denaturing-gradient-gel-electrophoresis-dgge

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Harvard Medical School

Beta-D-(+) &#x548C; &beta;-L-(-)-&#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x7684; 2&#39;,3&#39;-didehydro-2&#39;,3&#39;-dideoxy-5-fluorocytidine (D4FC) &#x662F;&#x4E34;&#x5E8A;&#x76F8;&#x5173;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6297; hiv &#x548C;&#x6297;&#x4E59;&#x809D;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5DF2;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; L D4FC &#x542B;&#x6709;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x805A;&#x5408;&#x9176; YMDD &#x5730;&#x533A;&#x4E59;&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x5E73;&#x9762; 5-&#x6C1F;&#x80DE;&#x82F7;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x5BF9;&#x7ACB;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3; ymdd &#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176; (RT) &#x4E2D;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x963B;&#x529B;&#xFF0C;&#x96C7;&#x7528;&#x77AC;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x4E0E;&#x5E26;&#x6709; (+) &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C; 3TC TP &#x548C; FTC TP (-) &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BE5;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; RT &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684; D4FC TP.&#x7684; D-(+) &#x548C; L-(-) &#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9AD8;&#x867D;&#x7136;&#x6CA1;&#x6709;&#x62B5;&#x6297;&#x80FD;&#x529B;&#x4E86;&#x6240;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7684;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178; 184 &#x5230; D-D4FC-TP &#x7F2C;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;L-D4FC-TP &#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x7EB3;&#x5165; 50 &#x4E03;&#x5341;&#x500D;&#x7684;&#x8F83;&#x5C11;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x7EB3;&#x5165;&#x4E0B; L-D4FC-TP &#x7684; RT(WT) &#x548C; RT(M184V) &#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F7F;&#x5176;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x770B;&#x5230;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; L &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x542B; oxathiolane &#x73AF;: (-)-3TC-TP &#x548C; (-)-FTC-TP.&#x5206;&#x5B50;&#x5EFA;&#x6A21;&#x8868;&#x660E;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x900A;&#x8272;&#xFF0C;&#x7531; RT(WT) &#x548C;&#x8BE5; TP L D4FC &#x7EB3;&#x5165;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x7684; L-&#x548C; D-D4FC-TP &#x662F;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; D-D4FC-TP&#xFF0C;&#x542B;&#x6709;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x963B;&#x963B;&#x788D;&#x4E86; beta &#x589E;&#x8BBE;&#x5206;&#x652F;&#x4F4D;&#x7F6E; 184 RT(M184V) &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3002;

&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x7684; 2&#39;3 &#39;-didehydro-2&#39;&#xFF0C;3&#39;-&#x8131;&#x6C27;-fluorocytidine &#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; M184V &#x7A81;&#x53D8;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x3002;

Both the beta-D-(+) and beta-L-(-)-enantiomers of 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorocytidine (D4FC) are clinically relevant compounds because of their potent anti-HIV and anti-HBV activities. Cross-resistance to L-D4FC with HBV containing a mutation in the conserved polymerase YMDD region has been observed. In order to better understand the effects of stereochemistry on planar 5-fluorinated cytidine analogs and to gain insight into resistance caused by YMDD mutations in HIV-1 reverse transcriptase (RT), a combination of transient kinetic studies and computer modeling were employed. In contrast to studies with the (+) and (-) isomers of 3TC-TP and FTC-TP, it was found that wild type RT had a high enantiomeric selectivity between the D-(+) and L-(-) isomers of D4FC-TP. While no resistance was conferred by the methionine 184 to valine mutation to D-D4FC-TP, L-D4FC-TP was incorporated 50- to 70-fold less efficiently. The kinetic parameters of incorporation in the presence of L-D4FC-TP by RT(WT) and the mechanism of resistance by RT(M184V) were found to be distinct from those seen with the corresponding L-isomers containing an oxathiolane ring: (-)-3TC-TP and (-)-FTC-TP. Molecular modeling suggests that L- and D-D4FC-TP are positioned in the active site favorably for incorporation by RT(WT) and that L-D4FC-TP, but not D-D4FC-TP, is sterically hindered by the addition of a beta branched amino acid at position 184 of RT(M184V).

Interactions of enantiomers of 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxy-fluorocytidine with wild type and M184V mutant HIV-1 reverse transcriptase.

&#xC0; la fois le b&#xEA;ta-D-(+) et le b&#xEA;ta-L-(-)-&#xE9;nantiom&#xE8;res de 2 &#x26;#39;, 3&#x26;#39;-did&#xE9;hydro-2&#x26;#39;, 3&#x26;#39;-did&#xE9;soxy-5-fluorocytidine (D4FC) sont compos&#xE9;s cliniquement pertinentes en raison de leur puissant anti-VIH et anti-VHB activit&#xE9;s. Une r&#xE9;sistance crois&#xE9;e &#xE0; la L-D4FC par le VHB contenant une mutation dans la r&#xE9;gion conserv&#xE9;e YMDD polym&#xE9;rase a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e. Afin de mieux comprendre les effets de la st&#xE9;r&#xE9;ochimie sur plane analogues de cytidine 5-fluor&#xE9;s et de mieux comprendre la r&#xE9;sistance caus&#xE9;e par des mutations YMDD dans la transcriptase inverse du VIH-1 (RT), une combinaison de transitoires &#xE9;tudes cin&#xE9;tiques et la mod&#xE9;lisation informatique ont &#xE9;t&#xE9; employ&#xE9;es. Contrairement aux &#xE9;tudes avec le (+) et (-) isom&#xE8;res du 3TC-TP et de la FTC-TP, il a &#xE9;t&#xE9; constat&#xE9; que le type sauvage RT avait une haute s&#xE9;lectivit&#xE9; &#xE9;nantiom&#xE9;rique entre le D-(+) et L-(-) isom&#xE8;res de D4FC-TP. Bien qu&#x26;#39;aucune r&#xE9;sistance a &#xE9;t&#xE9; conf&#xE9;r&#xE9; par la m&#xE9;thionine 184 en valine mutation &#xE0; D-D4FC-TP, L-D4FC-TP a &#xE9;t&#xE9; constitu&#xE9;e 50 - &#xE0; 70 fois moins efficace. Les param&#xE8;tres cin&#xE9;tiques de l&#x26;#39;incorporation dans la pr&#xE9;sence de L-D4FC-TP par RT (WT) et le m&#xE9;canisme de r&#xE9;sistance par RT (M184V) ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; &#xEA;tre distincts de ceux observ&#xE9;s avec les correspondants de L-isom&#xE8;res contenant un cycle oxathiolane: (- )-3TC-TP et (-)-FTC-TP. Mod&#xE9;lisation mol&#xE9;culaire indique que L et D-D4FC-TP sont positionn&#xE9;s dans le site actif favorablement pour l&#x26;#39;incorporation par RT (WT) et que la L-D4FC-TP, mais pas D-D4FC-TP, est st&#xE9;riquement emp&#xEA;ch&#xE9; par l&#x26;#39;addition d&#x26;#39;une b&#xEA;ta ramifi&#xE9; acide amin&#xE9; en position 184 du RT (M184V).

Interactions d&#x26;#39;&#xE9;nantiom&#xE8;res de 2 &#x26;#39;, 3&#x26;#39;-did&#xE9;hydro-2&#x26;#39;, 3&#x26;#39;-did&#xE9;soxy-fluorocytidine avec le type sauvage et M184V Mutant VIH-1 Reverse Transcriptase

Wechselwirkungen von Enantiomeren von 2 &#x26;#39;, 3&#x26;#39;-Didehydro-2&#x26;#39;, 3&#x26;#39;-Didesoxy-fluorcytidin, die mit Wildtyp und M184V mutierten HIV-1 reverse Transkriptase ist.

Il beta-D-(+) e il beta-L-(-)-enantiomeri di 2&#39;,3&#39;-didehydro-2&#39;,3&#39;-dideoxy-5-fluorocytidine (D4FC) sono composti clinicamente rilevanti a causa della loro potente attivit&agrave; anti-HIV e anti-HBV. &Egrave; stata osservata resistenza crociata a L-D4FC con HBV contenente una mutazione nella regione conservata polimerasi YMDD. Al fine di meglio comprendere gli effetti della stereochimica su analoghi citidina 5-fluorurati planari e di acquisire approfondita della resistenza causata da mutazioni YMDD in HIV-1 reverse transcriptase (RT), sono stati impiegati una combinazione di studi cinetici transitori e la modellizzazione al computer. In contrasto con gli studi con il (+) e (-) isomeri di 3TC-TP e FTC-TP, &egrave; stato trovato quello selvaggio tipo RT aveva un&#39;elevata selettivit&agrave; enantiomerica tra gli isomeri D-(+) e L-(-) di D4FC-TP. Mentre nessuna resistenza venne conferita da metionina 184 a mutazione valina a D-D4FC-TP, TP-L-D4FC &egrave; stato incorporato 50 - a 70 volte meno efficiente. I parametri cinetici di incorporazione in presenza di L-D4FC-TP da RT(WT) e il meccanismo di resistenza di RT(M184V) sono stati trovati per essere distinti da quelli osservati con il corrispondenti L-isomeri contenente un anello oxathiolane: (-)-3TC-TP e (-)-FTC-modellistica molecolare TP. suggerisce che L - e D-D4FC-TP sono posizionati nel sito attivo favorevolmente per l&#39;incorporazione di RT(WT) e che L-D4FC-TP, ma non D-D4FC-TP, stericamente &egrave; ostacolato dall&#39;aggiunta di un beta ramificata dell&#39;amminoacido in posizione 184 del RT(M184V).

Interazioni di enantiomeri del 2&#39;, 3&#39;-dideidro - 2&#39;, 3&#39;--dideoxy fluorocitidina con wild type e mutanti M184V HIV-1 reverse transcriptase.

&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x3B2;-D-&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;&#x3B2;-L-&#xFF08; - &#xFF09; - &#x93E1;&#x50CF;&#x7570;&#x6027;&#x4F53;2 &#x26;#39;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30B8;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-2&#x26;#39;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30B8;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;-5  -  fluorocytidine&#xFF08;D4FC&#xFF09;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6297;HIV&#x53CA;&#x3073;&#x6297;HBV&#x6D3B;&#x52D5;&#x3002; HBV&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;YMDD&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3068;L-D4FC&#x306B;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x8010;&#x6027;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5E73;&#x9762;5&#x30D5;&#x30C3;&#x7D20;&#x5316;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3067;&#x7ACB;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;HIV-1&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;RT&#xFF09;&#x3001;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;YMDD&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#xFF08; - &#xFF09;&#x7570;&#x6027;&#x4F53;3TC-TP&#x304A;&#x3088;&#x3073;FTC-TP&#x306E;&#x7570;&#x6027;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;RT&#x306F;D-&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;L-&#x9593;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;D4FC-TP&#x3002;&#x5168;&#x304F;&#x62B5;&#x6297;&#x304C;D-D4FC-TP&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x30D0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3078;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;184&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;L-D4FC-TP&#x306F;50&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F; -  70&#x500D;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RT&#xFF08;WT&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;L-D4FC-TP&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;RT&#xFF08;M184V&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B5;&#x30C1;&#x30AA;&#x30E9;&#x30F3;&#x74B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;L-&#x7570;&#x6027;&#x4F53;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#xFF08; - &#xFF09;-3TC-TP&#x3068;&#xFF08; - &#xFF09;-FTC-TP&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;L-&#x304A;&#x3088;&#x3073;D-D4FC-TP&#x306F;&#x3001;RT&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x597D;&#x610F;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;L-D4FC-TP&#x305D;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4ED8;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;D-D4FC-TP&#x3001;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;RT&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;184&#xFF08;M184V&#xFF09;&#x3067;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x5206;&#x5C90;&#x9396;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3002;

2 &#x26;#39;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30B8;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-2&#x26;#39;&#x3001;3&#x26;#39;-&#x30B8;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;-fluorocytidine&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;M184V&#x5909;&#x7570;HIV-1&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x306E;&#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

Beta-D-(+) &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0;-L-(-)-2&#39;,3&#39;-didehydro-2&#39;,3&#39;-dideoxy-5-fluorocytidine (D4FC)&#xC758; enantiomers&#xB294; &#xC784;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB828; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; anti-HIV &#xBC0F; &#xC548;&#xD2F0; HBV &#xD65C;&#xB3D9; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;. &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD6A8;&#xC18C; YMDD &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; HBV&#xC640; L-d4fc&#xB97C; cross-resistance &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xB098;&#xC740; stereochemistry &#xD3C9;&#xBA74; 5 &#xBD88; cytidine &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; hiv-1 &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; (RT)&#xC758; YMDD &#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;, &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. (+) &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; 3TC TP &#xBC0F; TP &#xACF5;&#xC815; &#xC704; (-) &#xC131;&#xCCB4;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; RT &#xD588;&#xB2E4; tp D4FC. D-(+) &#xBC0F; L-(-) &#xC131;&#xCCB4; &#xC0AC;&#xC774; &#xB192;&#xC740; enantiomeric &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; L D4FC TP&#xB294; &#xC800;&#xD56D; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; 184 D D4FC TP&#xB97C; valine &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218; &#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 50-&#xC5D0; 70 &#xBC30; &#xB35C;&#xC744; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD30C; &#xB2C8; L-D4FC-RT(WT)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC874;&#xC7AC; &#xAD00; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xBC0F; RT(M184V)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD56D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; oxathiolane &#xBC18;&#xC9C0;&#xAC00; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD574;&#xB2F9; L &#xC131;&#xCCB4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF8; &#xAC83; &#xB2E4;&#xB97C; &#xC218;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;: (-)-3TC-TP&#xC640; (-)-&#xACF5;&#xC815; &#xC704;-tp. &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC81C;&#xC548; L-&#xBC0F; D-D4FC-TP&#xB294; &#xD638;&#xC758; RT(WT) &#xBC0F; &#xADF8; L D4FC TP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC30;&#xCE58;&#xC544;&#xB2C8; D-D4FC-TP, sterically&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC758; &#xCE21; &#xC1C4; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 184 RT(M184V)&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C;.

&#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; 2&#39; enantiomers&#xC758; 3&#39;-didehydro-2&#39;, 3&#39;-&#xBBF8;&#xCE58;&#xAE30;-fluorocytidine M184V &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; hiv-1 &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xC885;&#xB958;&#xC640;.

Tanto la beta-D-(+) y beta-L-(-)-enanti&#xF3;meros de 2 &#x26;#39;, 3&#x26;#39;-dideshidro-2&#x26;#39;, 3&#x26;#39;-didesoxi-5-fluorocitidina (D4FC) son compuestos cl&#xED;nicamente relevantes debido a su potente anti-VIH y anti-VHB. La resistencia cruzada a la L-D4FC con VHB que contiene una mutaci&#xF3;n en la regi&#xF3;n conservada de la polimerasa YMDD ha sido observado. A fin de comprender mejor los efectos de la estereoqu&#xED;mica en la plana de 5 fluorados an&#xE1;logos de citidina y para profundizar en la resistencia causada por mutaciones en la transcriptasa YMDD del VIH-1 reversa (RT), una combinaci&#xF3;n de transitorios estudios cin&#xE9;ticos y modelos inform&#xE1;ticos estaban empleados. En contraste con los estudios con el (+) y (-) is&#xF3;meros de 3TC-TP y TP-FTC, se encontr&#xF3; que de tipo salvaje RT ten&#xED;a una alta selectividad enantiom&#xE9;rica entre la D-(+) y L-(-) de is&#xF3;meros D4FC-TP. Aunque no opuso resistencia fue conferido por la metionina a valina 184 mutaci&#xF3;n D-D4FC-TP, L-D4FC-TP fue incorporado 50 - a 70 veces menos eficiente. Los par&#xE1;metros cin&#xE9;ticos de incorporaci&#xF3;n en la presencia de L-D4FC-TP por RT (WT) y el mecanismo de resistencia por RT (M184V) se encontraron para ser distinto de los observados con los correspondientes L-is&#xF3;meros que contienen un anillo oxatiolano: (- )-3TC-TP y (-)-FTC-TP. Modelado molecular sugiere que la L-y D-D4FC TP-est&#xE1;n posicionados en el sitio activo favorablemente para su incorporaci&#xF3;n por RT (WT) y que la L-D4FC TP-, pero no D-D4FC-TP, est&#xE1; est&#xE9;ricamente impedido por la adici&#xF3;n de un beta ramificado amino&#xE1;cido en la posici&#xF3;n 184 de la RT (M184V).

Interacciones de enanti&#xF3;meros de 2 &#x26;#39;, 3&#x26;#39;-dideshidro-2&#x26;#39;, 3&#x26;#39;-didesoxi-fluorocitidina con el tipo salvaje y mutante M184V VIH-1 Transcriptasa Inversa

&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x54CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x64AE;&#x5408; (RssB) &#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x4ED8; ClpXP &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x897F;&#x683C;&#x739B;&#x56E0;&#x5B50; Rpo &#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF1A; Rpo &#x5BF9;&#x6570;&#x9636;&#x6BB5;&#x88AB;&#x964D;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53D8;&#x5F97;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540E;&#x78B3;&#x7684;&#x9965;&#x997F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5176;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x64AE;&#x5408;&#x5305;&#x542B;&#x4E0E;&#x5B88;&#x6052;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9; &#xFF08;D58&#xFF09; &#x5219;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5F53;&#x65F6;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x5047;&#x8BBE;&#x6B64;&#x63A7;&#x4EF6;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x64AE;&#x5408;&#x4E0E;&#x76D1;&#x89C6;&#x7684; Rpo &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x78B3;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9; (D58A)&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x64AE;&#x5408;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F5C;&#x51FA;&#x4E86;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4ECD;&#x7BA1;&#x5236;&#x540E;&#x78B3;&#x9965;&#x997F;&#x7684; Rpo &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x64AE;&#x5408;&#x65F6;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x78F7;&#x9178;&#x3002;

Rpo &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x88AB;&#x53D7;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x64AE;&#x5408; &#xFF08;RssB&#xFF09; &#x53CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

In Escherichia coli the response regulator SprE (RssB) facilitates degradation of the sigma factor RpoS by delivering it to the ClpXP protease. This process is regulated: RpoS is degraded in logarithmic phase but becomes stable upon carbon starvation, resulting in its accumulation. Because SprE contains a CheY domain with a conserved phosphorylation site (D58), the prevailing model posits that this control is mediated by phosphorylation. To test this model, we mutated the conserved response regulator phosphorylation site (D58A) of the chromosomal allele of sprE and monitored RpoS levels in response to carbon starvation. Though phosphorylation contributed to the SprE basal activity, we found that RpoS proteolysis was still regulated upon carbon starvation. Furthermore, our results indicate that phosphorylation of wild-type SprE occurs by a mechanism that is independent of acetyl phosphate.

RpoS proteolysis is regulated by a mechanism that does not require the SprE (RssB) response regulator phosphorylation site.

Chez Escherichia coli le r&#xE9;gulateur de r&#xE9;ponse Spre (RSSB) facilite la d&#xE9;gradation des RpoS facteur sigma en la remettant &#xE0; la prot&#xE9;ase ClpXP. Ce processus est r&#xE9;gul&#xE9;: RpoS est d&#xE9;grad&#xE9;e en phase logarithmique, mais devient stable sur la famine de carbone, ce qui entra&#xEE;ne son accumulation. Parce que Spre contient un domaine CheY avec un site de phosphorylation conserv&#xE9; (D58), les pose du mod&#xE8;le en vigueur que ce contr&#xF4;le est m&#xE9;di&#xE9;e par la phosphorylation. Pour tester ce mod&#xE8;le, nous avons mut&#xE9; le site de r&#xE9;ponse conserv&#xE9;e r&#xE9;gulateur de phosphorylation (D58A) de l&#x26;#39;all&#xE8;le chromosomique de spre et surveill&#xE9;s niveaux RpoS en r&#xE9;ponse &#xE0; la famine de carbone. Bien que la phosphorylation contribu&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;activit&#xE9; basale Spre, nous avons constat&#xE9; que la prot&#xE9;olyse RpoS &#xE9;tait encore r&#xE9;gl&#xE9; &#xE0; la famine de carbone. En outre, nos r&#xE9;sultats indiquent que la phosphorylation de type sauvage Spre se produit par un m&#xE9;canisme qui est ind&#xE9;pendant de phosphate d&#x26;#39;ac&#xE9;tyle.

Prot&#xE9;olyse RpoS est r&#xE9;gul&#xE9;e par un m&#xE9;canisme qui ne n&#xE9;cessite pas la SPRE (RSSB) site de phosphorylation r&#xE9;ponse du r&#xE9;gulateur

RpoS Proteolyse wird durch einen Mechanismus, der keine der SPRE (RSSB) Response-Regulator Phosphorylierungsstelle geregelt.

In Escherichia coli il regolatore di risposta SprE (RssB) facilita la degradazione del fattore sigma RpoS conferendolo a proteasi ClpXP. Questo processo &egrave; regolato: RpoS &egrave; degradata in fase logaritmica ma diventa stabile sulla fame di carbonio, con conseguente suo accumulo. Perch&eacute; SprE contiene un dominio CheY con un sito di fosforilazione conservata (D58), il modello prevalente postula che questo controllo &egrave; mediato dalla fosforilazione. Per testare questo modello, abbiamo mutato il sito di fosforilazione del regolatore di risposta conservata (D58A) dell&#39;allele cromosomico di sprE e monitorati RpoS livelli in risposta alla fame di carbonio. Anche se la fosforilazione ha contribuito all&#39;attivit&agrave; basale SprE, abbiamo trovato che RpoS proteolisi era ancora regolata su fame di carbonio. Inoltre, i nostri risultati indicano che la fosforilazione del selvaggio-tipo SprE si verifica con un meccanismo che &egrave; indipendente da acetil fosfato.

RpoS proteolisi sono regolata da un meccanismo che non richiedono il sito di fosforilazione regolatore risposta SprE (RssB).

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5185;&#x3067;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;SPRE&#xFF08;RssB&#xFF09;&#x304C;ClpXP&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x56E0;&#x5B50;RPOS&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RPOS&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x6570;&#x5897;&#x6B96;&#x671F;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SPRE&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF08;D58&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x73FE;&#x884C;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;SPRE&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x76E3;&#x8996;RPOS&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF08;D58A&#xFF09;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;SPRE&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RPOS&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;SPRE&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RPOS&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x3001;SPRE&#xFF08;RssB&#xFF09;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; SprE (RssB) ClpXP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; &#xC778;&#xC790; Rpos&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC740; &#xADDC;&#xC81C;: RpoS &#xB85C;&#xADF8; &#xC704;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC800;&#xD558; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544; &#xC2DC; &#xC548;&#xC815; &#xB41C;&#xB2E4;. SprE &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (D58) CheY &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774;&#xC774; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC740; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; posits. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Spre&#xC640; &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xB41C; RpoS &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (D58A) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; SprE &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; RpoS &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xC544;&#xC9C1; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; SprE &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RpoS &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; SprE (RssB) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En Escherichia coli regulador de la respuesta SPRE (RSSB) facilita la degradaci&#xF3;n de factor sigma RpoS mediante la entrega a la proteasa ClpXP. Este proceso est&#xE1; regulado: RpoS se degrada en fase logar&#xED;tmica, pero se hace estable a la inanici&#xF3;n de carbono, dando como resultado su acumulaci&#xF3;n. Debido a que contiene un dominio SPRE CheY con un sitio de fosforilaci&#xF3;n conservadas (D58), postula el modelo imperante de que este control est&#xE1; mediada por la fosforilaci&#xF3;n. Para probar este modelo, el regulador mutado conservado la respuesta sitio de fosforilaci&#xF3;n (D58A) del alelo cromos&#xF3;mico de SPRE y control de los niveles RpoS en respuesta a la inanici&#xF3;n de carbono. Aunque la fosforilaci&#xF3;n contribuido a la actividad basal SPRE, hemos encontrado que la proteolisis RpoS estaba regulado todav&#xED;a a la inanici&#xF3;n de carbono. Adem&#xE1;s, nuestros resultados indican que la fosforilaci&#xF3;n de tipo salvaje SPRE se produce por un mecanismo que es independiente de fosfato de acetilo.

La prote&#xF3;lisis RpoS est&#xE1; regulada por un mecanismo que no requiere de la SPRE (RSSB) regulador de la respuesta sitio de fosforilaci&#xF3;n

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x9965;&#x997F;&#x996E;&#x98DF;&#xFF1A; &#x5FC5;&#x9700;&#x8425;&#x517B;&#x7D20;&#x6743;&#x8861;&#x660E;&#x663E;&#x3002;

Escherichia coli starvation diets: essential nutrients weigh in distinctly.

Les r&#xE9;gimes Escherichia Coli famine: les nutriments essentiels Peser dans Nettement

Escherichia-coli-Hunger-Di&auml;ten: wesentliche N&auml;hrstoffe wiegen deutlich.

Diete fame di Escherichia coli: nutrienti essenziali pesano distintamente.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x98E2;&#x9913;&#x306E;&#x98DF;&#x4E8B;&#x7642;&#x6CD5;&#xFF1A;&#x5FC5;&#x9808;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x91CD;&#x91CF;&#x3092;&#x91CF;&#x308B;

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xAE30;&#xC544; &#xB2E4;&#xC774;&#xC5B4;&#xD2B8;: &#xD544;&#xC218; &#xC601;&#xC591;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xBB34;&#xAC8C;.

Escherichia Coli dietas de hambre: Los nutrientes esenciales Pesar Claramente

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5E73;&#x7A33;&#x9636;&#x6BB5;&#x897F;&#x683C;&#x739B;&#x56E0;&#x5B50; Rpo &#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x662F;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EA7;&#x522B;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x538B;&#x529B;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11; Rpo &#x6C34;&#x5E73;&#x662F;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; LrhA&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x7403;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x97AD;&#x6BDB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8981;&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x79CD;&#x538B;&#x5236;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x9001;&#x5165;&#x672C;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; LrhA &#x538B;&#x6291;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5C0F; RNA (&#x8428;&#x6469;&#x4E9A;) &#x4F34;&#x4FA3; Hfq Rpo&#x3002;&#x867D;&#x7136; LrhA &#x8FD8;&#x538B;&#x6291;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x65AF;&#x5C14;&#x7EB3; RprA&#xFF0C;&#x4E0E; RprA &#x65E0;&#x5173;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D1;&#x751F;&#x53CA;&#x5176;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684; Rpo&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FD9;&#x6761;&#x6B65;&#x9053;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5C4F;&#x5E55;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x67E5;&#x627E;&#x5F71;&#x54CD; LrhA &#x6D3B;&#x52A8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;RcsCDB phosphorelay &#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FE1;&#x5C01;&#x5E94;&#x529B;&#x4F20;&#x611F;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x627E;&#x6765;&#x538B;&#x5236; lrhA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DNA &#x9A6C;&#x8FBE;&#x86CB;&#x767D; FtsK &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC; lrhA &#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6216;&#x8BB8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x4EC0;&#x4E48;&#x8FD9;&#x79CD;&#x83CC;&#x682A;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5806;&#x79EF;&#x5728;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x7684; Rpo&#x3002;

LrhA &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86; Rpo &#x7FFB;&#x8BD1;&#x4E2D;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684; Rcs phosphorelay &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;

Regulation of the Escherichia coli stationary-phase sigma factor RpoS is complex and occurs at multiple levels in response to different environmental stresses. One protein that reduces RpoS levels is the transcription factor LrhA, a global regulator of flagellar synthesis. Here we clarify the mechanism of this repression and provide insight into the signaling pathways that feed into this regulation. We show that LrhA represses RpoS at the level of translation in a manner that is dependent on the small RNA (sRNA) chaperone Hfq. Although LrhA also represses the transcription of the sRNA RprA, its regulation of RpoS mainly occurs independently of RprA. To better understand the physiological signals affecting this pathway, a transposon mutagenesis screen was carried out to find factors affecting LrhA activity levels. The RcsCDB phosphorelay system, a cell envelope stress-sensing pathway, was found to repress lrhA synthesis. In addition, mutations in the gene encoding the DNA motor protein FtsK induce lrhA synthesis, which may explain why such strains fail to accumulate RpoS in stationary phase.

LrhA regulates rpoS translation in response to the Rcs phosphorelay system in Escherichia coli.

R&#xE8;glement des Escherichia coli phase stationnaire RpoS facteur sigma est complexe et se produit &#xE0; de multiples niveaux, en r&#xE9;ponse &#xE0; diff&#xE9;rents stress environnementaux. Une prot&#xE9;ine qui r&#xE9;duit les niveaux RpoS est le facteur de transcription LRHA, un r&#xE9;gulateur global de la synth&#xE8;se des flagelles. Ici, nous pr&#xE9;ciser le m&#xE9;canisme de cette r&#xE9;pression et donnent un aper&#xE7;u des voies de signalisation qui alimentent dans le pr&#xE9;sent r&#xE8;glement. Nous montrons que LRHA r&#xE9;prime RpoS au niveau de la traduction d&#x26;#39;une mani&#xE8;re qui d&#xE9;pend de la Hfq petit ARN chaperon (ARNs). Bien que LRHA r&#xE9;prime aussi la transcription de la RprA ARNs, de son r&#xE8;glement de RpoS se produit principalement ind&#xE9;pendamment de RprA. Afin de mieux comprendre les signaux physiologiques qui affectent cette voie, un &#xE9;cran mutagen&#xE8;se par transposon a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;e pour trouver des facteurs qui influent sur les niveaux d&#x26;#39;activit&#xE9; LRHA. Le RcsCDB phosphorelais syst&#xE8;me, une enveloppe de la cellule au stress voie de d&#xE9;tection, a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; pour r&#xE9;primer la synth&#xE8;se LRHA. En outre, des mutations dans le g&#xE8;ne codant pour l&#x26;#39;ADN du moteur prot&#xE9;ines FtsK induire la synth&#xE8;se LRHA, ce qui peut expliquer pourquoi de telles souches ne parviennent pas &#xE0; accumuler des RpoS dans la phase stationnaire.

LRHA R&#xE9;gule Traduction RpoS en r&#xE9;ponse &#xE0; le syst&#xE8;me RCS phosphorelais dans Escherichia Coli

Verordnung &uuml;ber die Escherichia-coli-station&auml;r-Phase-Sigma-Faktor RpoS ist komplex und erfolgt auf mehreren Ebenen als Reaktion auf verschiedene Umwelteinfl&uuml;sse. Ein Protein, das RPO Ebenen reduziert ist der Transkriptionsfaktor LrhA, einen globalen Regulator der Flimmerband Synthese. Hier kl&auml;ren wir den Mechanismus der Repression und geben Einblick in die Signalwege, die in dieser Verordnung einflie&szlig;en. Wir zeigen, dass LrhA RpoS auf der Ebene der &Uuml;bersetzung in einer Weise unterdr&uuml;ckt, die das kleine RNA (sRNA) Chaperone Hfq abh&auml;ngig ist. Obwohl LrhA auch die Transkription von der sRNA unterdr&uuml;ckt RprA, seine Verordnung von RpoS tritt vor allem unabh&auml;ngig von RprA. Zum besseren Verst&auml;ndnis die physiologische Signale, die auf diesem Weg wurde ein Transposon-Mutagenese-Bildschirm durchgef&uuml;hrt, um Faktoren, die LrhA-Aktivit&auml;t zu finden. RcsCDB-Phosphorelay-System, eine Zelle Umschlag Druck-Sensorik Weg wurde gefunden, LrhA-Synthese zu unterdr&uuml;cken. Au&szlig;erdem induzieren Mutationen im Gen f&uuml;r das motor DNA-Protein-FtsK LrhA-Synthese, was erkl&auml;ren k&ouml;nnte, warum scheitern solche Belastungen RpoS in station&auml;ren Phase ansammeln.

LrhA regelt RpoS &Uuml;bersetzung als Reaktion auf das Rcs-Phosphorelay-System in Escherichia coli.

Regolamento di Escherichia coli fase stazionaria fattore sigma RpoS &egrave; complessa e si verifica a pi&ugrave; livelli in risposta alle diverse sollecitazioni ambientali. Una proteina che riduce i livelli di RpoS &egrave; il fattore di trascrizione LrhA, un regolatore globale di sintesi flagellari. Qui noi chiarire il meccanismo di questa repressione e permettono di percepire le vie di segnalazione che alimentano questo regolamento. Mostriamo che LrhA reprime RpoS a livello della traduzione in un modo che dipende il chaperone piccolo RNA (sRNA) Hfq. Sebbene LrhA inoltre reprime la trascrizione del sRNA RprA, suo regolamento di RpoS principalmente si verifica indipendentemente dalla RprA. Per capire meglio i segnali fisiologici che interessano questo percorso, uno schermo di mutagenesi transposon fu effettuato per trovare i fattori che influenzano i livelli di attivit&agrave; LrhA. Il sistema di phosphorelay di RcsCDB, una busta lo stress-sensing via delle cellule, &egrave; stato trovato a reprimere lrhA sintesi. Inoltre, mutazioni nel gene che codifica per la proteina motore DNA FtsK inducono sintesi lrhA, che pu&ograve; spiegare perch&eacute; tali ceppi non riescono ad accumulare RpoS in fase stazionaria.

LrhA regola rpoS traduzione in risposta al sistema Rcs phosphorelay in Escherichia coli.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5B9A;&#x5E38;&#x671F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;RPOS&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x74B0;&#x5883;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RPOS&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;LrhA&#x3001;&#x97AD;&#x6BDB;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6291;&#x5727;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x9001;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;LrhA&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;RNA&#xFF08;&#x5468;&#x671F;&#xFF09;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;HFQ&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;RPOS&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; LrhA&#x3082;&#x591A;&#x6570;&#x5468;&#x671F;RprA&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;RPOS&#x305D;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;RprA&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x753B;&#x9762;&#x304C;LrhA&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002; RcsCDB&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7CFB;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;lrhA&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;DNA&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;FtsK&#x3068;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x682A;&#x306F;&#x5B9A;&#x5E38;&#x671F;&#x306B;RPOS&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x3066;&#x5931;&#x6557;&#x3059;&#x308B;&#x7406;&#x7531;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;lrhA&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

LrhA&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;RCS&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;RPOS&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xACE0;&#xC815; &#xC704;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; &#xC778;&#xC790; RpoS &#xADDC;&#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xD658;&#xACBD; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. RpoS &#xC218;&#xC900; &#xAC10;&#xC18C; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; LrhA, flagellar &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xD655;&#xD788;&#xC774; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; LrhA &#xB204;&#xB974;&#xB294; RpoS &#xC791;&#xC740; RNA (sRNA) &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; Hfq&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; LrhA &#xB610;&#xD55C; &#xB204;&#xB974;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC;&#xB294; Srna&#xC758; RprA, RpoS &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; RprA &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB354; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; transposon mutagenesis &#xD654;&#xBA74; LrhA &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC694;&#xC778;&#xC744; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB410;&#xB2E4;. RcsCDB phosphorelay &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC140; &#xBD09;&#xD22C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD1B5;&#xB85C;, lrhA &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5; &#xB204;&#xB974;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, DNA &#xBAA8;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; FtsK &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xBCC0;&#xC885; RpoS &#xC313;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB3C4;&#xB85D; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC720;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; lrhA &#xD569;&#xC131; &#xC720;&#xB3C4;.

LrhA &#xC870;&#xC808; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; Rcs phosphorelay &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0; rpoS &#xBC88;&#xC5ED;.

La regulaci&#xF3;n de los Escherichia coli fase estacionaria factor sigma RpoS es compleja y se produce a varios niveles en respuesta a diferentes estreses ambientales. Una prote&#xED;na que reduce los niveles de RpoS es el factor de transcripci&#xF3;n LrhA, un regulador global de la s&#xED;ntesis flagelar. Aqu&#xED; aclarar el mecanismo de la represi&#xF3;n y dar una idea de las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que se alimentan en el presente Reglamento. Se demuestra que reprime LrhA RpoS a nivel de la traducci&#xF3;n de una manera que depende de la Hfq chaper&#xF3;n peque&#xF1;o ARN (sRNA). Aunque LrhA tambi&#xE9;n reprime la transcripci&#xF3;n de la RPRa sRNA, su regulaci&#xF3;n de RpoS, principalmente se produce independientemente de RPRa. Para entender mejor las se&#xF1;ales fisiol&#xF3;gicas que afectan a esta v&#xED;a, una pantalla de mutag&#xE9;nesis de transposones se llev&#xF3; a cabo para encontrar los factores que afectan los niveles de actividad LrhA. El RcsCDB phosphorelay sistema, una envoltura de c&#xE9;lulas del estr&#xE9;s de detecci&#xF3;n v&#xED;a, fue encontrado para reprimir la s&#xED;ntesis lrhA. Adem&#xE1;s, las mutaciones en el gen que codifica el ADN prote&#xED;na motora FtsK inducir la s&#xED;ntesis de lrhA, lo que podr&#xED;a explicar por qu&#xE9; estas cepas no se acumulan RpoS en fase estacionaria.

LrhA Regula la traducci&#xF3;n RpoS en respuesta al sistema RCS Phosphorelay en Escherichia Coli

&#x4EE3;&#x8C22;&#x7EC4;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x5F97;&#x4E0D;&#x5230;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x91CF;&#x5316;&#x5927;&#x91CF;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5EA7; (LC) &#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x7535;&#x55B7;&#x96FE;&#x7535;&#x79BB;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31; (ESI-MS/MS) 141 &#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x592E;&#x78B3;&#x3001; &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x548C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x6D4B;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6240;&#x9009;&#x62E9;&#x7684; LC &#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EB2;&#x6C34;&#x4F5C;&#x7528;&#x8272;&#x8C31;&#x6C28;&#x57FA;&#x67F1;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5206;&#x9694;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x672A;&#x80FD;&#x4FDD;&#x6301;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x53CD;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x7684;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;MS/MS &#x68C0;&#x6D4B;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x626B;&#x63CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x65E0;&#x6570;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E09;&#x91CD;&#x56DB;&#x6781;&#x6746;&#x4EEA;&#x5668;&#x76D1;&#x6D4B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5F53;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x53D1;&#x5C55;&#x58EE;&#x5927; [12 C] &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x65F6;-[13 C] &#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x4E0E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x9002;&#x5F53; 12 C-13 C-79 &#x4E0D;&#x540C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x3002;

&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x4EB2;&#x6C34;&#x4F5C;&#x7528;&#x8272;&#x8C31;&#x4E32;&#x8054;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;

A key unmet need in metabolomics is the ability to efficiently quantify a large number of known cellular metabolites. Here we present a liquid chromatography (LC)-electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) method for reliable measurement of 141 metabolites, including components of central carbon, amino acid, and nucleotide metabolism. The selected LC approach, hydrophilic interaction chromatography with an amino column, effectively separates highly water soluble metabolites that fail to retain using standard reversed-phase chromatography. MS/MS detection is achieved by scanning through numerous selected reaction monitoring events on a triple quadrupole instrument. When applied to extracts of Escherichia coli grown in [12C]- versus [13C]glucose, the method reveals appropriate 12C- and 13C-peaks for 79 different metabolites.

Separation and quantitation of water soluble cellular metabolites by hydrophilic interaction chromatography-tandem mass spectrometry.

Un besoin essentiel non satisfait dans la m&#xE9;tabolomique est la capacit&#xE9; &#xE0; quantifier efficacement un grand nombre de m&#xE9;tabolites connus cellulaires. Nous pr&#xE9;sentons ici une chromatographie en phase liquide (LC)-ionisation par &#xE9;lectron&#xE9;bulisation spectrom&#xE9;trie de masse tandem (ESI-MS/MS) m&#xE9;thode de mesure fiable de 141 m&#xE9;tabolites, y compris les composants de carbone central, un acide amin&#xE9;, et du m&#xE9;tabolisme des nucl&#xE9;otides. L&#x26;#39;approche choisie LC, chromatographie d&#x26;#39;interaction hydrophile avec une colonne amin&#xE9;s, s&#xE9;pare de mani&#xE8;re efficace l&#x26;#39;eau hautement m&#xE9;tabolites solubles qui ne parviennent pas &#xE0; conserver en utilisant la norme chromatographie en phase inverse. MS / MS de d&#xE9;tection est r&#xE9;alis&#xE9;e par num&#xE9;risation par le biais de nombreux &#xE9;v&#xE9;nements s&#xE9;lectionn&#xE9;s de surveillance de r&#xE9;action sur un instrument &#xE0; triple quadrip&#xF4;le. Lorsqu&#x26;#39;il est appliqu&#xE9; &#xE0; des extraits d&#x26;#39;Escherichia coli cultiv&#xE9;es en [12C] - versus [13C] glucose, la m&#xE9;thode r&#xE9;v&#xE8;le appropri&#xE9;es 12C-13C et des pics de 79 m&#xE9;tabolites diff&#xE9;rents.

S&#xE9;paration et quantification des m&#xE9;tabolites cellulaires solubles dans l&#x26;#39;eau par spectrom&#xE9;trie de chromatographie en phase hydrophile Interaction de masse en tandem

Eine wichtige ungedeckten Bedarf in Metabolomics ist die F&auml;higkeit, eine gro&szlig;e Anzahl von bekannten zellul&auml;ren Metaboliten effizient quantifizieren. Hier pr&auml;sentieren wir Ihnen ein Fl&uuml;ssigchromatographie (LC)-Electrospray Ionisierung Tandem-Massenspektrometrie (ESI-MS/MS) Methode f&uuml;r zuverl&auml;ssige Messung 141 Stoffwechsel-, einschlie&szlig;lich Komponenten der zentralen Kohlenstoff, Aminos&auml;ure und Nukleotid-Stoffwechsel. Der ausgew&auml;hlte LC-Ansatz, hydrophile Interaktion Chromatographie mit einer amino-Spalte trennt effektiv hoch wasserl&ouml;slichen Metaboliten, die nicht mit standard Umkehrphasen-Chromatographie zu behalten. MS/MS-Detektion erfolgt durch Scannen durch zahlreiche &Uuml;berwachung ausgew&auml;hlten Reaktion-Veranstaltungen auf einem triple Quadrupol-Instrument. Bei Anwendung auf Ausz&uuml;ge von Escherichia coli [12 C] angebaut - im Vergleich [13 C] Glukose, die Methode zeigt entsprechende 12 C- und 13 C - Pieks f&uuml;r 79 verschiedenen Metaboliten.

Trennung und quantitative Bestimmung der wasserl&ouml;slichen zellul&auml;ren Metaboliten von hydrophilen Interaktion Chromatographie-Tandem-Massenspektrometrie.

Una chiave necessit&agrave; insoddisfatte in metabolomica &egrave; la capacit&agrave; di quantificare in modo efficiente un gran numero di metaboliti cellulari conosciuti. Qui vi presentiamo una cromatografia liquida (LC)-electrospray ionizzazione tandem spettrometria di massa (ESI-MS/MS) metodo per la misura affidabile dei 141 metaboliti, compresi i componenti di carbonio centrale, aminoacidi e metabolismo del nucleotide. L&#39;approccio di LC selezionata, cromatografia di interazione idrofilo con una colonna di aminoacidi, separa efficacemente altamente metaboliti solubili in acqua che non riescono a mantenere utilizzando standard cromatografia in controfase. Rilevamento di MS/MS &egrave; raggiunto mediante la scansione attraverso numerosi eventi di monitoraggio reazione selezionata su uno strumento triplo quadrupolo. Quando viene applicato agli estratti di Escherichia coli coltivati in [12 C] - versus glucosio [13 C], il metodo rivela appropriato C - 12 e 13 C - cime per 79 differenti metaboliti.

Separazione e quantificazione di metaboliti cellulari solubili in acqua di spettrometria di massa tandem cromatografia interazione idrofilo.

&#x30E1;&#x30BF;&#x30DC;&#x30ED;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;LC&#xFF09;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;ESI-MS/MS&#xFF09;&#x4E2D;&#x592E;&#x70AD;&#x7D20;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;141&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3001;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;LC&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x9006;&#x76F8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x4FDD;&#x6301;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MS / MS&#x691C;&#x51FA;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x56DB;&#x91CD;&#x6975;&#x6A5F;&#x5668;&#x3067;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8D70;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; [12C]&#x3067;&#x80B2;&#x3063;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408; - &#x5BFE;[13C]&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;79&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;12C&#x3068;13C-&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;

Metabolomics&#xC5D0; &#xD0A4; unmet &#xD544;&#xC694; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xB97C; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; (LC)-&#xBD84;&#xBB34; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (ESI MS/MS) &#xC911;&#xC559; &#xD0C4;&#xC18C;, &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;, &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xB300;&#xC0AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; 141 &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCE21;&#xC815; &#xBC29;&#xBC95;. &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; LC &#xC811;&#xADFC;, &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC5F4;&#xACFC; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xD45C;&#xC900; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C; &#xBD84;&#xB9AC;. MS/MS &#xAC80;&#xCD9C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; quadrupole &#xC545;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC120;&#xD0DD;&#xB41C; &#xBC18;&#xC751; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. [12C]&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xB780; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;-[13 C] &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB300; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; C-12&#xC640; 13 C-79 &#xB2E4;&#xB978; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD09;&#xC6B0;&#xB9AC;.

&#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xD0E0;&#xB364; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;.

Una necesidad no satisfecha clave en metabol&#xF3;mica es la capacidad para cuantificar eficientemente un gran n&#xFA;mero de conocidos metabolitos celulares. Aqu&#xED; les presentamos una cromatograf&#xED;a l&#xED;quida (LC)-ionizaci&#xF3;n por electrospray y espectrometr&#xED;a de masas en t&#xE1;ndem (ESI-MS/MS) m&#xE9;todo de medici&#xF3;n fiable de 141 metabolitos, incluyendo los componentes de la central de carbono, amino&#xE1;cidos y el metabolismo de nucle&#xF3;tidos. El enfoque seleccionado LC, cromatograf&#xED;a de interacci&#xF3;n hidr&#xF3;fila con una columna amino, separa efectivamente metabolitos solubles altamente agua que no logran retener usando est&#xE1;ndar cromatograf&#xED;a en fase inversa. MS / MS de detecci&#xF3;n se logra mediante la exploraci&#xF3;n a trav&#xE9;s de numerosos eventos seleccionados de reacci&#xF3;n de control sobre un instrumento de triple cuadrupolo. Cuando se aplica a los extractos de E. coli se cultivan en [12C] - en comparaci&#xF3;n con [13C] glucosa, revela el m&#xE9;todo apropiado de 12C y 13C-picos de 79 metabolitos diferentes.

La separaci&#xF3;n y cuantificaci&#xF3;n de los metabolitos celulares solubles de agua por espectrometr&#xED;a de cromatograf&#xED;a de interacci&#xF3;n hidrof&#xED;lica-de masas en t&#xE1;ndem

&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x662F;&#x4E3B;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5EF6;&#x7F13;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8870;&#x8001;&#x548C;&#x589E;&#x957F;&#x88AB;&#x6355;&#x671F;&#x95F4;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5177;&#x6709;&#x4E00;&#x822C;&#x5E94;&#x529B;&#x4FDD;&#x62A4;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x89E6;&#x53D1;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x9519;&#x8BEF;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x63D0;&#x5347;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5E73;&#x79FB;&#x4FDD;&#x771F;&#x5EA6;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x8870;&#x51CF;&#x7684; Rpo regulon &#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x540E;&#x78B3;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x6821;&#x5BF9;&#x8981;&#x6C42;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x8BC6;&#x522B;&#x56E0;&#x5B50;&#x64AE;&#x5408; &#xFF08;RssB&#xFF09; &#x548C; ClpXP &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x5C06;&#x6210;&#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540E;&#x7531;&#x4E8E; ClpP &#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x9965;&#x997F;&#x548C;&#x6B64;&#x56FA;&#x78B3;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x9519;&#x8BEF;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;ClpP &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x62B5;&#x6D88;&#x9965;&#x997F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x897F;&#x683C;&#x739B; &#xFF08;S&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C; ClpXP &#x57FA;&#x677F; (ssrA &#x6807;&#x8BB0; GFP) &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x7A33;&#x5B9A;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x5728;&#x5448;&#x6307;&#x6570;&#x7EA7;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x897F;&#x683C;&#x739B; (S) &#x540E;&#x78B3;&#x7684;&#x9965;&#x997F;&#xFF0C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4FDD;&#x771F;&#x5EA6;&#x548C;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5BCC;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x964D;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x78B3;&#x9965;&#x997F;&#x65F6;&#x7684;&#x4E3B;&#x5E94;&#x529B;&#x54CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784; sigmaS&#x3002;

The sigma(S) subunit of RNA polymerase is a master regulator of Escherichia coli that retards cellular senescence and bestows cells with general stress protective functions during growth arrest. We show that mutations and drugs triggering translational errors elevate sigma(S) levels and stability. Furthermore, mutations enhancing translational fidelity attenuate induction of the rpoS regulon and prevent stabilization of sigma(S) upon carbon starvation. Destabilization of sigma(S) by increased proofreading requires the presence of the sigma(S) recognition factor SprE (RssB) and the ClpXP protease. The data further suggest that sigma(S) becomes stabilized upon starvation as a result of ClpP sequestration and this sequestration is enhanced by oxidative modifications of aberrant proteins produced by erroneous translation. ClpP overproduction counteracted starvation-induced stabilization of sigma(S), whereas overproduction of a ClpXP substrate (ssrA-tagged GFP) stabilized sigma(S) in exponentially growing cells. We present a model for the sequence of events leading to the accumulation and activation of sigma(S) upon carbon starvation, which are linked to alterations in both ribosomal fidelity and efficiency.

Decline in ribosomal fidelity contributes to the accumulation and stabilization of the master stress response regulator sigmaS upon carbon starvation.

Le sigma (S) sous-unit&#xE9; de l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase est un ma&#xEE;tre r&#xE9;gulateur de Escherichia coli, qui retarde la s&#xE9;nescence cellulaire et les cellules accorde avec les fonctions de stress g&#xE9;n&#xE9;ral de protection lors de l&#x26;#39;arrestation de croissance. Nous montrons que les mutations et les m&#xE9;dicaments de d&#xE9;clenchement des erreurs traductionnelles &#xE9;lever sigma (s) niveaux et la stabilit&#xE9;. En outre, les mutations am&#xE9;liorant translationnelle induction att&#xE9;nuent la fid&#xE9;lit&#xE9; du r&#xE9;gulon rpoS et emp&#xEA;cher la stabilisation du sigma (S) sur la famine de carbone. D&#xE9;stabilisation de sigma (S) par une augmentation de relecture n&#xE9;cessite la pr&#xE9;sence de la sigma (S) facteur de reconnaissance Spre (RSSB) et la prot&#xE9;ase ClpXP. Les donn&#xE9;es indiquent en outre que sigma (S) se stabilise sur la famine &#xE0; la suite de la s&#xE9;questration et ClpP cette s&#xE9;questration est renforc&#xE9;e par des modifications d&#x26;#39;oxydation de prot&#xE9;ines aberrantes produites par translation erron&#xE9;e. Surproduction ClpP contrecarr&#xE9;e inanition induite stabilisation de sigma (S), tandis que la surproduction d&#x26;#39;un substrat ClpXP (ssrA-marqu&#xE9; GFP) stabilis&#xE9; sigma (S) dans des cellules en croissance exponentielle. Nous pr&#xE9;sentons un mod&#xE8;le pour la s&#xE9;quence d&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nements conduisant &#xE0; l&#x26;#39;accumulation et l&#x26;#39;activation de sigma (S) sur la famine de carbone, qui sont li&#xE9;s &#xE0; des alt&#xE9;rations de la fois la fid&#xE9;lit&#xE9; du ribosome et l&#x26;#39;efficacit&#xE9;.

Baisse de la Fidelity Ribosomal contribue &#xE0; l&#x26;#39;accumulation et &#xE0; la stabilisation des Sigmas stress r&#xE9;gulateur ma&#xEE;tre r&#xE9;ponse sur la famine de carbone

Die Sigma (S)-Untereinheit der RNA-Polymerase ist ein Meister Regulator von Escherichia coli, der verz&ouml;gert zellul&auml;ren Seneszenz und Zellen mit allgemeine Stress-Schutzfunktionen w&auml;hrend Wachstumanhalten schenkt. Wir zeigen, dass Mutationen und Drogen translationale St&ouml;rungen ausl&ouml;sen Sigma (S) Ebenen und Stabilit&auml;t zu erh&ouml;hen. Andererseits Mutationen, die Verbesserung der translatorischen Treue d&auml;mpfen Induktion von RpoS-Regulon und Stabilisierung des Sigma (S) auf Kohlenstoff verhungern verhindern. Destabilisierung des Sigma (S) durch erh&ouml;hte Korrekturlesen erfordert die Anwesenheit von der Sigma (S)-Wiedererkennung SprE (RssB) und die ClpXP-Protease. Weitere Daten zufolge Sigma (S) auf Hunger infolge ClpP-Sequestrierung stabilisiert wird und diese Bindung wird durch oxidative Modifikationen der abweichenden Proteine produziert durch fehlerhafte &Uuml;bersetzung verbessert. ClpP-&Uuml;berproduktion entgegengewirkt induziert durch Verhungern Stabilisierung des Sigma (S), w&auml;hrend die &Uuml;berproduktion von einem ClpXP Substrat (SsrA markiert GFP) Sigma (S) stabilisiert in exponentiell wachsende Zellen. Wir pr&auml;sentieren ein Modell f&uuml;r die Abfolge der Ereignisse, die zur Akkumulation und Aktivierung von Sigma (S) auf CO2-Hunger, die mit &Auml;nderungen in ribosomal Treue und Effizienz verkn&uuml;pft sind.

R&uuml;ckgang der ribosomal Treue tr&auml;gt zur Anh&auml;ufung und Stabilisierung der Meister Druck Antwort Regler SigmaS auf CO2-Hunger.

La subunit&agrave; sigma (S) del RNA polimerasi &egrave; un regolatore master di Escherichia coli che ritarda la senescenza cellulare e concede le cellule con funzioni di protezione generale stress durante l&#39;arresto di sviluppo. Mostriamo che mutazioni e farmaci innescando errori traslazionali elevano stabilit&agrave; e livelli di sigma (S). Inoltre, mutazioni migliorare la fedelt&agrave; traslazionale attenuano induzione del Regulone rpoS e impediscono la stabilizzazione del sigma (S) su fame di carbonio. Destabilizzazione del sigma (S) di correzione maggiore richiede la presenza di fattore di riconoscimento del sigma (S) SprE (RssB) e la proteasi ClpXP. Ulteriormente i dati suggeriscono che sigma (S) diventa stabilizzato sulla fame in seguito a sequestro del ClpP e questo sequestro &egrave; rafforzato da ossidativa modifiche di proteine aberranti prodotte dalla traduzione errata. ClpP sovrapproduzione contrastato stabilizzazione indotta da fame di sigma (S), considerando che una sovrapproduzione di un substrato ClpXP (ssrA-tagged GFP) stabilizzato sigma (S) in cellule in crescita esponenziale. Vi presentiamo un modello per la sequenza di eventi che portano all&#39;accumulo e attivazione del sigma (S) su fame di carbonio, che sono legate ad alterazioni sia fedelt&agrave; ribosomiale e l&#39;efficienza.

Declino nella fedelt&agrave; ribosomiale contribuisce per l&#39;accumulazione e la stabilizzazione della Sigma di regolatore master stress risposta alla fame di carbonio.

RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#xFF08;S&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x505C;&#x6B62;&#x6642;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4FDD;&#x8B77;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8001;&#x5316;&#x3068;&#x8D08;&#x4E0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x9045;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x85AC;&#x5264;&#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#xFF08;S&#xFF09;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;RPOS&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#xFF08;S&#xFF09;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x6821;&#x6B63;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x7387;SPRE&#xFF08;RssB&#xFF09;&#x3068;ClpXP&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#xFF08;S&#xFF09;&#x304C;ClpP&#x9694;&#x96E2;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x8AA4;&#x3063;&#x305F;&#x5909;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; ClpP&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;ClpXP&#x57FA;&#x677F;&#xFF08;SSRA&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;GFP&#xFF09;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x6B96;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3C3;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306E;&#x98E2;&#x9913;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3092;&#x76F8;&#x6BBA;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x3068;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x6642;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x70AD;&#x7D20;&#x98E2;&#x9913;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#xB7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30DE;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;

RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC138;&#xD3EC; &#xB178;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC80;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xD638; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC900;&#xB2E4;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC870;&#xC808;&#xAE30;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCC0;&#xD658; &#xC624;&#xB958;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD558;&#xB294; &#xB9C8;&#xC57D; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S) &#xB808;&#xBCA8;&#xACFC; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBCC0;&#xD658; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xB3C4; rpoS regulon&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0; &#xBC0F; &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S)&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0;. &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S) &#xC99D;&#xAC00; &#xAD50;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD88;&#xC548; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S) &#xC778;&#xC2DD; &#xC694;&#xC18C; SprE (RssB)&#xC640; ClpXP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xCD94;&#xAC00; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S) ClpP &#xACA9;&#xB9AC; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC544;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC774; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB294; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC81C;&#xC791;&#xD55C; &#xD0C8; &#xC120; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xD654; &#xB418;&#xB294; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ClpP &#xACFC;&#xC789; counteracted &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (&#xB4E4;)&#xC758; &#xAE30;&#xC544; &#xC720;&#xB3C4; &#xC548;&#xC815;&#xD654; ClpXP &#xAE30;&#xD310; (ssrA &#xD0DC;&#xADF8; GFP)&#xC758; &#xACFC;&#xC789; &#xAE30; &#xD558; &#xAE09;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S)&#xC744; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xCD95;&#xC801; &#xBC0F; &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB9C8; (S)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; ribosomal &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ribosomal &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xCD95;&#xC801;&#xACFC; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; sigmaS &#xD0C4;&#xC18C; &#xAE30;&#xC544; &#xC2DC;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

El sigma (S) subunidad de la RNA polimerasa es un regulador maestro de Escherichia coli que retarda la senescencia celular y las c&#xE9;lulas otorga con funciones generales de protecci&#xF3;n de tensi&#xF3;n durante la detenci&#xF3;n del crecimiento. Se demuestra que las mutaciones y los medicamentos que desencadenan los errores de traducci&#xF3;n elevar sigma (S) los niveles y la estabilidad. Por otra parte, las mutaciones mejorando la inducci&#xF3;n de traslaci&#xF3;n atenuar la fidelidad del regul&#xF3;n rpoS e impedir la estabilizaci&#xF3;n de sigma (S) a la inanici&#xF3;n de carbono. La desestabilizaci&#xF3;n de sigma (S) por el aumento de correcci&#xF3;n de pruebas requiere la presencia de la sigma (S) reconocimiento factor de SPRE (RSSB) y la proteasa ClpXP. Los datos sugieren adem&#xE1;s que sigma (S) se estabiliza a la inanici&#xF3;n como resultado de la captura de ClpP y este secuestro se ve reforzada por modificaciones oxidativas de prote&#xED;nas aberrantes producidos por traducci&#xF3;n err&#xF3;nea. Sobreproducci&#xF3;n ClpP contrarrestar la hambruna inducida por la estabilizaci&#xF3;n de sigma (S), mientras que la sobreproducci&#xF3;n de un sustrato ClpXP (ssrA marcada con GFP) estabilizado sigma (S) en c&#xE9;lulas de crecimiento exponencial. Se presenta un modelo para la secuencia de eventos que conducen a la acumulaci&#xF3;n y activaci&#xF3;n de sigma (S) a la inanici&#xF3;n de carbono, que se vinculan con alteraciones tanto en la fidelidad ribosomal y la eficiencia.

Disminuci&#xF3;n de la fidelidad Ribosomal contribuye a la acumulaci&#xF3;n y estabilizaci&#xF3;n de los sigmas estr&#xE9;s maestro regulador de la respuesta a la inanici&#xF3;n de carbono

&#x751F;&#x7269;&#x6816;&#x606F;&#x8089;&#x98DF;&#x732A;&#x7B3C;&#x8349;&#x5C71;&#x5730;&#x74F6;&#x5B50;&#x83CA;&#x7684;&#x5145;&#x6C34;&#x53F6;&#x5B50;&#x7684;&#x793E;&#x533A;&#x5305;&#x62EC;&#x8282;&#x80A2;&#x52A8;&#x7269;&#x3001; &#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x98DF;&#x7269;&#x7F51;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6570;&#x636E;&#x6536;&#x96C6;&#x7684;&#x751F;&#x6001;&#x5B66;&#x5BB6;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#x5B66;&#x5BB6;&#x5BF9;&#x6B64;&#x98DF;&#x7269;&#x7F51;&#x7684;&#x8D22;&#x5BCC;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5F88;&#x5C11;&#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x6B64;&#x5FAE;&#x751F;&#x6001;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x7247;&#x6BB5;&#x957F;&#x5EA6;&#x591A;&#x6001;&#x6027; (T-RFLP) &#x5206;&#x6790;&#x6765;&#x91CF;&#x5316;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6295;&#x624B;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3001; &#x6295;&#x624B;&#x6DB2;&#x7684; ph &#x503C;&#x548C;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x57FA;&#x77F3;&#x6355;&#x98DF;&#x6B64;&#x98DF;&#x7269;&#x7F51;&#x4E2D;&#x5E7C;&#x866B;&#x7684;&#x6295;&#x624B;&#x690D;&#x7269;&#x868A;&#x5B50; Wyeomyia &#x830E;&#x5185;&#x6295;&#x624B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x5728;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x6CBC;&#x6CFD;&#x5185;&#x548C;&#x8DE8;&#x4E09;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x6CBC;&#x6CFD;&#x3002;&#x4E4B;&#x524D;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6253;&#x5F00;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E86;&#x591A;&#x4E2A;&#x53D8;&#x91CF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6CBC;&#x6CFD;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x683C;&#x65AF;&#x5185;&#x6295;&#x624B;&#x6709;&#x4E0D;&#x80B2;&#x3002;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x4E30;&#x5BCC;&#x6027;&#x548C;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x662F;&#x5728;&#x5728;&#x573A;&#x7684; W.&#x53F2;&#x5BC6;&#x65AF;&#x6849;&#x66F4;&#x5927;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x6295;&#x624B;&#x5927;&#x5C0F;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5B8F;&#x89C2;&#x98DF;&#x7269;&#x94FE;&#x4ECE;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x751F;&#x6001;&#x6982;&#x5FF5;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x9884;&#x6D4B;&#x732A;&#x7B3C;&#x8349;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7FA4;&#x843D;&#x3002;

&#x57FA;&#x77F3;&#x6355;&#x98DF;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x83CC;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x732A;&#x7B3C;&#x8349; (&#x5C71;&#x5730;&#x74F6;&#x5B50;&#x83CA;) &#x5FAE;&#x751F;&#x6001;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

The community of organisms inhabiting the water-filled leaves of the carnivorous pitcher-plant Sarracenia purpurea includes arthropods, protozoa and bacteria, and serves as a model system for studies of food web dynamics. Despite the wealth of data collected by ecologists and zoologists on this food web, very little is known about the bacterial assemblage in this microecosystem. We used terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP) analysis to quantify bacterial diversity within the pitchers as a function of pitcher size, pH of the pitcher fluid and the presence of the keystone predator in this food web, larvae of the pitcher-plant mosquito Wyeomyia smithii. Results were analysed at two spatial scales: within a single bog and across three isolated bogs. Pitchers were sterile before they opened and composition of the bacterial assemblage was more variable between different bogs than within bogs. Measures of bacterial richness and diversity were greater in the presence of W. smithii and increased with increasing pitcher size. Our results suggest that fundamental ecological concepts derived from macroscopic food webs can also be used to predict the bacterial assemblages in pitcher plants.

A keystone predator controls bacterial diversity in the pitcher-plant (Sarracenia purpurea) microecosystem.

La communaut&#xE9; d&#x26;#39;organismes vivant dans les feuilles remplies d&#x26;#39;eau de la carnivores sarrac&#xE9;nie Sarracenia purpurea comprend des arthropodes, des protozoaires et des bact&#xE9;ries, et sert en tant que syst&#xE8;me mod&#xE8;le pour les &#xE9;tudes de dynamique du r&#xE9;seau alimentaire. Malgr&#xE9; la richesse des donn&#xE9;es collect&#xE9;es par les &#xE9;cologistes et les zoologistes sur cette cha&#xEE;ne alimentaire, on sait tr&#xE8;s peu sur le rassemblement bact&#xE9;rienne dans ce micro-&#xE9;cosyst&#xE8;me. Nous avons utilis&#xE9; la borne de longueur des fragments de restriction polymorphisme (T-RFLP) pour quantifier la diversit&#xE9; bact&#xE9;rienne dans les cruches en fonction de la taille de lanceur, le pH du fluide lanceur et la pr&#xE9;sence du pr&#xE9;dateur cl&#xE9; de vo&#xFB;te de cette cha&#xEE;ne alimentaire, les larves de la sarrac&#xE9;nie pourpre moustiques Wyeomyia smithii. Les r&#xE9;sultats ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s &#xE0; deux &#xE9;chelles spatiales: dans une tourbi&#xE8;re unique et &#xE0; travers trois tourbi&#xE8;res isol&#xE9;es. Pichets &#xE9;taient st&#xE9;riles avant leur ouverture et la composition de l&#x26;#39;assemblage bact&#xE9;rienne &#xE9;tait plus variable entre les tourbi&#xE8;res diff&#xE9;rentes de celles dans les tourbi&#xE8;res. Les mesures de la richesse et la diversit&#xE9; bact&#xE9;rienne sont plus &#xE9;lev&#xE9;s dans la pr&#xE9;sence de W. smithii et augmentait avec la taille croissante lanceur. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les concepts fondamentaux &#xE9;cologiques issus de r&#xE9;seaux trophiques macroscopiques peuvent &#xE9;galement &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour pr&#xE9;dire les assemblages bact&#xE9;riens dans les usines de pichet.

Un Predator Keystone Controls diversit&#xE9; bact&#xE9;rienne dans la sarrac&#xE9;nie pourpre (Sarracenia purpurea) micro-&#xE9;cosyst&#xE8;me

Die Gemeinschaft von Organismen bewohnen die wassergef&uuml;llten Bl&auml;ttern die fleischfressende Kannenpflanze Schlauchpflanze Purpurea umfasst Arthropoden, Protozoen und Bakterien und dient als Modellsystem f&uuml;r Studien des Nahrungsnetzes Dynamik. Trotz der F&uuml;lle von Daten, zusammengestellt von &Ouml;kologen und Zoologen diese Lebensmittel-Web ist sehr wenig &uuml;ber die bakterielle Gef&uuml;ge in dieser Microecosystem bekannt. Wir verwendeten terminal Beschr&auml;nkung Fragment-L&auml;nge Polymorphie (T-RFLP) Analyse, um bakteriellen Vielfalt innerhalb der Kannen als Funktion der Krug Gr&ouml;&szlig;e, pH-Wert der Krug Fl&uuml;ssigkeit und das Vorhandensein von Keystone Predator in diesem Nahrungsnetz, Larven der Kannenpflanze Moskito Wyeomyia Smithii zu quantifizieren. Ergebnisse wurden analysiert, um zwei r&auml;umlichen Skalen: innerhalb einer einzigen Moor und &uuml;ber drei isolierten Mooren. Kannen wurden steril, bevor sie ge&ouml;ffnet und Zusammensetzung des bakteriellen Gef&uuml;ges mehr Variable zwischen verschiedenen Mooren als innerhalb von Mooren war. Ma&szlig;nahmen der bakteriellen Reichtum und die Vielfalt in Anwesenheit von W. Smithii gr&ouml;&szlig;er waren und stieg mit zunehmender Gr&ouml;&szlig;e der Krug. Unsere Ergebnisse legen nahe, &ouml;kologische Grundbegriffe von makroskopischen Nahrungsnetze abgeleitet k&ouml;nnen auch verwendet werden, die bakteriellen Assemblagen in Kannenpflanzen vorherzusagen.

Ein Schlussstein Raubtier steuert bakteriellen Vielfalt in die Schlauchpflanze (Sarracenia Purpurea)-Microecosystem.

La comunit&agrave; di organismi che abitano le foglie piene d&#39;acqua della brocca-pianta carnivora Sarracenia purpurea include artropodi, protozoi e batteri e serve come sistema di modello per gli studi di food web dinamiche. Nonostante la ricchezza dei dati raccolti da ecologisti e zoologi sul web alimento, molto poco si sa circa l&#39;assemblaggio batterica in questa microecosystem. Abbiamo usato analisi di polimorfismo (T-RFLP) della lunghezza di frammento terminale limitazione per quantificare la diversit&agrave; batterica all&#39;interno le brocche come una funzione delle dimensioni del lanciatore, il pH del fluido brocca e la presenza del predatore keystone nel web cibo, larve della pianta carnivora zanzara Wyeomyia smithii. Risultati sono stati analizzati in due scale spaziali: all&#39;interno di una singola palude e attraverso tre paludi isolati. Brocche erano sterili prima hanno aperto e composizione dell&#39;assemblaggio batterica &egrave; stato pi&ugrave; variabile tra diverse torbiere rispetto all&#39;interno di torbiere. Misure di diversit&agrave; e ricchezza batterica sono stati superiori in presenza di w. smithii e aumenta con l&#39;aumento di dimensioni del lanciatore. I nostri risultati suggeriscono che fondamentali concetti ecologici derivati dalla macroscopica food webs possono essere utilizzati anche per prevedere gli assemblaggi batterici in piante carnivore.

Un predatore trapezoidale controlla diversit&agrave; batterica in microecosystem il lanciatore-pianta (Sarracenia purpurea).

&#x30D7;&#x30EC;&#x30A2;&#x8089;&#x98DF;&#x6295;&#x624B;&#x690D;&#x7269;&#x30B5;&#x30E9;&#x30BB;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x6C34;&#x3067;&#x6E80;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8449;&#x306B;&#x751F;&#x606F;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x7BC0;&#x8DB3;&#x52D5;&#x7269;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x98DF;&#x7269;&#x7DB2;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7CFB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x98DF;&#x7269;&#x7DB2;&#x306E;&#x751F;&#x614B;&#x3068;&#x52D5;&#x7269;&#x5B66;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5BCC;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;microecosystem&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6295;&#x624B;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3001;&#x6295;&#x624B;&#x6DB2;&#x306E;pH&#x3068;&#x6295;&#x624B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x98DF;&#x7269;&#x7DB2;&#x3001;&#x5E7C;&#x866B;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30F3;&#x6355;&#x98DF;&#x8005;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6295;&#x624B;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7AEF;&#x672B;&#x5236;&#x9650;&#x65AD;&#x7247;&#x9577;&#x591A;&#x578B;&#xFF08;T-RFLP&#xFF09;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x868A;Wyeomyia&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x6E7F;&#x539F;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x6CBC;&#x5730;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#xFF1A;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x958B;&#x304B;&#x308C;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x6E7F;&#x539F;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6E7F;&#x539F;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x6295;&#x624B;&#x306F;&#x7121;&#x83CC;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3068;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306E;&#x5BFE;&#x7B56;&#x306F;&#x3001;W.&#x30B9;&#x30DF;&#x30B9;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x6295;&#x624B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x98DF;&#x7269;&#x7DB2;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x614B;&#x7CFB;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6295;&#x624B;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AD;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x30D4;&#x30C3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#xB7;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;&#x30A8;&#x30AD;&#x30CA;&#x30BB;&#x30A2;&#x30B5;&#x30E9;&#x30BB;&#x30CB;&#x30A2;&#xFF09;Microecosystem&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xC721; &#xC2DD; &#xD22C; &#xC218; &#xACF5;&#xC7A5; sarracenia&#xC758; &#xD478; &#xBB3C; &#xAC00;&#xB4DD; &#xC78E;&#xC5D0; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; arthropods, &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;, &#xC6D0;&#xC0DD; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC74C;&#xC2DD; &#xC6F9; &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC774; &#xBA39;&#xC774; &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xD0DC;&#xD559; zoologists&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC70;&#xC758;&#xC774; microecosystem&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD22C; &#xC218; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xD568;&#xC218;, &#xD22C; &#xC218; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xAE30; Wyeomyia smithii&#xC758; &#xC560;&#xBC8C;&#xB808; &#xD22C; &#xC218; &#xC561;&#xCCB4;&#xC758; Ph&#xC640;&#xC774; &#xD478;&#xB4DC; &#xC6F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0A4;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xD504;&#xB808;&#xB370;&#xD130;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB85C; &#xC11C; &#xD22C; &#xC218; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC81C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; (RFLP T) &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;: 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC2B5;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB2AA;&#xC9C0; &#xB0B4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC5F4;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC138;&#xADE0; &#xC870;&#xB9BD;&#xC758; &#xC2B5;&#xC9C0; &#xB0B4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2B5;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xBCC0;&#xC218;&#xB294; &#xC804;&#xC5D0; &#xD22C; &#xC218; &#xC0B4; &#xADE0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; W. smithii&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB354; &#xD070; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD22C; &#xC218; &#xD06C;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC74C;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC70;&#xBBF8;&#xC904;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0DD;&#xD0DC; &#xAC1C;&#xB150; &#xD22C; &#xC218; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0; assemblages &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0A4;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xD504;&#xB808;&#xB370;&#xD130; &#xD22C; &#xC218; &#xACF5;&#xC7A5; (sarracenia&#xC758; &#xD478;) microecosystem&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La comunidad de organismos que habitan en las hojas llenas de agua de la jarra de la planta carn&#xED;vora Sarracenia purpurea incluye artr&#xF3;podos, protozoos y bacterias, y sirve como un sistema modelo para el estudio de la din&#xE1;mica de la comida web. A pesar de la riqueza de los datos recogidos por los ecologistas y los zo&#xF3;logos en esta red de alimentos, muy poco se sabe sobre el conjunto de bacterias en este microecosistema. Se utiliz&#xF3; fragmentos de restricci&#xF3;n terminales polimorfismo en la longitud (T-RFLP) para cuantificar la diversidad de bacterias dentro de los lanzadores en funci&#xF3;n del tama&#xF1;o de la jarra, el pH del l&#xED;quido de la jarra y la presencia del depredador clave en esta cadena alimenticia, las larvas de la jarra de la planta mosquitos Wyeomyia smithii. Los resultados se analizaron en dos escalas espaciales: dentro de un pantano a trav&#xE9;s de tres simple y pantanos aislados. Los lanzadores eran est&#xE9;riles antes de que abrieran y la composici&#xF3;n de la asamblea bacteriana fue m&#xE1;s variable entre las diferentes ci&#xE9;nagas que dentro de los pantanos. Las medidas de la riqueza y la diversidad bacteriana fue mayor en la presencia de W. smithii y aumenta con el tama&#xF1;o cada vez mayor el lanzador. Nuestros resultados sugieren que los conceptos fundamentales ecol&#xF3;gicos derivados de las redes alimentarias macrosc&#xF3;picas tambi&#xE9;n puede ser utilizado para predecir las asociaciones bacterianas en las plantas de jarra.

Un depredador clave Controles de la diversidad bacteriana en la jarra de la planta (Sarracenia purpurea) microecosistema

&#x5171;&#x751F;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6816;&#x606F;&#x5730;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7FA4;&#x843D;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7684;&#x5206;&#x96C6;&#x8DE8;&#x591A;&#x4E2A;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5730;&#x8863;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x7247;&#x6BB5;&#x957F;&#x5EA6;&#x591A;&#x6001;&#x6027; (T-RFLP) &#x548C;&#x7126;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5730;&#x8863;&#x623F;&#x5B50;&#x66F4;&#x4E30;&#x5BCC;&#x3001; &#x66F4;&#x4E00;&#x81F4;&#x7EC4;&#x5408;&#x6BD4;&#x7269;&#x79CD;&#x7A77;&#x4EBA;&#x548C;&#x7EC4;&#x5206;&#x4E0D;&#x540C;&#x6241;&#x5E73;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x751F;&#x6001;&#x6F14;&#x66FF;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x6784;&#x5EFA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x793E;&#x533A;&#x4E2D;&#x3002;

&#x8DE8;&#x5355;&#x4E2A;&#x5730;&#x8863;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

Symbioses are unique habitats for bacteria. We surveyed the spatial diversity of bacterial communities across multiple individuals of closely related lichens using terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP) and pyrosequencing. Centers of lichens house richer, more consistent assemblages than species-poor and compositionally disparate lichen edges, suggesting that ecological succession plays a role in structuring these communities.

Bacterial diversity across individual lichens.

Symbioses sont des habitats uniques pour les bact&#xE9;ries. Nous avons interrog&#xE9; la diversit&#xE9; spatiale des communaut&#xE9;s bact&#xE9;riennes dans plusieurs individus de lichens sont &#xE9;troitement li&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide de restriction terminaux de longueur des fragments polymorphisme (T-RFLP) et pyros&#xE9;quen&#xE7;age. Centres de lichens maison plus riche, plus coh&#xE9;rents que les assemblages d&#x26;#39;esp&#xE8;ces aux pauvres et de la composition disparates bords de lichens, ce qui sugg&#xE8;re que la succession &#xE9;cologique joue un r&#xF4;le dans la structuration de ces communaut&#xE9;s.

La diversit&#xE9; bact&#xE9;rienne travers lichens individuels

Symbiosen sind einzigartige Lebensr&auml;ume f&uuml;r Bakterien. Wir befragten die r&auml;umliche Vielfalt der bakteriellen Gemeinschaften &uuml;ber mehrere Personen von eng verwandten Flechten mit terminal Beschr&auml;nkung Fragment-L&auml;nge Polymorphie (T-RFLP) und Pyrosequencing. Zentren der Flechten Haus reichere, konsistentere Assemblagen als Arten-Armen und kompositorisch uneinheitlich Flechte R&auml;nder, was darauf hindeutet, dass Sukzession eine Rolle spielt bei der Strukturierung dieser Gemeinschaften.

Bakteriellen Vielfalt &uuml;ber einzelne Flechten.

Simbiosi sono unico habitat per i batteri. Noi intervistati la diversit&agrave; territoriale delle comunit&agrave; batteriche attraverso molteplici individui di licheni strettamente correlati mediante terminale restriction fragment length polymorphism (T-RFLP) e pyrosequencing. Centri di licheni casa assemblaggi pi&ugrave; ricchi, pi&ugrave; coerenti rispetto i bordi di lichene specie-poveri e composizionale disparati, suggerendo che la successione ecologica svolge un ruolo nella strutturazione di queste comunit&agrave;.

Diversit&agrave; batterica attraverso singoli licheni.

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&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x5730;&#x8863;&#x30A2;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;

Symbioses&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xC720; &#xC11C;&#xC2DD; &#xC9C0;. &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC81C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; (RFLP T) &#xBC0F; pyrosequencing&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC774;&#xB07C;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC138;&#xADE0; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB07C;&#xC758; &#xC13C;&#xD130; &#xC9D1; &#xBD80;&#xC790;, &#xB354; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131; assemblages &#xC885; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; compositionally &#xC774;&#xB07C; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xD0DC; &#xACC4;&#xC2B9;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC774; &#xC0AC;&#xD68C;&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD95;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xAC1C;&#xBCC4; &#xC774;&#xB07C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC138;&#xADE0; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Simbiosis son h&#xE1;bitats &#xFA;nicos para las bacterias. Se encuest&#xF3; a la diversidad espacial de las comunidades bacterianas a trav&#xE9;s de varios individuos de l&#xED;quenes estrechamente relacionadas con fragmentos de restricci&#xF3;n terminales polimorfismo en la longitud (T-RFLP) y la pirosecuenciaci&#xF3;n. Centros de l&#xED;quenes casa de ricos, los conjuntos m&#xE1;s consistentes que los pobres en especies de l&#xED;quenes y los bordes de composici&#xF3;n dispares, lo que sugiere que la sucesi&#xF3;n ecol&#xF3;gica juega un papel en la estructuraci&#xF3;n de estas comunidades.

A trav&#xE9;s de la diversidad bacteriana l&#xED;quenes individuales

The master regulator of stationary phase in Escherichia coli, RpoS, responds to carbon availability through changes in stability, but the individual steps in the pathway are unknown. Here we systematically block key steps of glycolysis and the citric acid cycle and monitor the effect on RpoS degradation in vivo. Nutrient upshifts trigger RpoS degradation independently of protein synthesis by activating metabolic pathways that generate small energy molecules. Using metabolic mutants and inhibitors, we show that ATP, but not GTP or NADH, is necessary for RpoS degradation. In vitro reconstitution assays directly demonstrate that ClpXP fails to degrade RpoS, but not other proteins, at low ATP hydrolysis rates. These data suggest that cellular ATP levels directly control RpoS stability.

RpoS proteolysis is controlled directly by ATP levels in Escherichia coli.

There is widespread agreement that science, technology, engineering, and mathematics programs should provide undergraduates with research experience. Practical issues and limited resources, however, make this a challenge. We have developed a bioinformatics project that provides a course-based research experience for students at a diverse group of schools and offers the opportunity to tailor this experience to local curriculum and institution-specific student needs. We assessed both attitude and knowledge gains, looking for insights into how students respond given this wide range of curricular and institutional variables. While different approaches all appear to result in learning gains, we find that a significant investment of course time is required to enable students to show gains commensurate to a summer research experience. An alumni survey revealed that time spent on a research project is also a significant factor in the value former students assign to the experience one or more years later. We conclude: 1) implementation of a bioinformatics project within the biology curriculum provides a mechanism for successfully engaging large numbers of students in undergraduate research; 2) benefits to students are achievable at a wide variety of academic institutions; and 3) successful implementation of course-based research experiences requires significant investment of instructional time for students to gain full benefit.

Celeste Peterson

Department of Microbiology and Molecular Genetics

Harvard Medical School

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)