in-vivo-centrifugation-of-drosophila-embryos

<em>In-vivo</em> Centrifugation of <em>Drosophila</em> Embryos

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

University of Rochester

&#x5FAE;&#x7535;&#x673A;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-1 &#x5728;&#x80DE;&#x5185;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x6838;&#x5FC3;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5B83;&#x4E00;&#x76F4;&#x666E;&#x904D;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D27;&#x7269;&#x53D7;&#x611F;&#x52A8;&#x591A;&#x4E2A;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5E26;&#x9A6C;&#x8FBE;&#x7684;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x79FB;&#x52A8;&#x5F97;&#x66F4;&#x5FEB;&#x548C;&#x66F4;&#x957F;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x662F;&#x7A00;&#x758F;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E25;&#x683C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x679C;&#x8747;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x6EF4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x5148;&#x91C7;&#x7528;&#x6297;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x3001; &#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x548C;&#x7C92;&#x5B50;&#x8DDF;&#x8E2A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BC1;&#x660E;&#x8BE5;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x52A0;&#x53F7;&#x7ED3;&#x675F;&#x6C34;&#x6EF4;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x8861;&#x91CF;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D8;&#x5316;&#x5982;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x6DB2;&#x6EF4;&#x7684;&#x63A8;&#x52A8;&#x529B;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x4F30;&#x8BA1;&#x6BCF;&#x6EF4;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7535;&#x673A;&#x6570;&#x5B57;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E2D;&#x65E2;&#x6CA1;&#x6709;&#x66F4;&#x957F;&#x7684;&#x65C5;&#x884C;&#x8DDD;&#x79BB;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6CA1;&#x6709;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8D27;&#x7269;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x8FDB;&#x884C;&#x591A;&#x4E2A;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x4F20;&#x8F93;&#x5C5E;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D7;&#x5904;&#x4E8E;&#x6C7D;&#x8F66;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x663E;&#x7136;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x9636;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7535;&#x673A;&#x6570;&#x5B57;&#x672C;&#x8EAB;&#x4E3B;&#x5BB0;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;

&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-1 &#x9A71;&#x52A8;&#x8102;&#x8D28;&#x6EF4;&#x80DE;&#x5185;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7535;&#x673A;&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x3002;

The microtubule motor kinesin-1 plays central roles in intracellular transport. It has been widely assumed that many cellular cargos are moved by multiple kinesins and that cargos with more motors move faster and for longer distances; concrete evidence, however, is sparse. Here we rigorously test these notions using lipid droplets in Drosophila embryos. We first employ antibody inhibition, genetics, biochemistry, and particle tracking to demonstrate that kinesin-1 mediates plus-end droplet motion. We then measure how variation in kinesin-1 expression affects the forces driving individual droplets and estimate the number of kinesins actively engaged per droplet. Unlike in vitro, increased motor number results in neither longer travel distances nor higher velocities. Our data suggest that cargos in vivo can simultaneously engage multiple kinesins and that transport properties are largely unaffected by variation in motor number. Apparently, higher-order regulatory mechanisms rather than motor number per se dominate cargo transport in vivo.

Consequences of motor copy number on the intracellular transport of kinesin-1-driven lipid droplets.

Le moteur des microtubules kin&#xE9;sine-1 joue un r&#xF4;le central dans le transport intracellulaire. Il a &#xE9;t&#xE9; largement admis que de nombreux cargos cellulaires sont mus par des kin&#xE9;sines multiples et que les cargaisons avec plusieurs moteurs se d&#xE9;placer plus rapidement et pour de plus longues distances; des preuves concr&#xE8;tes, cependant, sont rares. Ici, nous testons rigoureusement ces notions &#xE0; l&#x26;#39;aide des gouttelettes lipidiques dans les embryons de drosophile. Nous avons d&#x26;#39;abord employer anticorps inhibant, la g&#xE9;n&#xE9;tique, la biochimie et de particules de suivi pour d&#xE9;montrer que la kin&#xE9;sine-1 m&#xE9;die mouvement des gouttelettes plus-fin. Nous mesurons ensuite comment la variation de la kin&#xE9;sine-1 expression affecte les forces motrices des gouttelettes individuelles et d&#x26;#39;estimer le nombre de kin&#xE9;sines activement engag&#xE9;s par gouttelette. Contrairement in vitro, a augment&#xE9; le nombre de r&#xE9;sultats du moteur dans les distances de voyage ni plus ni des vitesses plus &#xE9;lev&#xE9;es. Nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que les cargaisons in vivo peut engager simultan&#xE9;ment plusieurs kin&#xE9;sines et que les propri&#xE9;t&#xE9;s de transport sont en grande partie affect&#xE9;e par la variation du nombre moteur. Apparemment, d&#x26;#39;ordre sup&#xE9;rieur des m&#xE9;canismes de r&#xE9;gulation du moteur plut&#xF4;t que le nombre en soi dominent le transport de fret in vivo.

Cons&#xE9;quences du nombre de copies du moteur sur le transport intracellulaire des gouttelettes lipidiques Kinesin-1-moteur

Die Microtubule motor Kinesin-1 spielt zentrale Rollen in intrazellul&auml;ren Transport. Es wurde weithin angenommen worden, dass viele zellul&auml;re Ladungen durch mehrere Kinesins verschoben werden und die Ladungen mit mehr Motoren schneller und f&uuml;r l&auml;ngere Strecken zu bewegen; konkrete Anhaltspunkte, ist jedoch sp&auml;rlich. Hier testen wir konsequent diese Vorstellungen mit Lipid-Tr&ouml;pfchen bei Drosophila Embryos. Wir besch&auml;ftigen zun&auml;chst Antik&ouml;rper Hemmung, Genetik, Biochemie und Partikel-Tracking, um nachzuweisen, dass Kinesin-1 vermittelt Plus-End Tr&ouml;pfchen Bewegung. Dann Messen wie Variation in Kinesin-1 Ausdruck der Kr&auml;fte einzelne Tr&ouml;pfchen auswirkt und sch&auml;tzen die Zahl der Kinesins aktiv pro Tr&ouml;pfchen. Anders als in-vitro-, erh&ouml;hte motor Anzahl Ergebnisse weder Reisen Entfernungen noch h&ouml;here Geschwindigkeiten. Unsere Daten zeigen, dass Ladungen in-vivo gleichzeitig mehrere Kinesins betreiben k&ouml;nnen und Transporteigenschaften motor Anzahl von Variation weitgehend unber&uuml;hrt sind. Regulationsmechanismen h&ouml;herer Ordnung statt motor Zahl dominieren offenbar per se Frachtverkehr in-vivo.

Folgen der Motor kopieren auf den intrazellul&auml;ren Transport von Kinesin-1-gesteuerte Lipid-Tr&ouml;pfchen.

Il microtubule motore chinesina-1 svolge ruoli centrali nel trasporto intracellulare. &Egrave; stato ampiamente assunto che molti cellulari carichi sono mossi da pi&ugrave; kinesins e che carichi con motori pi&ugrave; muovono pi&ugrave; velocemente e per lunghe distanze; prove concrete, tuttavia, sono scarsa. Qui ci prova rigorosamente queste nozioni utilizzando gocce lipidiche negli embrioni della drosofila. Impieghiamo primo anticorpo inibizione, genetica, biochimica, e rilevamento delle particelle per dimostrare che 1 chinesina media motion plus-fine gocciolina. Quindi misuriamo come variazione nell&#39;espressione chinesina-1 colpisce le forze guida singole goccioline e stimare il numero di kinesins attivamente impegnati per goccia. A differenza di in vitro, aumentato motori numeri risultati in viaggio distanze n&eacute; velocit&agrave; pi&ugrave; elevate. I nostri dati suggeriscono che carichi in vivo contemporaneamente possono coinvolgere pi&ugrave; kinesins e che propriet&agrave; di trasporto sono in gran parte influenzata dalla variazione nel numero di motore. A quanto pare, meccanismi di regolamentazione di ordine superiore piuttosto che numero motore per s&eacute; domina trasporto merci in vivo.

Le conseguenze del motore copiare il numero sul trasporto intracellulare di gocce lipidiche chinesina-1-driven.

&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;-1&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9577;&#x3044;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x3070;&#x3089;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x6EF4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;-1&#x4EF2;&#x4ECB;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x6DB2;&#x6EF4;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;-1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x6DB2;&#x6EF4;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x529B;&#x3092;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x6DB2;&#x6EF4;&#x5F53;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x5F93;&#x4E8B;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;&#x9577;&#x304F;&#x8D70;&#x884C;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x756A;&#x53F7;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3069;&#x3046;&#x3084;&#x3089;&#x3001;&#x9AD8;&#x6B21;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6570;&#x81EA;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x8CA8;&#x7269;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;-1&#x99C6;&#x52D5;&#x8102;&#x80AA;&#x6EF4;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

Microtubule &#xBAA8;&#xD130; kinesin-1 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB9CE;&#xC740; &#xD734;&#xB300; &#xD654;&#xBB3C; &#xC5EC;&#xB7EC; kinesins&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB3D9; &#xB418; &#xACE0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xBAA8;&#xD130; &#xD654;&#xBB3C; &#xC774;&#xB3D9; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB354; &#xAE34; &#xAC70;&#xB9AC;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;, &#xC2A4;&#xD30C;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xC720;&#xC804;&#xD559;, &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;, &#xACE0;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC785;&#xC790; &#xCD94;&#xC801; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; kinesin 1 &#xC911;&#xC7AC; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC5D4;&#xB4DC; &#xB4DC;&#xB86D;&#xB9BF; &#xBAA8;&#xC158;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; kinesin 1 &#xC2DD;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBC29;&#xC6B8; &#xC6B4;&#xC804; &#xC138;&#xB825;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC885;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBB3C;&#xBC29;&#xC6B8; &#xB2F9; kinesins&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21;. &#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xCCB4; &#xC678;, &#xBAA8;&#xD130; &#xBC88;&#xD638; &#xACB0;&#xACFC;: &#xAE34; &#xC5EC;&#xD589; &#xAC70;&#xB9AC;&#xB3C4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC548; cargos vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; kinesins&#xB97C; &#xCC38;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xC1A1; &#xC18D;&#xC131; &#xBAA8;&#xD130; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xBA85;&#xD788;, &#xBAA8;&#xD130; &#xC22B;&#xC790; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC9C8;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xB77C;&#xAE30;&#xBCF4;&#xB2E4; &#xD654;&#xBB3C; &#xC218;&#xC1A1; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xBC30;.

&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; kinesin 1 &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xBC88;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El motor microt&#xFA;bulos kinesin-1 juega un papel central en el transporte intracelular. Ha sido ampliamente asumido que muchos cargamentos de celulares son movidos por m&#xFA;ltiples kinesins y que los cargamentos con m&#xE1;s motores mueven m&#xE1;s r&#xE1;pido y para distancias m&#xE1;s largas, pruebas concretas, sin embargo, es escasa. Aqu&#xED; se someten a pruebas rigurosas estas nociones con las gotas de l&#xED;pidos en embriones de Drosophila. En primer lugar, emplean la inhibici&#xF3;n de anticuerpos, la gen&#xE9;tica, la bioqu&#xED;mica y de rastreo de part&#xED;culas para demostrar que kinesin-1 interviene en m&#xE1;s de fin de movimiento de las gotas. A continuaci&#xF3;n, medir la variaci&#xF3;n en la kinesina-1 de expresi&#xF3;n afecta a las fuerzas que impulsan las gotas individuales y estimar el n&#xFA;mero de kinesins activamente por gota. A diferencia de in vitro, el aumento de los resultados del motor de n&#xFA;meros en las distancias de viaje ni m&#xE1;s ni velocidades m&#xE1;s altas. Nuestros datos sugieren que los cargamentos en vivo al mismo tiempo puede entablar kinesins m&#xFA;ltiples y que las propiedades de transporte no son afectadas por la variaci&#xF3;n en el n&#xFA;mero de motor. Al parecer, de orden superior, los mecanismos de regulaci&#xF3;n en lugar de n&#xFA;mero de motor por s&#xED; dominan el transporte de carga en vivo.

Susan L. Tran

Department of Biology

University of Rochester

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos