Pegue um tecido tratado com nanopartículas e corte-o em amostras quadradas de 50 milímetros por 50 milímetros. Preparar as culturas noturnas de micróbios de interesse, inoculando as colônias isoladas das placas de pureza para caldo de soja Trypticase estéril. Incubar a 35 graus Celsius por 18 a 24 horas.
Diluir as culturas noturnas para 150 milhões de UFC por mililitro ou correspondendo à turbidez do padrão de 0,5 McFarland. Em seguida, para determinar o volume apropriado de culturas para picar, adicione uma série de volumes da cultura de caldo diluído nas amostras de tecido e escolha o volume de tal forma que a amostra de tecido absorva totalmente a água e não deixe líquido residual ou livre. Aumente o volume de cada cultura nas amostras colocadas em placas de Petri estéreis.
Da mesma forma, realizar o controle negativo com o mesmo tipo de amostras de tecido não tratadas para cada teste correspondente. Para recuperar micróbios por contagens de placas viáveis, seque ao ar as amostras inoculadas dentro das placas de Petri à temperatura ambiente durante os períodos de contato necessários a serem testados. Transfira as amostras assepticamente para separar tubos de centrífuga estéreis e rosqueie bem as tampas.
Adicione o caldo Letheen ou quaisquer tampões neutralizantes relevantes para fazer uma diluição de 1:100. Após o fechamento dos tubos da centrífuga, faça um vórtice por um minuto em velocidade média. Diluir a suspensão com o PBS estéril nas diluições subsequentes de 1:10, de modo que a contagem de colônias do grupo não tratado se torne muito baixa para contar.
Plante as diluições em placas de mídia apropriadas que suportem o crescimento do microrganismo ou qualquer meio que otimize o crescimento e forneça bom contraste para tornar a contagem da colônia precisa. Incubar as placas bacterianas a 35 graus Celsius por dois dias e as placas fúngicas à temperatura ambiente por cinco dias. Conte as unidades formadoras de colônias viáveis diretamente usando um contador de colônias ou um software de imagem.
Calcule a redução logarítmica microbiana R devido ao tecido antimicrobiano usando a equação mostrada na tela. Aqui, A é o valor logarítmico do número de unidades formadoras de colônias recuperadas de tecido não tratado, e B é o mesmo para tecido tratado. Os resultados de redução logarítmica de tecido antimicrobiano revestido com nanopartículas de quitosana encapsuladas em timol testados contra S.aureus em ágar sangue, E.coli em ágar lactose roxa, P.aeruginosa em ágar cetrimida e C.albicans em ágar Sabouraud dextrose são mostrados aqui.
Os patógenos foram fortificados em amostras não tratadas e tratadas por 30 minutos e recuperados em neutralização e diluição. As razões de diluição são mostradas entre as séries tratadas e não tratadas. A redução logarítmica de três bactérias e um fungo devido ao contato de tecidos antimicrobianos impregnados com dois compostos bioativos é mostrada aqui.
A eficácia antimicrobiana é enfraquecida após ciclos de lavagem para tecidos revestidos com carvacrol e timol.
