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Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

University of Strathclyde 

LIM &#x6FC0;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x53EA;&#x662F;&#x4E24;&#x540D;&#x6210;&#x5458;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF1A; LIM &#x6FC0;&#x9176; 1 (LIMK1) &#x548C;&#x6797;&#x6FC0;&#x9176; 2 (LIMK2)&#x3002;&#x4E0E;&#x552F;&#x4E00;&#x6709;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x57DF;&#x6797;&#x6FC0;&#x9176;&#x53D7;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EE3;&#x7406;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684; Rho &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282; cofilin &#x5BB6;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D; cofilin1&#x3001; cofilin2 &#x548C; destrin &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6797;&#x6FC0;&#x9176;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x65F6;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x51FA;&#x73B0;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x9014;&#x5F84;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x540C;&#x548C;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; LIMK1 &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x5176;&#x5220;&#x9664;&#x5DF2;&#x5377;&#x5165;&#x5A01;&#x5EC9;&#x65AF;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9057;&#x4F20;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x777E;&#x4E38;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x662F;&#x7531; LIMK2 &#x5220;&#x9664;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x51FA;&#x73B0;&#x4E86;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x75BE;&#x75C5;&#x4EE5;&#x53CA;&#x764C;&#x75C7;&#x3002;LIM &#x6FC0;&#x9176;&#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA;&#x8981;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x88AD;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF1B;&#x5FAE;&#x8C03;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E;&#x975E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cofilin &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6F5C;&#x80FD;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x6797;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x673A;&#x4F53;&#x5404;&#x7EA7;&#x804C;&#x52A1;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

LIM &#x6FC0;&#x9176;&#xFF1A; &#x529F;&#x80FD;&#x3001; &#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

The LIM kinase family consists of just two members: LIM kinase 1 (LIMK1) and LIM kinase 2 (LIMK2). With uniquely organised signalling domains, LIM kinases are regulated by several upstream signalling pathways, principally acting downstream of Rho GTPases to influence the architecture of the actin cytoskeleton by regulating the activity of the cofilin family proteins cofilin1, cofilin2 and destrin. Although the LIM kinases are very homologous, particularly when comparing kinase domains, there is emerging evidence that each may be subject to different regulatory pathways and may contribute to both distinct and overlapping cellular and developmental functions. Normal central nervous system development is reliant upon the presence of LIMK1, and its deletion has been implicated in the development of the human genetic disorder Williams syndrome. Normal testis development, on the other hand, is disrupted by the deletion of LIMK2. In addition, the possible involvement of each kinase in cardiovascular disorders as well as cancer has recently emerged. The LIM kinases have been proposed to play an important role in tumour-cell invasion and metastasis; fine-tuning the balance between phosphorylated and non-phosphorylated cofilin may be a significant determinant of tumour-cell metastatic potential. In this review, we outline the structure, regulation and function of LIM kinases and their functions at cellular and organismal levels, as well as their possible contributions to human disease.

LIM kinases: function, regulation and association with human disease.

La kinase de la famille LIM se compose de seulement deux membres: LIM kinase 1 (LIMK1) et de la MFR kinase 2 (LIMK2). Avec uniquement organis&#xE9;s domaines de signalisation, les kinases MFR sont r&#xE9;gis par plusieurs voies de signalisation en amont, principalement agissant en aval du GTPases Rho pour influencer l&#x26;#39;architecture du cytosquelette d&#x26;#39;actine en r&#xE9;gulant l&#x26;#39;activit&#xE9; des prot&#xE9;ines de la famille Cofilin cofilin1, cofilin2 et destrine. Bien que les kinases MFR sont tr&#xE8;s homologues, en particulier lorsque l&#x26;#39;on compare les domaines kinase, il existe des preuves nouvelles que chacun puisse &#xEA;tre soumis &#xE0; diff&#xE9;rentes voies de r&#xE9;gulation et peuvent contribuer &#xE0; la fois distinctes et qui se chevauchent les fonctions cellulaires et de d&#xE9;veloppement. Le d&#xE9;veloppement normal du syst&#xE8;me nerveux central est tributaire de la pr&#xE9;sence de LIMK1, et sa suppression a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9; dans le d&#xE9;veloppement du syndrome de Williams trouble g&#xE9;n&#xE9;tique humain. Le d&#xE9;veloppement des testicules normale, d&#x26;#39;autre part, est perturb&#xE9;e par la suppression de LIMK2. En outre, l&#x26;#39;implication possible de chaque kinase dans les troubles cardio-vasculaires ainsi que le cancer a r&#xE9;cemment &#xE9;merg&#xE9;. Les kinases LIM ont &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;s pour jouer un r&#xF4;le important dans la tumeur des cellules invasion et la m&#xE9;tastase; peaufiner l&#x26;#39;&#xE9;quilibre entre cofiline phosphoryl&#xE9;e et non phosphoryl&#xE9;e peut &#xEA;tre un d&#xE9;terminant significatif de cellules tumorales potentiel m&#xE9;tastatique. Dans cette revue, nous d&#xE9;crivons la structure, la r&#xE9;glementation et la fonction de kinases LIM et de leurs fonctions aux niveaux cellulaire et organismique, ainsi que leurs possibles contributions &#xE0; la maladie humaine.

Kinase LIM: fonction, la r&#xE9;gulation et d&#x26;#39;association avec les maladies humaines

Die LIM-Kinase-Familie besteht aus nur zwei Mitgliedern: LIM-Kinase 1 (LIMK1) und LIM-Kinase 2 (LIMK2). Mit eindeutig organisierten Signalgebung Domains, LIM Kinasen werden durch mehrere upstream Signalwege, haupts&auml;chlich handeln reguliert flussabw&auml;rts von Rho-GTPasen, die Architektur des Aktin-Zytoskeletts zu beeinflussen, indem Sie steuert die Aktivit&auml;t der Cofilin Familie Proteine cofilin1, cofilin2 und Destrin. Obwohl die LIM-Kinasen sehr homologe sind, besonders wenn Kinase-Dom&auml;nen zu vergleichen ist es neue Beweise daf&uuml;r, dass jeweils verschiedene Regulationsmechanismen unterliegen und dazu, sowohl unterschiedliche &uuml;berlappende cellular and developmental Funktion beitragen kann. Normale ZNS Entwicklung st&uuml;tzt sich auf das Vorhandensein von LIMK1 und seine L&ouml;schung hat verwickelt wurden, bei der Entwicklung der menschlichen genetischen St&ouml;rung Williams-Syndrom. Normale Hoden-Entwicklung, ist auf der anderen Seite durch die Streichung des LIMK2 gest&ouml;rt. Dar&uuml;ber hinaus ist die m&ouml;gliche Beteiligung der einzelnen Kinase in Herz-Kreislauf-Erkrankungen sowie Krebs vor kurzem aufgetaucht. Die LIM-Kinasen sind vorgeschlagen worden, eine wichtige Rolle bei Tumor-Zell-Invasion und Metastasierung; Feinabstimmung des Gleichgewichts zwischen phosphorylierten und nicht phosphoryliert Cofilin m&ouml;glicherweise eine wesentliche Determinante der metastasiertem Tumor-Zell-Potenzial. In diesem Bericht beschreiben wir die Struktur, Verordnung und Funktion der LIM-Kinasen und ihre Funktionen auf zellul&auml;rer und organische Ebene sowie deren m&ouml;gliche Beitr&auml;ge zur menschlichen Erkrankungen.

LIM-Kinasen: Funktion, Regulierung und Assoziation mit Erkrankungen des Menschen.

La famiglia chinasi LIM &egrave; costituito da due soli membri: chinasi 1 (LIMK1) di LIM e LIM chinasi 2 (LIMK2). Con domini di segnalamento organizzate in modo univoco, le chinasi LIM sono regolate da diversi percorsi di segnalazione a monte, agendo principalmente a valle di Rho GTPases per influenzare l&#39;architettura del citoscheletro actina regolando l&#39;attivit&agrave; della cofilin famiglia di proteine cofilin1, cofilin2 e destrin. Sebbene la chinasi LIM sono molto omologhe, specialmente quando si confrontano domini chinasi, ci sono prove emergenti che ciascuno pu&ograve; essere soggetta a diverse vie regolarici e pu&ograve; contribuire alle funzioni cellulari e sviluppo distinte e sovrapposte. Lo sviluppo normale del sistema nervoso centrale &egrave; legato alla presenza di LIMK1, e la cancellazione &egrave; stata coinvolta nello sviluppo del disturbo genetico umano sindrome di Williams. Lo sviluppo del testicolo normale, d&#39;altra parte, &egrave; interrotta dall&#39;eliminazione di LIMK2. Inoltre, il possibile coinvolgimento di ogni chinasi nei disturbi cardiovascolari, come pure il cancro ha recentemente emerse. La chinasi LIM sono stati proposti a giocare un ruolo importante nell&#39;invasione delle cellule tumorali e metastasi; regolazione fine dell&#39;equilibrio tra cofilin fosforilati e non fosforilato pu&ograve; essere un significativo determinante del potenziale metastatico delle cellule tumorali. In questa recensione, si struttura la struttura, regolazione e funzione della chinasi LIM e le loro funzioni a livello cellulare e organismica, come pure loro possibili contributi alla malattia umana.

Chinasi LIM: funzione, regolamento e associazione con la malattia umana.

LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1&#xFF08;LIMK1&#xFF09;&#x3068;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;2&#xFF08;LIMK2&#xFF09;&#xFF1A;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3063;&#x305F;2&#x4EBA;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;Rho&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3067;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;cofilin1&#x3001;cofilin2&#x3068;destrin&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002; LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5404;&#x3005;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;LIMK1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x30A6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E0;&#x30BA;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x7CBE;&#x5DE3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;LIMK2&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5404;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x764C;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x80FD;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3084;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x3084;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3078;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x3068;&#x5354;&#x4F1A;

&#xC784; &#xB2C8; &#xAC00;&#xC871; &#xB450; &#xBA64;&#xBC84;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131;: &#xC784; &#xB2C8; 1 (LIMK1)&#xC640; &#xC784; &#xB2C8; 2 (LIMK2). &#xC8FC;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC784; kinases &#xACE0;&#xC720; &#xC870;&#xC9C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, cofilin &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; cofilin1, cofilin2 &#xBC0F; destrin&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton&#xC758; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; Gtpases&#xB85C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xC784; kinases&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB3D9;&#xC885;, &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xAC70;&#xAE30;&#xB294; &#xC2E0;&#xD765; &#xC99D;&#xAC70; &#xAC01;&#xAC01; &#xB2E4;&#xB978; &#xADDC;&#xC81C; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C; LIMK1, &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AD;&#xC81C;&#xD560; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xC9C8;&#xD658; &#xC70C;&#xB9AC;&#xC5C4;&#xC2A4; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xACE0;&#xD658; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, limk2&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xAC00; &#xC911;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00; &#xC9C8;&#xD658; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC554; &#xAC01; &#xD0A4;&#xC758; &#xAC1C;&#xC785; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xC784; kinases &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xC785;&#xACFC; &#xC804;&#xC774;;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; phosphorylated &#xBC0F; &#xBE44; phosphorylated cofilin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;, &#xADDC;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC784; kinases&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBC0F; organismal &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xAC1C;&#xC694;.

&#xC784; kinases: &#xADDC;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xD658; &#xD611;&#xD68C;.

La familia de quinasas LIM se compone de s&#xF3;lo dos miembros: LIM kinasa 1 (LIMK1) y LIM quinasa 2 (LIMK2). Con los dominios de se&#xF1;alizaci&#xF3;n &#xFA;nica organizados, LIM quinasas est&#xE1;n regulados por varias v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de aguas arriba, aguas abajo, principalmente en calidad de Rho GTPasas de influir en la arquitectura del citoesqueleto de actina mediante la regulaci&#xF3;n de la actividad de las prote&#xED;nas de la familia Cofilin cofilin1, cofilin2 y destrin. A pesar de las quinasas LIM son muy hom&#xF3;logas, especialmente cuando se comparan los dominios quinasa, no hay pruebas de que cada uno puede estar sujeto a distintas v&#xED;as de regulaci&#xF3;n y pueden contribuir a la vez distinta y la superposici&#xF3;n de las funciones celulares y de desarrollo. Desarrollo normal del sistema nervioso central es dependiente de la presencia de LIMK1, y su supresi&#xF3;n ha sido implicado en el desarrollo de la enfermedad gen&#xE9;tica humana s&#xED;ndrome de Williams. Desarrollo de los test&#xED;culos normal, por el contrario, se interrumpe mediante la supresi&#xF3;n de LIMK2. Adem&#xE1;s, la posible participaci&#xF3;n de cada uno de quinasa en los trastornos cardiovasculares, as&#xED; como el c&#xE1;ncer ha surgido recientemente. Las quinasas LIM se han propuesto para desempe&#xF1;ar un papel importante en la invasi&#xF3;n de c&#xE9;lulas tumorales y la met&#xE1;stasis; afinar el equilibrio entre cofilina fosforilada y no fosforilada puede ser un factor determinante importante de potencial metast&#xE1;sico de c&#xE9;lulas tumorales. En esta revisi&#xF3;n, se describe la estructura, regulaci&#xF3;n y funci&#xF3;n de las quinasas LIM y sus funciones a nivel celular y de organismos, as&#xED; como sus posibles contribuciones a la enfermedad humana.

LIM quinasas: funci&#xF3;n, regulaci&#xF3;n y asociaci&#xF3;n con la enfermedad humana

LIM chinasi 1 e 2 (LIMK1/2) sono posizionati centralmente regolatori della dinamica del citoscheletro di actina. Utilizzando siRNA-mediata atterramento o un inibitore del romanzo piccola molecola, mostriamo che LIMK &egrave; necessaria per la generazione del percorso da leader le cellule tumorali e cellule stromali nontumor durante l&#39;invasione delle cellule tumorali collettiva. Inibizione LIMK abbassa cofilin fosforilazione, F-actina livelli, siero risposta fattore trascrizionale attivit&agrave; e contrazione del collagene e riduce l&#39;invasione invasione tridimensionale dosaggi. Anche se la motilit&agrave; &egrave; stata influenzata, inibizione LIMK altera la degradazione della proteina matrice e invadopodia formazione associato significativamente pi&ugrave; veloci tempi di recupero in FRAP dosaggi indicativi di ridotta stabilit&agrave; di F-actina. Quando LIMK viene abbattuto in cellule MDA-MB-231, perdono la capacit&agrave; di portare fili di collettivamente invadere le cellule. Allo stesso modo, quando LIMK attivit&agrave; &egrave; bloccata in fibroblasti tumore-associati, non sono in grado di condurre l&#39;invasione delle cellule di carcinoma squamoso in un modello di pelle organotypic collettiva. Questi risultati mostrano che il LIMK &egrave; richiesto per la matrice che ritocca le attivit&agrave; per la generazione del percorso dalle principali cellule in collettiva invasione.

Chinasi LIM sono necessarie per la generazione del percorso invasiva di tumore e tumore-associati delle cellule stromale.

LIM &#x6FC0;&#x9176; 1 &#x548C; 2 &#xFF08;LIMK1/2&#xFF09; &#x662F;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; siRNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x6216;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; LIMK &#x65F6;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x8DEF;&#x5F84;&#x751F;&#x6210;&#x7531;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x95F4;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x764C;&#x65C1;&#x96C6;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x88AD;&#x3002;LIMK &#x6291;&#x5236;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86; cofilin &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x56E0;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x80F6;&#x539F;&#x6536;&#x7F29;&#xFF0C;&#x5E76;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5165;&#x4FB5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x52A8;&#x529B;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;LIMK &#x6291;&#x5236;&#x635F;&#x5BB3;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x964D;&#x89E3;&#x4E0E; invadopodia &#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x8131;&#x8272;&#x5316;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x660E;&#x663E;&#x66F4;&#x5FEB;&#x6062;&#x590D;&#x65F6;&#x95F4;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5F53; LIMK &#x4E19;&#x4E8C;&#x919B;-MB-231 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x5012;&#x4E86;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x5931;&#x53BB;&#x9886;&#x5BFC;&#x80A1;&#x96C6;&#x4F53;&#x5165;&#x4FB5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x5F53;&#x764C;&#x76F8;&#x5173;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x963B;&#x6B62; LIMK &#x6D3B;&#x52A8;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x65E0;&#x529B;&#x9886;&#x5BFC;&#x96C6;&#x4F53;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x9CDE;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x764C;&#x5668;&#x5B98;&#x76AE;&#x80A4;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; LIMK &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x57FA;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8DEF;&#x5F84;&#x4E00;&#x4EE3;&#x9886;&#x5BFC;&#x96C6;&#x4F53;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

LIM &#x6FC0;&#x9176;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x521B;&#x8DEF;&#x5F84;&#x751F;&#x6210;&#x80BF;&#x7624;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x95F4;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

LIM kinases 1 and 2 (LIMK1/2) are centrally positioned regulators of actin cytoskeleton dynamics. Using siRNA-mediated knockdown or a novel small molecule inhibitor, we show LIMK is required for path generation by leading tumor cells and nontumor stromal cells during collective tumor cell invasion. LIMK inhibition lowers cofilin phosphorylation, F-actin levels, serum response factor transcriptional activity and collagen contraction, and reduces invasion in three-dimensional invasion assays. Although motility was unaffected, LIMK inhibition impairs matrix protein degradation and invadopodia formation associated with significantly faster recovery times in FRAP assays indicative of reduced F-actin stability. When LIMK is knocked down in MDA-MB-231 cells, they lose the ability to lead strands of collectively invading cells. Similarly, when LIMK activity is blocked in cancer-associated fibroblasts, they are unable to lead the collective invasion of squamous carcinoma cells in an organotypic skin model. These results show that LIMK is required for matrix remodeling activities for path generation by leading cells in collective invasion.

LIM kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.

Kinases LIM 1 et 2 (LIMK1 / 2) sont plac&#xE9;es en position centrale r&#xE9;gulateurs de la dynamique du cytosquelette d&#x26;#39;actine. Utilisation de siRNA &#xE0; m&#xE9;diation knockdown ou un inhibiteur de petite mol&#xE9;cule novatrice, nous montrons LIMK est n&#xE9;cessaire pour la g&#xE9;n&#xE9;ration de chemin en conduisant les cellules tumorales et non tumorales des cellules stromales pendant l&#x26;#39;invasion des cellules tumorales collective. Inhibition de la phosphorylation LIMK abaisse cofiline, F-actine niveaux, le s&#xE9;rum activit&#xE9; de facteur de r&#xE9;ponse de la transcription et de la contraction du collag&#xE8;ne, l&#x26;#39;invasion et r&#xE9;duit dans des dosages invasion tridimensionnelles. Bien que la motilit&#xE9; n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e, l&#x26;#39;inhibition LIMK alt&#xE8;re la d&#xE9;gradation des prot&#xE9;ines de matrice et de la formation invadopodes associ&#xE9;e &#xE0; des temps de r&#xE9;cup&#xE9;ration nettement plus rapides lors des essais du PAF indicatifs de r&#xE9;duction F-actine de la stabilit&#xE9;. Lorsque LIMK est abattue en MDA-MB-231 cellules, ils perdent la capacit&#xE9; de diriger collectivement brins de l&#x26;#39;invasion des cellules. De m&#xEA;me, lorsque l&#x26;#39;activit&#xE9; est bloqu&#xE9;e dans LIMK associ&#xE9;s au cancer des fibroblastes, ils sont incapables de mener l&#x26;#39;invasion collective des cellules de carcinome squameux dans un mod&#xE8;le de peau organotypique. Ces r&#xE9;sultats montrent que LIMK est n&#xE9;cessaire pour les activit&#xE9;s de remodelage de la matrice pour la production par les cellules chemin menant &#xE0; l&#x26;#39;invasion collective.

Kinase LIM sont n&#xE9;cessaires pour la g&#xE9;n&#xE9;ration chemin envahissantes par la tumeur et associ&#xE9;e &#xE0; une tumeur cellules stromales

LIM-Kinasen 1 und 2 (LIMK1/2) sind zentral positionierten Regulatoren der Aktin-Zytoskelett Dynamik. Mit SiRNA-vermittelte Niederschlag oder ein neuartiges niedermolekularer Inhibitor, zeigen wir, dass LIMK erforderlich f&uuml;r Pfad-Generation von f&uuml;hrenden Tumorzellen und Nontumor stromal Zellen w&auml;hrend der kollektiven Tumorinvasion Zelle ist. LIMK Hemmung Cofilin Phosphorylierung, F-Actin Ebenen, Serum Antwort Faktor transkriptionelle Aktivit&auml;t und Kollagen Kontraktion und reduziert Invasion im dreidimensionalen Invasion Proben. Obwohl Motilit&auml;t unber&uuml;hrt war, beeintr&auml;chtigt die LIMK Hemmung Matrix Proteinabbau und Invadopodia Bildung wesentlich schnellere Wiederherstellungszeiten bei FRAP-Assays bezeichnend f&uuml;r reduzierte F-Actin-Stabilit&auml;t zugeordnet. Wenn LIMK im MDA-MB-231 Zellen abgerissen ist, verlieren sie die F&auml;higkeit Str&auml;nge der Kollektiv eindringenden Zellen f&uuml;hren. Ebenso, wenn LIMK Aktivit&auml;t in Krebs-assoziierte Fibroblasten blockiert ist, werden sie dem kollektiven Einmarsch der Plattenepithel-Karzinom-Zellen in einem organotypische Haut-Modell. Diese Ergebnisse zeigen, dass LIMK f&uuml;r Matrix Umbau Aktivit&auml;ten f&uuml;r Pfad-Generation von f&uuml;hrenden Zellen im kollektiven Invasion erforderlich ist.

LIM-Kinasen sind f&uuml;r invasive Pfad-Generation von Tumor und Tumor-assoziierte stromal Zellen erforderlich.

LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1&#x304A;&#x3088;&#x3073;2&#xFF08;LIMK1 / 2&#xFF09;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002; siRNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;LIMK&#x304C;&#x96C6;&#x56E3;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x975E;&#x816B;&#x760D;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3001;&#x30D1;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; LIMK&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3001;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x6D78;&#x6F64;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904B;&#x52D5;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;LIMK&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x57FA;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3068;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;FRAP&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9AD8;&#x901F;&#x306A;&#x30EA;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EA;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;invadopodia&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3002; LIMK&#x306F;MDA-MB-231&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5931;&#x3046;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;LIMK&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x6241;&#x5E73;&#x4E0A;&#x76AE;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x4FB5;&#x7565;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;LIMK&#x304C;&#x96C6;&#x56E3;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x751F;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4FB5;&#x8972;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

1&#xACFC; 2 (LIMK1/2) &#xC784; kinases&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xC911;&#xC559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC704;&#xCE58; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;. &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; siRNA &#xC911;&#xC7AC; &#xB610;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC904; LIMK &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; nontumor stromal &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9D1;&#xB2E8; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. LIMK &#xC800;&#xD574; &#xB0AE;&#xCD94;&#xACE0; cofilin &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;, F &#xB9D0;&#xB77C; &#xC218;&#xC900;, &#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751; &#xACC4;&#xC218; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC640; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC218;&#xCD95; &#xD558; &#xACE0; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xCE68;&#xACF5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xCE68;&#xACF5;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;, &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0; &#xBE44;&#xB85D; LIMK &#xC800;&#xD574; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD558; &#xBC0F; invadopodia &#xD615;&#xC131; &#xAC10;&#xC18C; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; FRAP &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xBE60;&#xB978; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC190;&#xC0C1;. LIMK MDA-MB-231 &#xC140;&#xC5D0; &#xB728; &#xB418;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xCD1D;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCE68;&#xC785;&#xC758; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC744;&#xC774; &#xB04C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC783;&#xAC8C;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; LIMK &#xD65C;&#xB3D9; &#xC554; &#xAD00;&#xB828; &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB420; &#xB54C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; organotypic &#xD53C;&#xBD80; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3B8;&#xD3C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC554; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9D1;&#xB2E8; &#xCE68;&#xACF5;&#xC774; &#xB04C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; LIMK &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC140; &#xC9D1;&#xB2E8; &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xC120;&#xB3C4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xACBD;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC784; kinases&#xB294; &#xC885;&#xC591; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; stromal &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xC785; &#xACBD;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

LIM quinasas 1 y 2 (LIMK1 / 2) est&#xE1;n colocadas en posici&#xF3;n central los reguladores de la din&#xE1;mica del citoesqueleto de actina. Uso de siRNA mediada por ca&#xED;da o un inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a, se muestra LIMK se requiere para la generaci&#xF3;n de ruta por las principales c&#xE9;lulas tumorales y las c&#xE9;lulas del estroma no tumoral durante la invasi&#xF3;n colectiva de las c&#xE9;lulas tumorales. La inhibici&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n reduce LIMK cofilina, los niveles de F-actina, la actividad s&#xE9;rica de la transcripci&#xF3;n factor de respuesta y la contracci&#xF3;n del col&#xE1;geno, y reduce la invasi&#xF3;n de los ensayos de invasi&#xF3;n en tres dimensiones. Aunque no se vio afectada la motilidad, la inhibici&#xF3;n LIMK perjudica degradaci&#xF3;n de la matriz de prote&#xED;nas y la formaci&#xF3;n de invadopodios asociado con el tiempo de recuperaci&#xF3;n significativamente m&#xE1;s r&#xE1;pido en los ensayos FRAP indicativos de la reducci&#xF3;n de la F-actina estabilidad. Cuando LIMK es derribado en MDA-MB-231 c&#xE9;lulas, pierden la capacidad para dirigir cap&#xED;tulos de forma colectiva las c&#xE9;lulas invasoras. De manera similar, cuando la actividad LIMK est&#xE1; bloqueada en el c&#xE1;ncer asociadas a los fibroblastos, que son incapaces de provocar la invasi&#xF3;n colectiva de c&#xE9;lulas de carcinoma escamoso en un modelo de piel organot&#xED;pico. Estos resultados muestran que LIMK se requiere para las actividades de remodelaci&#xF3;n de la matriz para la generaci&#xF3;n de ruta por las c&#xE9;lulas que llevan en la invasi&#xF3;n colectiva.

LIM quinasas son requeridas para la generaci&#xF3;n de la trayectoria invasiva por las c&#xE9;lulas estromales tumor y el tumor asociado-

&#x6FC0;&#x9176;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x89D2;&#x8272;&#x7531;&#x4E8E;&#x90FD;&#x5177;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;&#x5176;&#x6807;&#x51C6;&#x683C;&#x5F0F;&#x817A;&#x82F7;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;ATP&#xFF09;-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4F7F;&#x7406;&#x60F3;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8FDB;&#x884C;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x8BB8;&#x591A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x8BFB;&#x6570;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x57FA;&#x677F;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x5E76;&#x4E0D;&#x9002;&#x5F53;&#x3002;LIM &#x6FC0;&#x9176; (LIMK) &#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728; phosphorylate &#x80BD;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x65E0;&#x529B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4EE5;&#x524D;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5C4F;&#x5E55; &#xFF08;HTS&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; cofilin &#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BFB;&#x51FA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x63AA;&#x65BD;&#x4F5C;&#x4E3A; LIMK &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53D1;&#x5149;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9; ATP &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x517C;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x662F;&#x4FBF;&#x5B9C;&#x8981;&#x6267;&#x884C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x539F;&#x5219;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x8868;&#x660E;&#x53CD;&#x5BF9; LIMK &#x8BE5;&#x590D;&#x5408;&#x6548;&#x80FD;&#x8BC1;&#x660E; &#xFF1B;&#x6700;&#x7EC8;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316; HTS.&#x6210;&#x529F;&#x8D77;&#x8BC9;&#x540E;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x683C;&#x5F0F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6539;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x83B7;&#x53D6;&#x66F4;&#x51C6;&#x786E;&#x63AA;&#x65BD;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x66F4;&#x590D;&#x6742; &#xFF08;&#x4E14;&#x6602;&#x8D35;&#xFF09; &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x7406;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x3001; &#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x5206;&#x6790;&#x9274;&#x5B9A; LIMK &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x80FD;&#x591F;&#x542F;&#x52A8;&#x6700;&#x7EC8;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x3002;

LIM &#x6FC0;&#x9176; 1 &#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A; ATP &#x6D88;&#x8017;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;

Kinases are attractive drug targets because of the central roles they play in signal transduction pathways and human diseases. Their well-formed adenosine triphosphate (ATP)-binding pockets make ideal targets for small-molecule inhibitors. For drug discovery purposes, many peptide-based kinase assays have been developed that measure substrate phosphorylation using fluorescence-based readouts. However, for some kinases these assays may not be appropriate. In the case of the LIM kinases (LIMK), an inability to phosphorylate peptide substrates resulted in previous high-throughput screens (HTS) using radioactive labeling of recombinant cofilin protein as the readout. We describe the development of an HTS-compatible assay that measures relative ATP levels using luciferase-generated luminescence as a function of LIMK activity. The assay was inexpensive to perform, and proof-of-principle screening of kinase inhibitors demonstrated that compound potency against LIMK could be determined; ultimately, the assay was used for successful prosecution of automated HTS. Following HTS, the secondary assay format was changed to obtain more accurate measures of potency and mechanism of action using more complex (and expensive) assays. The luciferase assay nonetheless provides an inexpensive and reliable primary assay for HTS that allowed for the identification of LIMK inhibitors to initiate discovery programs for the eventual treatment of human diseases.

Development of a High-Throughput Screening Method for LIM Kinase 1 Using a Luciferase-Based Assay of ATP Consumption.

Les kinases sont des cibles de m&#xE9;dicaments attrayantes en raison des r&#xF4;les central qu&#x26;#39;ils jouent dans les voies de transduction de signaux et les maladies humaines. Leur bien-form&#xE9; l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine triphosphate (ATP)-poches de liaison des cibles id&#xE9;ales pour de petites mol&#xE9;cules d&#x26;#39;inhibiteurs. Pour des fins de d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments, de nombreux essais de kinase &#xE0; base de peptides ont &#xE9;t&#xE9; mis au point que la phosphorylation de substrat mesure &#xE0; l&#x26;#39;aide bas&#xE9;es sur la fluorescence lectures. Toutefois, pour certaines kinases ces dosages peuvent ne pas &#xEA;tre appropri&#xE9;. Dans le cas des kinases LIM (LIMK), une incapacit&#xE9; &#xE0; phosphoryler des substrats peptidiques a entra&#xEE;n&#xE9; dans les pr&#xE9;c&#xE9;dents &#xE9;crans &#xE0; haut d&#xE9;bit (HTS) en utilisant un marquage radioactif d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine recombinante cofiline que la lecture. Nous d&#xE9;crivons le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un test HTS-compatibles qui mesure les niveaux relatifs de l&#x26;#39;ATP en utilisant la lucif&#xE9;rase g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; par luminescence en fonction de l&#x26;#39;activit&#xE9; LIMK. Le test &#xE9;tait peu co&#xFB;teux &#xE0; r&#xE9;aliser, et la preuve de principe de d&#xE9;pistage d&#x26;#39;inhibiteurs de kinases ont d&#xE9;montr&#xE9; que la puissance compos&#xE9; contre LIMK n&#x26;#39;a pu &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9;e; en fin de compte, le test a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour poursuivre avec succ&#xE8;s automatis&#xE9; HTS. Apr&#xE8;s HTS, le format de dosage secondaire a &#xE9;t&#xE9; chang&#xE9; afin d&#x26;#39;obtenir des mesures plus pr&#xE9;cises de la puissance et le m&#xE9;canisme d&#x26;#39;action utilisant plus complexes (et co&#xFB;teux) des essais. Le dosage de la lucif&#xE9;rase fournit n&#xE9;anmoins un test peu co&#xFB;teux et fiable pour les primaires HTS qui a permis l&#x26;#39;identification d&#x26;#39;inhibiteurs de limk &#xE0; lancer des programmes de d&#xE9;couverte pour le traitement &#xE9;ventuel des maladies humaines.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une m&#xE9;thode de d&#xE9;pistage &#xE0; haut d&#xE9;bit pour LIM Kinase 1 l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un test lucif&#xE9;rase-Based de la consommation d&#x26;#39;ATP

Kinasen sind attraktive Droge Ziele aufgrund der zentralen Rollen spielen sie in Signaltransduction Bahnen und Krankheiten beim Menschen. Ihre wohlgeformten Adenosintriphosphat (ATP)-Bindung Taschen bilden ideale Ziele f&uuml;r klein-Molek&uuml;l-Inhibitoren. F&uuml;r Zwecke der Droge-Entdeckung entstanden viele Peptid-basierte Kinase Proben dieser Ma&szlig;nahme-Substrat-Phosphorylierung mit Fluoreszenz-basierte anzeigen. Jedoch m&ouml;glicherweise f&uuml;r einige Kinasen diese Proben nicht geeignet. Die Unf&auml;higkeit, Peptid-Substrate phosphoryliert f&uuml;hrte bei der LIM-Kinasen (LIMK) vorherige Hochdurchsatz-Bildschirme (HTS) mit radioaktiven Kennzeichnung von rekombinanten Cofilin Protein als das Auslesen. Wir beschreiben die Entwicklung eines HTS-kompatiblen-Tests, das relative ATP Niveaus mit Luciferase generierte Lumineszenz als Funktion der LIMK Aktivit&auml;t misst. Die Probe war kosteng&uuml;nstig durchf&uuml;hren und Beweis-des-Prinzip, dass Screening von Kinase-Inhibitoren nachgewiesen, dass zusammengesetzte Wirksamkeit gegen LIMK bestimmt werden kann; letztlich wurde die Probe f&uuml;r erfolgreiche Verfolgung von automatisierten HTS verwendet. Nach HTS &auml;nderte sich das sekund&auml;re Assay-Format genauere Messen Potenz und Wirkmechanismus mit mehr komplexe (und teure) Proben zu erhalten. Der Luciferase Assay stellt dennoch eine preiswerte und zuverl&auml;ssige Prim&auml;rassay f&uuml;r HTS, die f&uuml;r die Identifizierung der LIMK Inhibitoren zul&auml;ssig, Entdeckung-Programme f&uuml;r die sp&auml;tere Behandlung der menschlichen Krankheiten zu initiieren.

Entwicklung einer High-Throughput-Screening-Methode f&uuml;r LIM Kinase 1 mit eine Luciferase-gegr&uuml;ndeten Probe der ATP-Verbrauch.

Le chinasi sono obiettivi farmacologici attraente a causa i ruoli centrali che giocano in vie di trasduzione del segnale e malattie umane. Loro corretto adenosina trifosfato (ATP)-tasche associazione rendono gli obiettivi ideali per piccole molecole inibitori. Fini scoperta della droga, molte chinasi del peptide-based assays sono state sviluppate che misura substrato fosforilazione mediante letture basate sulla fluorescenza. Tuttavia, per alcune chinasi questi dosaggi potrebbero non essere appropriati. Nel caso la chinasi LIM (LIMK), un&#39;incapacit&agrave; di fosforilare substrati peptidici provocato precedenti schermi high-throughput (HTS) mediante etichettatura radioattivo della proteina ricombinante cofilin come la lettura. Descriviamo lo sviluppo di un test di HTS-compatibile che misura i livelli relativi di ATP utilizzando luminescenza luciferase generati in funzione dell&#39;attivit&agrave; LIMK. Il dosaggio &egrave; stato poco costoso per eseguire, e lo screening di inibitori della chinasi ha dimostrato che composto potenza contro LIMK prova di principio potrebbe essere determinato; in ultima analisi, il dosaggio &egrave; stato utilizzato per successo accusa di HTS automatizzato A seguito di HTS, il formato secondario dosaggio &egrave; stato cambiato per ottenere misure pi&ugrave; accurate della potenza e meccanismo d&#39;azione mediante dosaggi pi&ugrave; complessi (e costosi). L&#39;analisi di luciferase fornisce comunque un test poco costoso ed affidabile primario per HTS che ha permesso l&#39;identificazione di inibitori LIMK di avviare programmi di individuazione per l&#39;eventuale trattamento di patologie umane.

Sviluppo di un metodo di Screening High-Throughput per la chinasi LIM 1 usando un&#39;analisi basata su Luciferase del consumo di ATP.

&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x5275;&#x85AC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6574;&#x5F62;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;ATP&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002;&#x5275;&#x85AC;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;LIMK&#xFF09;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;HTS&#xFF09;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;LIMK&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x767A;&#x5149;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;ATP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;HTS-&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x8A3C;&#x660E;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;LIMK&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;HTS&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x691C;&#x5BDF;&#x5074;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HTS&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#xFF08;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#xFF09;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x3068;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x63AA;&#x7F6E;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;LIMK&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;HTS&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

ATP&#x6D88;&#x8CBB;&#x306E;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;LIM&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

Kinases &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC559; &#xC5ED;&#xD560; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC798; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (ATP)-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xB9CE;&#xC740; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xAE30;&#xBC18; &#xD0A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xBC18; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8; &#xCE21;&#xC815; &#xAE30;&#xD310; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC77C;&#xBD80; kinases &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC801;&#xC808; &#xD55C;. &#xC784; kinases (LIMK)&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAE30;&#xD310; phosphorylate&#xB97C; &#xD310;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; cofilin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xC804; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD654;&#xBA74; (HTS) &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; LIMK &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBC1C;&#xAD11;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xB300; ATP &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; HTS &#xD638;&#xD658; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC218;&#xD589;, &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xACE0; &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xC6D0;&#xCE59; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DC;&#xC5F0; LIMK &#xC0C1;&#xB300;&#xB85C; &#xADF8; &#xBCF5;&#xD569; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD655;&#xC778; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; HTS.&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xAC80;&#xCC30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, HTS, &#xB2E4;&#xC74C; 2 &#xCC28; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD615;&#xC2DD; &#xD798; &#xBC0F; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; (&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBE44;&#xC2FC;) &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xCE21;&#xC815;&#xAC12;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xAD6D; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; LIMK &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; HTS&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xB834; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC784; &#xB2C8; 1 ATP &#xC18C;&#xBE44; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Las quinasas son blancos atractivos de drogas, debido a los papeles centrales que juegan en las v&#xED;as de transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales y enfermedades humanas. Su bien formado el trifosfato de adenosina (ATP) de uni&#xF3;n a los bolsillos son blancos ideales para los inhibidores de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a. Para los fines de descubrimiento de f&#xE1;rmacos, muchos basados &#x200B;&#x200B;en p&#xE9;ptidos quinasa ensayos se han desarrollado que la fosforilaci&#xF3;n de sustrato mediante fluorescencia medida a base de lecturas. Sin embargo, para algunas quinasas estos ensayos pueden no ser apropiados. En el caso de las quinasas (LIM LIMK), una incapacidad para fosforilar sustratos pept&#xED;dicos result&#xF3; en anteriores alto rendimiento pantallas (HTS) usando marcaci&#xF3;n radiactiva de la prote&#xED;na recombinante cofilina como la lectura. Se describe el desarrollo de un ensayo HTS-compatible que mide los niveles relativos de ATP utilizando luciferasa generado por luminiscencia como una funci&#xF3;n de la actividad LIMK. El ensayo fue de bajo costo para llevar a cabo, y la prueba de principio de detecci&#xF3;n de inhibidores de la quinasa demostrado que la potencia compuesto contra LIMK se pudo determinar, en &#xFA;ltima instancia, el ensayo se utiliz&#xF3; para el procesamiento automatizado de &#xE9;xito de HTS. Despu&#xE9;s de HTS, el formato de ensayo secundaria fue cambiado a obtener medidas m&#xE1;s exactas de la potencia y el mecanismo de acci&#xF3;n mediante la utilizaci&#xF3;n m&#xE1;s complejos (y caros) los ensayos. El ensayo de la luciferasa, sin embargo ofrece un ensayo de primaria de bajo costo y confiable para HTS, que permiti&#xF3; la identificaci&#xF3;n de inhibidores de la LIMK para iniciar los programas de descubrimiento para el eventual tratamiento de las enfermedades humanas.

Rebecca W. Scott

Strathclyde Institute for Pharmacy and Biomedical Sciences

University of Strathclyde

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion