1:. 46, XY, t (5 ; 9) (p14.3;. p24.1) ish t (5; 9) (5ptel48, 9ptel30 +; 9ptel30, 5ptel48 +, 9cen +). Sondas de FISH foram selecionados para ambos os segmentos translocados (5p14.3 → 5pter, vermelho Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, verde Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) eo segmento centric do cromossomo 9 (9p24.1 → 9qter, azul Abbott CEP 9 alfa satélite SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Signals em interfase núcleos de blastômeros do dia-3 embriões capturados usando um filtro diferente para cada fluorocromo e se fundiram para formar uma imagem composta. (A) Dois sinais para cada sonda indicando duas cópias de cada locus, o que é consistente com um complemento normal ou equilibrado para os cromossomos translocação. (B) Um sinal vermelho, três sinais verdes e dois sinais de azul, indicando uma cópia do segmento translocado do cromossomo 5, três cópias do segmento translocado do cromossomo 9 e duas cópias do segmento central do cromossomo 9, que é consistente com adjacentes -1 segregação da translocação resultando em um produto desequilibrado com monossomia para 5p14.3 → 5pter e trissomia para 9p24.1 → 9pter.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A aplicação de hibridização fluorescente in situ (FISH) para uma célula de embrião único (blastômero) apresenta desafios especiais, tanto em aspectos práticos e na interpretação do padrão de sinal. A célula de biópsia precisa ser espalhado em uma área pré-definida no slide, a fim de facilitar a sua localização FISH seguinte; extremo cuidado deve ser tomado para garantir que a célula é lisada, que o citoplasma tem sido dispersa, e que o núcleo é visível e intacta, e, como o diagnóstico depende dos resultados a partir desta única célula, marcando rigorosos e interpretação diretrizes devem ser aplicadas. No entanto, em mãos experientes, o peixe é uma técnica robusta para a pré-implantação de diagnóstico genético (PGD) na prática clínica. O princípio da PGD por FISH é que as sondas dirigidas a públicos específicos DNA marcadas com fluorocromos diferentes ou haptenos pode ser usado para detectar o número de cópias de loci específicos, e, assim, para detectar desequilíbrio associado a segregação de cromossomos meióticos de rearranjos cromossômicos (1), incluindo Robertsoniana translocações, translocações recíprocas, inversões, e rearranjos complexos (2). FISH também pode ser usado para selecionar embriões do sexo feminino em famílias com doença ligada ao X, para o qual não existe um teste de mutação específica (3, 4). Mais controversa, FISH também tem sido usada para triagem de aneuploidias cromossômicas esporádicas, a fim de tentar melhorar a eficiência de reprodução assistida (5, 6), no entanto, o valor preditivo deste teste usando FSIH é susceptível de ser inaceitavelmente baixos na maioria das pessoas mãos e não é recomendado para uso clínico de rotina (7). Este artigo concentra-se nos aspectos técnicos e as limitações de FISH aplicada ao diagnóstico clínico de uma única célula. Métodos de divulgação e fixação blastômeros única incluem metanol / ácido acético (5, 8), Tween / HCl (9), e uma combinação de Tween / HCl e metanol / ácido acético (10). Variações incluem o tratamento hipotónico das células antes da divulgação e / ou tratamento de pepsina e paraformaldeído após a fixação. O método deve ser devidamente validados para o laboratório (14). O método de Tween / HCl é descrito em detalhes neste artigo. O método de Tween / HCl é tecnicamente simples e altamente reprodutível em laboratórios diferentes. Este método pode ser usado para preparar núcleos único para o diagnóstico FISH de determinação do sexo e rearranjos cromossômicos com uma precisão de diagnóstico aceitável (7). Mistura sonda pode combinar diretamente e indiretamente rotulados sondas marcadas, e sondas de diferentes fabricantes. Sondas para conhecer regiões cromossômicas polimórficas (11, 12), ou aqueles que se sabe cross-hibridizar de forma significativa com outros cromossomos (13) devem ser evitados, embora possa ser usado se mostrado para ser mais específico e adequado para PGD por testes antes de ambos os parceiros reprodutivos . Fluorocromos disponível / haptenos e estratégias para sondas de discriminar incluem o seguinte: Texas Red (TR), fluoresceína isotiocianato (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, sondas biotiniladas detectado com TR-avidina, FITC-avidina, ou Cy-5 estreptavidina (visualizada usando um filtro FarRed), uma mistura de sondas de vermelho e verde para produzir um sinal amarelo, uma segunda rodada de hibridação e uma terceira cor criado por captura seqüencial de SpectrumOrange usando um TexasRed e um filtro SpectrumGold). Um conjunto de sonda contendo três sondas, específicas para as regiões do centrômero cromossomos X e Y e um autossomo, é recomendado para a determinação do sexo (14), a sonda autossômica é usado para estabelecer ploidia e, assim, para diferenciar entre trissomia do X (2n, 47 , XXX) e triploidia (3n, 69, XXX), e entre tetrassomia X (48, XXXX) e tetraploidia (4n, 92, XXXX). A sonda típico set aplicada neste cenário é a mistura AneuVysion Abbott contendo alfa-satélite X, Y, e 18; este conjunto de sonda mostrou ter uma taxa de polimorfismo muito baixa e, portanto, o tratamento pré-work-up dos parceiros reprodutivos não é necessário (14). O mix de sonda para qualquer rearranjo específicas devem: O ideal é conter sondas, pelo menos, suficiente para detectar todos os produtos esperados do rearranjo com desequilíbrio cromossômico. Se isso não for possível, sonda mistura onde os produtos detectados desequilibrada foram avaliados como não-viáveis ​​em uma gravidez reconhecível e são susceptíveis de ter prevalência muito baixa pode ser aceitável (14). Ser testada em cultura de linfócitos metáfases de ambos os parceiros reprodutivos. Pelo menos dez spreads metáfase devem ser examinados para a especificidade da sonda, polimorfismos e hibridação cruzada, e, para o portador de rearranjo cromossômico, para garantir que as sondas hibridizam como esperado para os diferentes segmentos do rearranjo. Além disso, pelo menos 100 núcleos interfásicos de essas preparações devem ser marcados para avaliar a especificidade do sinal, brilho e singularidade (14). Commercial sets PGS sonda estão disponíveis (por exemplo, Abbott MultiVysion PB ou PGT), tendo como alvo os cromossomos mais freqüentemente encontrado para ser aneuplóides em produtos da concepção, e que compreende uma única sonda por cromossomo alvo. Tipicamente, o núcleo pode ter um segundo de hibridização com sondas para os cromossomos adicionais que fornecem um ensaio para os cromossomos 13, 15, 16, 18, 21, 22, e XY (14). O valor preditivo deste teste usando a divulgação e técnica de FISH aqui descrito é provável que seja um nível inaceitavelmente baixo nas mãos da maioria das pessoas e não é recomendado para uso clínico de rotina (7, 15). Técnicas como a hibridização genômica comparativa (CGH) aplicados a células individuais são capazes de teste para o número de cópias de cada cromossomo (Wilton et al. 2001), eo uso de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) e matrizes de análise quantitativa (Wells et al . 2008) ou genotipagem &quot;karyomapping&quot; (Handyside et al. 2009) são técnicas alternativas promissoras para detectar aneuploidias cromossômicas. No entanto, o limite de resolução e precisão para o desequilíbrio segmento permanece incerta e é provável que FISH continuará a ser a técnica de escolha para rearranjos cromossômicos envolvendo pequenos segmentos.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Pré-implantação de diagnóstico genético (PGD) é uma alternativa criada para diagnóstico pré-natal, e envolve a seleção de pré-implantação de embriões a partir de uma coorte gerada pela tecnologia de reprodução assistida (ART). Esta seleção pode ser necessária por causa da doença monogênica familiar (fibrose cística, por exemplo), ou porque um dos parceiros traz um rearranjo de cromossomos (por exemplo uma translocação recíproca de duas vias). PGD ​​está disponível para casais que tiveram filhos anteriores afetadas, e / ou no caso de rearranjos cromossômicos, abortos de repetição ou infertilidade. Oócitos aspirados estimulação ovariana seguintes são fertilizados por em imersão in vitro do sêmen (FIV) ou por injeção intra-citoplasmática de um espermatozóide individual (ICSI). Pré-implantação de clivagem estágio embriões são biopsiados, geralmente pela remoção de uma única célula no dia 3 pós-fertilização, ea célula biópsia é testado para determinar o estado genético do embrião. Hibridização fluorescente in situ (FISH) no núcleo fixo de células biopsiadas com alvo específico sondas de DNA é a técnica de escolha para detectar o desequilíbrio do cromossomo associado com rearranjos cromossômicos, e para selecionar embriões do sexo feminino em famílias com doença ligada ao X para os quais existe nenhuma mutação específica do teste. FISH também tem sido usado para embriões de tela para aneuploidia cromossômica espontânea (também conhecido como PGS ou PGD-AS), a fim de tentar melhorar a eficiência de reprodução assistida, no entanto, o valor preditivo deste teste usando a divulgação e técnica de FISH descritas aqui é provável que seja um nível inaceitavelmente baixo nas mãos da maioria das pessoas e não é recomendado para uso clínico de rotina. Descrevemos a seleção de sondas adequadas para uma única célula FISH, técnicas de espalhamento de núcleos de blastômeros, e hibridização in situ e marcando sinal, aplicado a PGD, em um ambiente clínico.

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FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Este artigo descreve a seleção de sondas adequadas para uma única célula FISH, técnicas de espalhamento de núcleos de blastômeros, e hibridização in situ e marcando sinal, aplicada ao diagnóstico genético pré-implantação (PGD) em um ambiente clínico.

FISH para diagnóstico pré-implantação Genética

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K visualizações.  Guy’s & St Thomas’ Centre for Preimplantation Genetic Diagnosis. Este artigo descreve a seleção de sondas adequadas para uma única célula FISH, técnicas de espalhamento de núcleos de blastômeros, e hibridização in situ e marcando sinal, aplicada ao diagnóstico genético pré-implantação (PGD) em um ambiente clínico.

Vídeo: FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Transferência de genes para insuficiência cardíaca isquêmica em um modelo pré-clínica

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Medicina

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Ultrassom transabdominal para diagnóstico de gravidez no Cervo Muntjac de Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

diagnóstico de<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Aperto - fatores-chave para o exame clínico

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Indução de Aterosclerose Acelerada em Camundongos: O Modelo de "Lesão por Fio"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, uma plataforma baseada em computador para auxiliar os médicos no diagnóstico e análise Cardiovascular

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Consenso internacional de especialistas e recomendações para diagnóstico de ultrassom pneumotórax neonatal e procedimento de toracentese guiado por ultrassom

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

Diagnóstico e Tratamento Cirúrgico da Espondilodiscite Humana de Brucellar

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Testando acetilcolina seguida de adenosina para diagnóstico invasivo de distúrbios vasomotores coronários

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Mensuração da Produção de Lactato Miocárdico para Diagnóstico de Microvascular Coronariano

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Teste de ativação basófila para diagnóstico de alergia

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...